SARS-CoV-2假病毒及其制备方法和应用技术

本发明专利技术属于生物技术领域，具体涉及SARS

【技术实现步骤摘要】
SARS
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CoV
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2假病毒及其制备方法和应用
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请是2021年5月28日提交的中国专利申请CN202180038153.3的分案申请，本申请要求2020年5月28日提交的中国专利申请CN202010470541.6的优先权，在此通过引用将它们的全文并入本文。


[0003]本专利技术属于生物
，具体涉及一种SARS
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CoV
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2假病毒及其制备方法和应用。

技术介绍

[0004]新型冠状病毒(COVID
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19)病原体SARS
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CoV
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2病毒，又称2019新型冠状病毒(2019Novel coronavirus,2019
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nCoV)，是一种RNA冠状病毒。目前全球已有220多个国家和地区累计报告逾500万名确诊病例，逾30万名患者死亡。2019冠状病毒病疫情逐渐变成一场全球性大瘟疫。SARS
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CoV
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2病毒是一类具有囊膜、基因组为线性单链正链的RNA病毒。SARS
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2病毒进入宿主细胞是由跨膜刺突(S)糖蛋白(S蛋白)介导的。S蛋白分为S1和S2两个亚基，其中S1亚基负责与宿主细胞受体结合，S2亚基负责病毒膜和细胞膜融合。S1通过结合宿主受体促进病毒感染。它包含两个结构域，即N端结构域和C端受体结合域(RBD结构域)。C端RBD结构域是与人ACE2(血管紧张素转化酶2)受体的相互作用位点，在病毒的传染过程中发挥着重要作用。
[0005]全球至今尚未出现用于SARS
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2病毒疾病的疫苗和特效药。作为天然适应性免疫系统的一部分，中和抗体(neutralizing antibody)在人体抵抗病毒感染过程中扮演了不可缺少的作用。目前许多研发团队都在积极开发针对新型冠状病毒的中和抗体。荷兰乌得勒支大学的47D11是来自于同时用六种人类冠状病毒S抗原免疫的和铂医药H2L2人源化平台产生的单克隆抗体，体外中和实验表明该抗体对新冠病毒有中和活性(Wang,Chunyan,et al.“Ahuman monoclonal antibody blocking SARS
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Cov
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infection.”Nature communications11.1(2020):1
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6)。也有研究表明，在新型冠状病毒患者治疗过程中，康复期病人血浆治疗取得了较好的疗效，显示出中和抗体在新冠病毒肺炎治疗方面的潜力。然而，如何有效的检测目前开发的新冠病毒中和抗体和抗新冠病毒其他化学药物的中和性能也是研发人员亟需解决的问题。鉴于新型冠状病毒的感染性强和传播速度快，采用新型冠状病毒检测抗病毒的药物在前期筛选风险较高，对实验条件要求高，同时会存在扩散的危险。因此，这也亟待研发人员开发出安全性高、适应性强的检测抗病毒药物的方法，以便更快的筛选到有效的新型冠状病毒药物。
[0006]专利技术概述
[0007]为解决上述问题，本专利技术提供了一种检测样品中和SARS
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CoV
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2病毒或其突变体能力的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
[0008](1)将SARS
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CoV
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2假病毒或其变体与所述药物接触，
[0009](2)将所述假病毒与药物的混合物与ACE2过表达的细胞系接触培养，和
[0010](3)通过检测所述细胞系表达报告基因的情况确定所述药物是否具有中和所述SARS
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CoV
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2病毒或其突变体的能力。
[0011]在一些实施方案中，所述SARS
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CoV
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2假病毒或其变体是基于慢病毒载体系统包装构建的。其中，所述慢病毒载体系统选自二代慢病毒系统或三代慢病毒系统。
[0012]在一些实施方案中，所述SARS
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CoV
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2假病毒或其变体包括慢病毒骨架及SARS
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CoV
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2的刺突蛋白或其变体。其中，所述SARS
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2的刺突蛋白或其变体包括S1亚基和S2亚基。优选地，所述SARS
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2的刺突蛋白突变体相对于野生型SARS
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CoV
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2的刺突蛋白包括一个或多个氨基酸的替换，删除和/或增加，优选为包括至多15个氨基酸的替换，删除和/或增加。
[0013]在一些实施方案中，所述SARS
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CoV
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2假病毒或其变体包含与SEQ ID NO:2、5
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8、21或22所示氨基酸序列至少70％一致性的序列。在一些具体方案中，所述SARS
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CoV
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2假病毒或其变体包含与SEQ ID NO:2、5
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8、21或22所示氨基酸序列至少70％、至少75％、至少80％、至少83％、至少85％、至少87％、至少89％、至少91％、至少93％、至少95％、至少97％或至少99％一致性的序列。在一个具体实施方案中，所述SARS
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CoV
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2假病毒或其变体包含SEQ ID NO:2、5
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8、21或22所示的氨基酸序列。在另一个具体实施方案中，所述SARS
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CoV
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2假病毒或其变体的氨基酸序列如SEQ ID NO:2、5
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8、21或22所示。在一些实施方案中，所述SARS
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CoV
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2假病毒包含与SEQ ID NO:2所示氨基酸序列至少70％、至少75％、至少80％、至少83％、至少85％、至少87％、至少89％、至少91％、至少93％、至少95％、至少97％或至少99％一致性的序列。在一个具体实施方案中，所述SARS
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CoV
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2假病毒包含SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列。在另一个具体实施方案中，所述SARS
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CoV
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2假病毒的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。在一些实施方案中，所述SARS
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CoV
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2假病毒变体包含与SEQ ID NO:5、6、7、8、21或22所示氨基酸序列至少70％、至少75％、至少80％、至少83％、至少85％、至少87％、至少89％、至少91％、至少93％、至少95％、至少97％或至少99％一致性的序列。在一个具体实施方案中，所述SARS
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CoV
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种SARS
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CoV
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2假病毒或其变体，其特征在于，所述假病毒是基于慢病毒载体系统包装构建的，包括慢病毒骨架和SARS
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CoV
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2的刺突蛋白或其变体。2.根据权利要求1所述的假病毒或其变体，所述SARS
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CoV
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2的刺突蛋白突变体包括一个或多个氨基酸的替换、删除和/或增加。3.根据权利要求1或2所述的假病毒或其变体，所述SARS
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2的刺突蛋白突变体相对于野生型SARS
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CoV
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2的刺突蛋白包含选自D364Y、V367F、W436R、D614G、E484K和N501Y一组氨基酸替换中的一个或多个，优选为包含选自V367F、W436R或D614G的氨基酸替换。4.根据权利要求1
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3中任一项所述的假病毒或其变体，所述SARS
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CoV
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2的刺突蛋白或其变体包含与SEQ ID NO:2、5、6、7、8、22或23所示氨基酸序列至少70％一致性的序列。5.根据权利要求1
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4中任一项所述的假病毒或其变体，其特征在于，所述病毒或其变体包含报告基因。6.根据权利要求5中所述的假病毒或其变体，所述报告基因选自绿色荧光蛋白基因或荧光素酶基因，优选为荧光素酶基因。7.一种制备权利要求1
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6任一项所述假病毒或其变体的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：(1)构建表达SARS
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【专利技术属性】
技术研发人员：贾文双，汪伟明，李恋曲，张娴，杨梦丽，刘传鑫，殷刘松，
申请(专利权)人：南京蓬勃生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：