靶向Siglec-15的单克隆抗体及其应用制造技术

本申请提供一种特异性结合Siglec

【技术实现步骤摘要】
靶向Siglec
‑
15的单克隆抗体及其应用
通过援引并入
[0001]本申请是2023年2月3日提交的中国专利申请CN202310080778.7的分案申请，其全部内容通过引用的方式整体并入本文。本申请要求2022年3月21日提交的PCT申请PCT/CN2022/082035的优先权，全部内容通过引用的方式整体并入本文。本文引用或参考的所有文件(包括但不限于本文引用的所有文献文件、专利、公开的专利申请)(“本文引用的文件”)，以及本文引用的文件中所引用或参考的所有文件，连同本文或通过援引并入本文的任何文件中提及的针对任何产品的任何制造商说明、描述、产品规格及产品说明书都通过援引特此并入本文，并可用于实践本专利技术。更具体地，所有参考的文件都通过援引并入，其程度如同每个个别文件都具体且单独地指示通过援引并入一般。本披露中提及的任何Genbank序列均通过援引并入，其中Genbank序列为本披露的最早有效提交日期的序列。
[0002]本申请的序列表标记为“SequenceListing”，其创建于2023年5月6日并且大小为154KB。该序列表的全部内容通过援引整体并入本文。


[0003]本披露涉及与Siglec
‑
15特异性结合的抗体或其抗原结合部分，以及其在抑制、减少或逆转Siglec
‑
15介导的免疫抑制及在治疗或缓解Siglec
‑
15相关疾病中的用途。

技术介绍

[0004]免疫球蛋白超家族(IgSF)为一大类细胞表面蛋白和可溶性蛋白，其参与细胞的识别、结合或粘附过程。唾液酸结合免疫球蛋白样凝集素或Siglec是该超家族的子集，各自在其胞外区域含有N末端唾液酸结合V
‑
set免疫球蛋白结构域和一个或多个C2
‑
set免疫球蛋白结构域，并参与免疫稳态调节(Crocker,P.等人,(2007)Nat Rev Immunol 7(4):255
–
266)。
[0005]Siglec
‑
15是独特的Siglec成员，其在骨髓细胞(主要为巨噬细胞)和破骨细胞上选择性地表达(Sun J等人,(2021)Clin Cancer Res.27(3):680
‑
688)。与大多数其他成员不同，其在胞内区域中不具有基于免疫受体酪氨酸的抑制基序(ITIM)或ITIM样基序，而是与含有基于免疫受体酪氨酸的活化基序(ITAM)的DAP12或DAP10蛋白结合并经由其进行信号传导(Angata T等人,(2007)Glycobiology 17:838
‑
846；Ishida
‑
Kitagawa N等人,(2012)J Biol Chem 287:17493
‑
17502)。
[0006]Siglec
‑
15最初在21世纪一十年代初期以破骨细胞调节剂来表征。破骨细胞前体上的Siglec
‑
15分子识别相邻破骨细胞前体上的CD44，并经由DAP12
‑
SYK通路转导信号，并且发现用抗Siglec
‑
15抗体治疗可抑制破骨细胞分化和骨吸收(Sato D等人,(2018)Bone 116:172
–
80)。DS
‑
1501(Daiichi Sankyo)，一种Siglec
‑
15靶向分子，正处于用于缓解骨质疏松症的I期临床试验中。
[0007]Siglec
‑
15随后经报道参与免疫调节，尤其是癌症免疫。研究已表明，Siglec
‑
15表达在大多数正常组织中受限，但在人肿瘤细胞和肿瘤基质细胞中上调，包括肿瘤相关巨噬
细胞，在例如结肠癌、子宫内膜样癌、甲状腺癌、膀胱癌、肾癌、肺癌和肝癌中(Wang J.等人,(2019)Nat Med 25:656
–
666)。骨髓细胞或巨噬细胞上的Siglect
‑
15优先结合唾液酸
‑
Tn(一种碳水化合物癌症标志物)，从而导致骨髓细胞或巨噬细胞的TGF
‑
β产量增加，最终建立有利于肿瘤细胞的肿瘤微环境(TME)。例如，增强的TGF
‑
β释放可能会促进癌细胞的上皮细胞
‑
间质转变和转移(Takamiya R等人,(2013)Glycobiology 23(2):178
–
87)。还发现巨噬细胞或骨髓细胞上的Siglec
‑
15在体内抑制抗原特异性T应答，并且抗体对Siglec
‑
15的阻断可逆转T细胞抑制并减缓小鼠模型中的肿瘤生长。在Siglec
‑
15敲除模型中，肿瘤浸润性CD8
+
T细胞、NK细胞和几个炎症性骨髓细胞群显著扩增，而MHC
‑
II
低
肿瘤相关巨噬细胞和MDSC水平下降(Wang J.等人,(2019)同上文)。巨噬细胞和肿瘤相关的Siglec
‑
15均可有助于免疫抑制性肿瘤微环境(TME)。
[0008]尽管仍有许多问题有待阐明，但由于Siglec
‑
15具有免疫抑制活性、在TME中的选择性上调、跨肿瘤类型的广泛上调及在TME中与PD
‑
L1的相互排斥的表达模式，Siglec
‑
15作为用于肿瘤治疗的有前景的治疗靶点引起了人们的关注。靶向Siglec
‑
15可能会产生更有益的毒性应答概况，并可能与抗PD
‑
L1疗法协同作用(Wang J.等人,(2019)同上文)。首创抗Siglec
‑
15抗体NC318在一项针对实体瘤(包括非小细胞肺癌、卵巢癌、黑色素瘤、结直肠癌和乳腺癌)的多中心临床试验中显示出良好的安全性和令人鼓舞的抗肿瘤功效(Shum E等人,(2021)Journal for ImmunoTherapy of Cancer 9(增刊2):A1
‑
A1054)。
[0009]仍然需要用于调节Siglec
‑
15和由此引发的信号传导的工具和技术。
[0010]本申请中的任何文件的引用或标识并不承认该文件可作为本专利技术的现有技术获得。

技术实现思路

[0011]本申请的专利技术人已发现几种抗体或其抗原结合部分，其与现有技术抗Siglec
‑
15抗体(比如NC318)相比，具有i)相当的(如果不是更高)与人和猴Siglec
‑
15的结合活性/亲和力，和ii)相当的(如果不是更高)对Siglec
‑
15免疫抑制活性的抑制作用。这些抗体或其抗原结合部分可用于调节Siglec
‑
15和由此引发的信号传导，以增加免本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种特异性结合Siglec
‑
15的经分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，所述单克隆抗体或其抗原结合部分包含(a)重链可变区，所述重链可变区包含分别含有以下氨基酸序列的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3：SEQ ID NO:7、8和9，和(b)轻链可变区，所述轻链可变区包含分别含有以下氨基酸序列的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3：SEQ ID NO:10、11和12。2.如权利要求1所述的经分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，其中所述重链可变区包含与SEQ ID NO:93、94、95或96具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。3.如权利要求1或2所述的经分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，其中所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:97、98、99或100具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。4.如权利要求1所述的经分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，其中所述重链可变区和所述轻链可变区包含分别与以下具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列：SEQ ID NO:95和97。5.如权利要求1
‑
4任一项所述的经分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，其包含重链恒定区和/或轻链恒定区。6.如权利要求5所述的经分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，其中所述重链恒定区是IgG4恒定区。7.如权利要求6所述的经分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，其中所述重链恒定区是包含SEQ ID NO:117的氨基酸序列的人IgG4恒定区。8.如权利要求5所述的经分离的单克隆抗体...

【专利技术属性】
技术研发人员：肖琪，邵翠英，刘斌，周艺，李应宇，李中道，
申请(专利权)人：南京蓬勃生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：