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【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于肿瘤免疫疗法和分子免疫学领域,尤其是抗体领域,具体涉及一种结合claudin 18.2的全人源抗体。
技术介绍
1、claudins家族广泛分布在各种上皮组织中,不同的组织可表达不同类型的claudins蛋白。紧密连接蛋白18.2(claudin 18.2)是在细胞间形成紧密连接的粘附分子,它可形成调节细胞渗透性的屏障。人claudin 18.2基因位于人第3号染色体的3q22.3,其第一个外显子存在2个等位基因,因此claudin 18.2具有两个剪切突变体—claudin 18.1和claudin18.2。两者n端氨基酸序列及细胞外的抗原表位均不同,因此可以避免发生免疫交叉反应。目前认为claudin 18.2主要受其基因编码序列中的低甲基化基因序列cpg岛启动子以及转录因子环磷腺苷效应元件结合蛋白(camp-response element blindingprotein,creb)的调节。claudin 18.1主要在肺中表达,在其他组织中鲜有表达;而claudin18.2在胃黏膜上皮细胞中表达,在胃癌、胰腺癌、食管癌等组织中的表达尤其高,在肺组织中却鲜有表达。二者组织特异性较高的特点,是claudin 18.2成为治疗性靶点的分子学基础。
2、在细胞的恶性转化过程中,细胞极性发生变化,claudin 18.2暴露在了肿瘤细胞表面,能够被抗体靶向结合,使其成为理想的单克隆抗体开发靶点,尤其是实体瘤免疫治疗。claudin 18.2可作为肿瘤诊断和治疗的潜在特异性标志物。在多种类型的恶性肿瘤中都观
3、目前,已经开发了针对claudin 18.2靶点的多项免疫治疗策略,包括单克隆抗体(mab)、双特异性抗体(bsabs)、嵌合抗原受体t细胞(car-t)疗法和抗体偶联药物(adcs)。其中进展最快的药物zolbetuximab是一种具有人类免疫球蛋白1恒定区的小鼠嵌合单克隆抗体。然而claudin 18.2的抗体开发依然存在技术难点:其一,从蛋白本身来讲,claudin18.2具有4个跨膜结构域,两个胞外环,nh2端和cooh端位于胞内。多次跨膜蛋白的胞外环(loop)不是一个独立的结构域(domain),如果仅仅表胞外段,不能维持一个正确的构象,需要跨膜段的束缚才会保持正确的构象。这给蛋白表达大大增加了难度。因此寻找能够完整展示蛋白的两个胞外环的抗原蛋白材料,用于后续抗体淘选是研究开展的基础一环;其二,claudin 18.1和claudin 18.2都由261个氨基酸组成,结构一致性较高,claudin 18.1和claudin 18.2仅在胞外环ecl1大约50个氨基酸的序列中有7个氨基酸残基差异,所以得到与claudin 18.2特异性结合的抗体是至关重要的。众所周知,人源化或全人抗体免疫原性低,是未来抗体发展的方向,然而由于技术上的难度,尚未有报道特异性结合claudin 18.2的人源化或全人抗体被批准上市。因此,需要开发一种特异性结合claudin 18.2的人源化抗体或全人抗体。
技术实现思路
1、第一方面,本专利技术提供了一种特异性结合于claudin 18.2的结合部分,其包括
2、重链可变区(vh),所述vh包括:vh cdr1,vh cdr2和vh cdr3;其中,所述vh cdr1、cdr2和cdr3分别包括:
3、(1)seq id no:2、3和4所示的氨基酸序列;
4、(2)seq id no:10、11和12所示的氨基酸序列;或
5、(3)seq id no:28、3和29所示的氨基酸序列,
6、或者,其在所述cdr中包括至多3个氨基酸取代的变体;和
7、(b)轻链可变区(vl),所述vl包括:vl cdr1,vl cdr2和vl cdr3;其中,所述vlcdr1、cdr2和cdr3分别包括:
8、(1)seq id no:6所示的氨基酸序列、evt和seq id no:8所示的氨基酸序列;
9、(2)seq id no:14所示的氨基酸序列、kvs和seq id no:16所示的氨基酸序列;
10、(3)seq id no:19所示的氨基酸序列、evs和seq id no:21所示的氨基酸序列;
11、(4)seq id no:24所示的氨基酸序列、dts和seq id no:26所示的氨基酸序列;
12、(5)seq id no:31所示的氨基酸序列、snn和seq id no:33所示的氨基酸序列;
13、(6)seq id no:36所示的氨基酸序列、aas和seq id no:38所示的氨基酸序列;
14、(7)seq id no:40所示的氨基酸序列、gas和seq id no:42所示的氨基酸序列;或
15、(8)seq id no:45所示的氨基酸序列、was和seq id no:47所示的氨基酸序列,
16、或者,其在所述cdr中包括至多3个氨基酸取代的变体。
17、在一些实施方式中,其中
18、所述vh cdr1、cdr2和cdr3分别包括seq id no:2、3和4所示的氨基酸序列,和所述vl cdr1、cdr2和cdr3分别包括seq id no:6所示的氨基酸序列、evt和seq id no:8所示的氨基酸序列;
19、所述vh cdr1、cdr2和cdr3分别包括seq id no:2、3和4所示的氨基酸序列,和所述vl cdr1、cdr2和cdr3分别包括seq id no:19所示的氨基酸序列、evs和seq id no:21所示的氨基酸序列;
20、所述vh cdr1、cdr2和cdr3分别包括seq id no:2、3和4所示的氨基酸序列,和所述vl cdr1、cdr2和cdr3分别包括seq id no:24所示的氨基酸序列、dts和seq id no:26所示的氨基酸序列;
21、所述vh cdr1、cdr2和cdr3分别包括seq id no:2、3和4所示的氨基酸序列,和所述vl cdr1、cdr2和cdr3分别包括seq id no:36所示的氨基酸序列、aas和seq id no:38所示的氨基酸序列;
22、所述vh cdr1、cdr2和cdr3分别包括seq id no:2、3和4所示的氨基酸序列,和所述vl cdr1、cdr2和cdr3分别包括seq id no:40所示的氨基酸序列、gas和seq id no:42所示的氨基酸序列;
23、所述vh cdr1、cdr2和cdr3分别包括seq id no:10、11和12所示的氨基酸序列;和所述vl cdr本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种特异性结合Claudin 18.2的结合部分,其包括
2.根据权利要求1所述的结合部分,其中
3.根据权利要求1或2所述的结合部分,其中所述VL为Kappa轻链可变区或Lambda轻链可变区。
4.根据权利要求3所述的结合部分,其中所述VH包括与选自由以下组成的群组的氨基酸序列具有至少80%序列一致性的氨基酸序列:SEQ ID NO:1、9、17、22、27、34和43;或所述VL包括与选自由以下组成的群组的氨基酸序列具有至少80%序列一致性的氨基酸序列:SEQ ID NO:5、13、18、23、30、35、39和44。
5.根据权利要求4所述的结合部分,其中所述VH和VL分别包括:
6.根据权利要求1-5中任一项所述的结合部分,其为sdab、HcAb、Fab、Fab'、F(ab')2、Fv、scFv、(scFv)2或全长抗体。
7.根据权利要求1所述的结合部分,其为小鼠、嵌合、人源化或全人源。
8.根据权利要求7所述的结合部分,其为全人源。
9.根据权利要求6所述的结合部分,
10.一种多特异性抗体或其结合片段,其包括权利要求1-9中任一项所述的结合部分。
11.一种嵌合抗原受体,其包括:
12.一种核酸,其编码根据权利要求1-9中任一项所述的结合部分,根据权利要求10所述的多特异性抗体或其结合片段,或根据权利要求11所述的嵌合抗原受体。
13.一种宿主细胞,其包含根据权利要求12所述的核酸。
14.一种药物组合物,其包括根据权利要求1-9任一项所述的结合部分,根据权利要求10所述的多特异性抗体或其结合片段,根据权利要求11所述的嵌合抗原受体或根据权利要求13所述的宿主细胞和药学上可接受的载剂。
15.一种治疗有需要的受试者的Claudin 18.2表达相关疾病的方法,所述方法包括向受试者施用治疗有效量的根据权利要求14所述的药物组合物。
16.根据权利要求15所述的方法,其中所述Claudin 18.2表达相关疾病是胃癌、胰腺癌、食管癌、乳腺癌、结肠癌、肝癌、卵巢癌或肺癌。
17.根据权利要求1-9任一项所述的结合部分,根据权利要求10所述的多特异性抗体或其结合片段,根据权利要求11所述的嵌合抗原受体,根据权利要求12所述的核酸或根据权利要求13所述的宿主细胞在制备用于治疗Claudin 18.2表达相关疾病的药物中的应用。
18.根据权利要求17所述的应用,其中所述Claudin 18.2表达相关疾病是胃癌、胰腺癌、食管癌、乳腺癌、结肠癌、肝癌、卵巢癌或肺癌。
...【技术特征摘要】
1.一种特异性结合claudin 18.2的结合部分,其包括
2.根据权利要求1所述的结合部分,其中
3.根据权利要求1或2所述的结合部分,其中所述vl为kappa轻链可变区或lambda轻链可变区。
4.根据权利要求3所述的结合部分,其中所述vh包括与选自由以下组成的群组的氨基酸序列具有至少80%序列一致性的氨基酸序列:seq id no:1、9、17、22、27、34和43;或所述vl包括与选自由以下组成的群组的氨基酸序列具有至少80%序列一致性的氨基酸序列:seq id no:5、13、18、23、30、35、39和44。
5.根据权利要求4所述的结合部分,其中所述vh和vl分别包括:
6.根据权利要求1-5中任一项所述的结合部分,其为sdab、hcab、fab、fab'、f(ab')2、fv、scfv、(scfv)2或全长抗体。
7.根据权利要求1所述的结合部分,其为小鼠、嵌合、人源化或全人源。
8.根据权利要求7所述的结合部分,其为全人源。
9.根据权利要求6所述的结合部分,其为全人源的全长抗体。
10.一种多特异性抗体或其结合片段,其包括权利要求1-9中任一项所述的结合部分。
11.一种嵌合抗原受体,其包括:
【专利技术属性】
技术研发人员:李应宇,辛阳,潘倩慧,贾文双,陈黎,
申请(专利权)人:南京蓬勃生物科技有限公司,
类型:发明
国别省市:
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