【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于质粒生产，具体涉及一种提高质粒超螺旋比例的方法。
技术介绍
1、质粒载体的纯度(包括超螺旋比例和内毒含量等)会影响到下游病毒的包装和基因治疗的疗效。质粒可以分为开环、超螺旋、复制中间体等。开环会导致功能基因的失活，让病毒包装效能或者体内疗效下降，因此超螺旋比例是质粒的关键质量属性，也是质粒纯化过程中的关键控制点。
2、随着基因治疗和细胞治疗获得越来越多的关注和研究，质粒在dna疫苗、基因治疗和细胞治疗有着广泛应用。相比其它拓扑结构的质粒dna，超螺旋结构的质粒在应用治疗中最为有效，转染效率更高。这是因为超螺旋质粒结构极度紧密，更易于进入细胞核，并且是唯一适应于在真核细胞中表现生物活性的天然完整结构。所以获得高含量的超螺旋质粒dna十分重要。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种提高质粒超螺旋比例的方法，以解决质粒超螺旋比例不高的问题。
2、本专利技术的目的可以通过以下技术方案实现：
3、一种提高质粒超螺旋比例的方法，包括如下步骤：
4、第一步、选取质粒图谱当中限制性内切的酶切位点，选取ndei限制性内切酶将质粒线性化；
5、第二步、将线性化质粒使用t4 dna连接酶进行连接反应；
6、第三步、连接成功的产物，转化stbl3感受态细胞涂平板30℃过夜培养；
7、第四步、摇菌并提取质粒，提取出的质粒进行凝胶电泳；
8、第五步、选择螺旋形态和大小符合预期的质粒进行测序验
9、第六步、测序验证正确的质粒转化stbl3感受态细胞涂平板30℃过夜培养；
10、第七步、摇菌提取质粒、筛选。
11、本专利技术的有益效果：
12、本专利技术提供了一种提高质粒超螺旋比例的方法，包括限制内切酶酶切和t4 dna连接反应，然后经过培养、筛选、培养、筛选提高质粒超螺旋比例，有效解决现有纯化条件导致的超螺旋比例不高的问题。本专利技术的操作可行性强，纯化出的质粒质量高。
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1.一种提高质粒超螺旋比例的方法，其特征在于，包括如下步骤：
【技术特征摘要】
1.一种提高质粒超螺旋比例的方...
【专利技术属性】
技术研发人员：喻明军，崔康乐，王维坤，骆晓文，纪世春，金芳，陶勇，
申请(专利权)人：通用生物安徽股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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