【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于核酸检测，具体涉及一种用于快速检测手足口病合并病毒性脑炎的试剂盒。
技术介绍
1、手足口病(hand foot mouth disease,hfmd)是由肠道病毒引起的常见传染病，本病在临床上以手、足、口腔疱疹为主要特征，故通称为手足口病。引发手足口病的肠道病毒有20多种，其中以柯萨奇病毒a组16型(coxsackie-virus 16,ca16)和肠道病毒71型(enter-virus 71,ev71)最为常见。该疾病主要通过消化道、呼吸道和密切接触等途径传播。临床主要表现为发热、口腔和四肢末端的斑丘疹、疱疹，重者可出现脑膜炎、脑炎、脑脊髓炎、肺水肿和循环障碍等。致死原因主要为脑干脑炎及神经源性肺水肿。由于病毒的传染性很强，常常造成流行性疾病。手足口病的检查对于诊断手足口病十分关键，不仅可以判断手足口病的病因和病情严重程度，还对后续手足口病治疗有着重要作用。
2、病毒性脑炎(viral encephalitis,ve)是由于病毒侵袭脑实质引起的一种中枢神经系统感染性疾病，目前其发病率在5/10万左右，多发病于小儿。病毒性脑炎还可诱发机体出现脊髓炎、脑干脑炎，常见症状及体征包括抽搐、局灶性神经症状、发热、头痛、呕吐、颈强直、意识障碍等。手足口病合并脑炎患儿可导致病情恶化，不单是直接侵犯神经元，还可通过释放各种炎症因子，导致血管内皮细胞通透性，导致神经系统的进一步损害。流行性乙型脑炎是常见的中枢神经系统感染性疾病，由乙型脑炎病毒(japanese encephalitisvirus，jev)感染引起，疾病
3、可见，柯萨奇病毒a16型、肠道病毒71型和乙型脑炎病毒都能够通过特定的方式参与脑炎疾病的发展。对于手足口病，在大规模流行时，根据临床症状及体征，尤其是口腔、手足部位的典型皮疹分布特点，诊断不困难。但在散发时，因临床表现与疱疹性咽颊炎、风疹、单纯疱疹性口炎有类似的地方，所以对临床医生的诊断造成一定的困难。同样，乙型脑炎临床表现与中毒性菌痢、化脓性脑膜炎、结核性脑膜炎等相似，产生误诊导致误治，给患者造成了不良后果。因此，对手足口病和病毒性脑炎的早期诊断及传染性的判断是预防和治疗疾病的关键。
4、对于手足口病和流行性乙型脑炎病原体的检测，有待开发一种一管反应液检测多种靶标，提高检测速度，并具有方法简单、检出率高等优点的检测方法。
技术实现思路
1、为了解决上述问题，本专利技术提供了一种用于检测手足口病合并病毒性脑炎相关病原体的引物探针组合物，该组合物包括柯萨奇病毒a16型、肠道病毒71型、乙型脑炎病毒和内标的引物和探针，能够同时有效检测柯萨奇病毒a16型、肠道病毒71型和乙型脑炎病毒，并对其进行定性分析。
2、一方面，本专利技术提供了一种用于检测手足口病合并病毒性脑炎相关病原体的引物探针组合物，该组合物包括检测柯萨奇病毒a16型、肠道病毒71型和乙型脑炎病毒的引物和探针；
3、所述的柯萨奇病毒a16型的正向引物、反向引物及探针的核苷酸序列依次为seqid no.1、seq id no.3和seq id no.2；
4、所述的肠道病毒71型的正向引物、反向引物及探针的核苷酸序列依次为seq idno.4、seq id no.6和seq id no.5；
5、所述的乙型脑炎病毒的正向引物、反向引物及探针的核苷酸序列依次为seq idno.7、seq id no.9和seq id no.8。
6、具体地，该组合物还包括内标的引物和探针；所述内标的正向引物、反向引物及探针的核苷酸序列依次为seq id no.10、seq id no.11和seq id no.12。
7、具体地，各组合物的各成分以混合的方式存在。
8、具体地，所述的探针均在5'端连有荧光基团，3'端连有淬灭基团，且探针上的荧光基团互不干扰。
9、进一步具体地，前述的探针5'端标记的荧光基团可以选自fam、vic、tet、cal gold540、joe、hex、tamra、rox、cy3或cy5；3'端标记的淬灭基团可以选自dabcyl、bhq-1、bhq-2、bhq-3或eclipe。
10、优选地，ca16标记的荧光基团为fam；ev71标记的荧光基团为hex(或vic)；jev标记的荧光基团为rox；内标标记的荧光基团为cy5。
11、另方面，本专利技术提供了一种用于检测多种病原体的试剂盒，该试剂盒包括前述的引物探针组合物。
12、具体地，该试剂盒还可以包括核酸释放试剂、核酸提取试剂、pcr缓冲液、mg2+、dntps、taq酶、rt酶或depc水中的至少一种。
13、具体地，该试剂盒还包括但不限于：阴性质控品和阳性质控品。
14、具体地，所述的病原体为检测柯萨奇病毒a16型、肠道病毒71型和/或乙型脑炎病毒。
15、具体地，所述的柯萨奇病毒a16型的正向引物使用浓度可以是0.15pmol/μl-0.50pmol/μl，反向引物使用浓度可以是0.15pmol/μl-0.50pmol/μl，探针使用浓度可以是0.12pmol/μl-0.30pmol/μl。
16、优选地，所述的柯萨奇病毒a16型的正向引物使用浓度为0.25pmol/μl，反向引物使用浓度为0.25pmol/μl，探针使用浓度为0.125pmol/μl。
17、具体地，所述的肠道病毒71型的正向引物使用浓度可以是0.15pmol/μl-0.50pmol/μl，反向引物使用浓度可以是0.15pmol/μl-0.50pmol/μl，探针使用浓度可以是0.12pmol/μl-0.30pmol/μl。
18、优选地，所述的肠道病毒71型的正向引物使用浓度为0.25pmol/μl，反向引物使用浓度为0.25pmol/μl，探针使用浓度为0.125pmol/μl。
19、具体地，所述的乙型脑炎病毒的正向引物使用浓度可以是0.15pmol/μl-0.50pmol/μl，反向引物使用浓度可以是0.15pmol/μl-0.50pmol/μl，探针使用浓度可以是0.12pmol/μl-0.30pmol/μl。
20、优选地，所述的乙型脑炎病毒的正向引物使用浓度为0.25pmol/μl，反向引物使用浓度为0.25pmol/μl，探针使用浓度为0.125pmol/μl。
21、具体地，所述的内标的正向引物使用浓度可以是0.15pmol/μl-0.50pmol/μl，反向引物使用浓度可以是0.15pmol/μl-0.50pmol/μl，探针使用浓度可以是0.12pmol/μl-0.30pmol/μl。
22、优选地，所述的内标本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种用于检测手足口病合并病毒性脑炎相关病原体的引物探针组合物，其特征在于，包括检测柯萨奇病毒A16型、肠道病毒71型和乙型脑炎病毒的引物和探针；
2.根据权利要求1所述的引物探针组合物，其特征在于，还包括内标的引物和探针；所述内标的正向引物、反向引物及探针的核苷酸序列依次为SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.11和SEQ ID NO.12。
3.根据权利要求1或2所述的引物探针组合物，其特征在于，各组合物的各成分以混合的方式存在。
4.一种用于检测手足口病合并病毒性脑炎相关病原体的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒包括权利要求1-2任一项所述的引物探针组合物。
5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，还包括核酸释放试剂、核酸提取试剂、PCR缓冲液、Mg2+、dNTPs、Taq酶、RT酶或DEPC水中的至少一种。
6.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，还包括阴性质控品和阳性质控品。
7.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述的病原体为检测柯萨奇病毒A16型、肠道病毒71型和/或乙型脑
8.根据权利要求4-7任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述的柯萨奇病毒A16型的正向引物使用浓度为0.15pmol/μL-0.50pmol/μL，反向引物使用浓度为0.15pmol/μL-0.50pmol/μL，探针使用浓度为0.12pmol/μL-0.30pmol/μL；
9.根据权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，所述的探针5'端标记的荧光基团选自FAM、VIC、TET、CAL Gold 540、JOE、HEX、TAMRA、ROX、CY3或CY5；3'端标记的淬灭基团选自DABCYL、BHQ-1、BHQ-2、BHQ-3或ECLIPE。
10.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述的检测方法包括：
...【技术特征摘要】
1.一种用于检测手足口病合并病毒性脑炎相关病原体的引物探针组合物，其特征在于，包括检测柯萨奇病毒a16型、肠道病毒71型和乙型脑炎病毒的引物和探针；
2.根据权利要求1所述的引物探针组合物，其特征在于，还包括内标的引物和探针；所述内标的正向引物、反向引物及探针的核苷酸序列依次为seq id no.10、seq id no.11和seq id no.12。
3.根据权利要求1或2所述的引物探针组合物，其特征在于，各组合物的各成分以混合的方式存在。
4.一种用于检测手足口病合并病毒性脑炎相关病原体的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒包括权利要求1-2任一项所述的引物探针组合物。
5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，还包括核酸释放试剂、核酸提取试剂、pcr缓冲液、mg2+、dntps、taq酶、rt酶或depc水中的至少一种。
6.根据权利要求4所述的试剂...
【专利技术属性】
技术研发人员：王维，万旺，殷仑仑，任小梅，吴康，戴立忠，
申请(专利权)人：圣湘生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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