【技术实现步骤摘要】
本申请涉及分子生物学领域，具体涉及检测kif6突变的试剂及试剂盒和应用。
技术介绍
1、不孕症作为一个影响约15％夫妇的全球性健康问题已引起越来越多的关注，而男性因素约占50％。男性不育是一种由多因素引起的表型异质性疾病，包括少、弱、畸形精子症、无精子症等。其中，据世界卫生组织《人类精液检查与处理实验室手册》(第6版)标准诊断，弱畸形精子症(asthenozoospermia)是指精子异常的组合，包括精子活动力下降和精子形态异常。即精子前向运动(pr)<30％、正常形态精子<4％，同时符合二者则诊断为弱畸形精子症。哺乳动物精子鞭毛根据超微结构可分为三个部分：中段、主段和末段。其中轴丝为其核心结构，在进化中高度保守，在早期精子形成阶段开始组装，由9对外周双联微管(dmts)和中央两个单独的微管(cp)组成，形成“9+2”结构。作为弱畸型精子症的一个亚型，精子鞭毛多发形态异常(multiple morphological abnormalities of the flagella,mmaf)主要表现为精子尾部鞭毛的多种畸形(如缺尾、短尾、卷尾、曲尾或不规则尾部)，同时伴有精子活力降低或数目的减少。在临床中，导致弱畸形精子症的病因非常复杂，包括基因突变在内的遗传因素是重要原因。随着高通量测序技术在男性不育患者致病基因筛查中的广泛应用，已经鉴定出多个与弱畸形精子症相关的致病基因，如dnah17、tbl1xr1、dnali1和cfap47等。这为弱畸形精子症患者的诊断、预防和生育治疗提供了重要的分子依据。然而，由于检出的变异缺
2、临床上，对于弱畸形精子症患者，首先通过基因诊断技术明确遗传病因，进而选择合适的辅助生殖助孕方式，由于其精子活动力受损，这类患者目前常通过卵胞浆内单精子注射(intracytoplasmic sperminjection，icsi)获得自己的后代。对于临床表型明确、致病基因不明的患者，目前首选采用包括全外显子组测序在内的新一代测序技术，该技术检测通量高，可同时检测基因组中所有的编码基因，但其结果仍需经过大量的生物信息学分析和sanger测序来验证，这就要求有专业的软件支持，并且费用高昂。而对于致病基因已知的患者，主要通过pcr-sanger测序方法，对单个基因外显子区及其侧翼序列进行检测，具有个性化、低成本、高效率等优点，但不具备普适性。此外，据不完全统计，通过生物信息学分析筛选候选致病变异并验证阳性的患者比例仍不足5％。因此，对于明确致病基因并开发相应的辅助诊断特异性的检测产品对于这类患者的生育治疗具有重要的参考依据。
技术实现思路
1、基于此，本申请有必要提供与男性不育相关的新型kif6突变位点及检测所述突变的试剂，及其在制备男性不育如弱畸形精子症的诊断或辅助诊断产品中的应用。
2、具体技术方案如下：
3、第一方面，本申请提供了一种检测样本中kif6突变的试剂，所述试剂包括检测kif6c.1325_1326del:p.thr442fs和kif6 c.1420g>a:p.e474k突变的试剂。所述kif6c.1325_1326del:p.thr442fs突变为纯合移码突变，所述kif6 c.1420g>a:p.e474为纯合错义突变。
4、在其中一个实施例中，所述试剂选自：引物、探针、抗体和核酸芯片中的一种或几种。
5、在其中一个实施例中，所述引物包括核苷酸序列如seq id no:1～4所示的引物。
6、第二方面，本申请提供了一种试剂盒，包括所述的试剂。
7、在其中一个实施例中，所述试剂还包括dntps、taq酶、mg2+和pcr反应缓冲液中的一种或者多种。
8、在其中一个实施例中，所述试剂还包括sanger测序所需试剂。
9、在其中一个实施例中，所述试剂盒采用荧光定量pcr和/或sanger测序法检测样本中kif6突变。
10、第三方面，本申请提供了所述的试剂或所述的试剂盒在制备男性不育的诊断或辅助诊断产品、疗效预测产品、生育治疗方法选择产品或遗传筛查产品中的应用。
11、第四方面，本申请提供了所述的试剂或所述的试剂盒在制备弱畸形精子症的诊断或辅助诊断产品、疗效预测产品、生育治疗方法选择产品或遗传筛查产品中的应用。
12、相对于现有技术，本申请具备如下有益效果：
13、本申请发现kif6 c.1325_1326del:p.thr442fs和kif6 c.1420g>a:p.e474k是导致弱畸形精子症的遗传病因。据此，开发以上述kif6基因突变位点为核心的辅助诊断或风险预测或疗效预测的产品，为这类患者的生育治疗提供重要的参考依据。
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1.一种检测KIF6突变的试剂，其特征在于，所述试剂包括检测KIF6c.1325_1326del:p.Thr442fs和c.1420G>A:p.E474K突变的试剂，所述突变分别为纯合移码突变和纯合错义突变。
2.根据权利要求1所述的检测KIF6突变的试剂，其特征在于，所述试剂选自：引物、探针、抗体和核酸芯片中的一种或几种。
3.根据权利要求2所述的检测KIF6突变的试剂，其特征在于，所述引物包括核苷酸序列如SEQ ID NO:1～4所示的引物。
4.一种检测KIF6突变的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1～3中任一项所述的检测KIF6突变的试剂。
5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂还包括dNTPs、Taq酶、Mg2+和PCR反应缓冲液中的一种或者多种。
6.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂还包括Sanger测序所需试剂。
7.根据权利要求4～6任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒采用荧光定量PCR和/或Sanger测序法检测样本中所述KIF6突变。
9.权利要求1～3任一项所述的试剂或权利要求4～7任一项所述的试剂盒在制备弱畸形精子症的诊断或辅助诊断产品、疗效预测产品、生育治疗方法选择产品或遗传筛查产品中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述弱畸形精子症具有如下表型：精子活动力下降和精子形态异常。
...【技术特征摘要】
1.一种检测kif6突变的试剂，其特征在于，所述试剂包括检测kif6c.1325_1326del:p.thr442fs和c.1420g>a:p.e474k突变的试剂，所述突变分别为纯合移码突变和纯合错义突变。
2.根据权利要求1所述的检测kif6突变的试剂，其特征在于，所述试剂选自：引物、探针、抗体和核酸芯片中的一种或几种。
3.根据权利要求2所述的检测kif6突变的试剂，其特征在于，所述引物包括核苷酸序列如seq id no:1～4所示的引物。
4.一种检测kif6突变的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1～3中任一项所述的检测kif6突变的试剂。
5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂还包括dntps、taq酶、mg2+和pcr反应缓冲液中的一种或者...
【专利技术属性】
技术研发人员：易思兵，谢春波，涂超峰，谭跃球，何文斌，张前军，蒙岚岚，谭琛，
申请(专利权)人：中信湘雅生殖与遗传专科医院有限公司，
类型：发明
国别省市：
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