【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物医药领域，具体涉及一种猴痘病毒核酸疫苗及其用途。
技术介绍
1、以猴痘病毒为代表的痘病毒是一类核质大dna病毒，其病毒基因组约为130-375kbp，能够编码多达200种病毒蛋白。除编码病毒蛋白繁复外，痘病毒的病毒颗粒也较为复杂，其具有两种形态不同的感染性病毒颗粒，称为细胞内成熟病毒(imv)和细胞外包膜病毒(eev)。其中imv具有一层囊膜，其相较于eev具有更高的稳定性，主要参与病毒在宿主间传播。而eev则具有一层特殊的外膜结构，主要参与病毒在宿主体内的扩散。由于imv和eev具有不同的膜结构、膜组份和细胞感染机制，其表面中和抗原也截然不同。
2、猴痘病毒(mpxv)属于痘病毒，与天花病毒高度同源，自1958年被发现以来，长期在非洲中西部局部传播，并演化出多个毒株。然而，2022年，mpxv出现全球流行趋势，至7月23日，已传播至75个国家，感染逾1.5万人，被世界卫生组织宣布为“国际关注的突发公共卫生事件”。虽然目前的疫苗具备对猴痘病毒的防御能力，但值得警惕的是，近期发现mpxv出现变异频率加快的趋势，有产生逃逸突变株的可能。
3、全球只有2款疫苗可用于预防猴痘病毒感染，分别是安卡拉-巴伐利亚北欧公司(bavarian nordic)公司生产的jynneostm疫苗(也称为imvamune或imvanex)和赛诺菲公司生产(sanofi pasteur)的这两种疫苗均为原本用于预防天花的弱毒活疫苗，其中，为第二代疫苗，在人体内具有复制能力，接种后有发生脑炎、心肌炎、进行性牛痘感染等
4、活病毒疫苗存在以下共性缺点：(1)病毒来自活的病毒，经减毒、弱化培养获得，其完整保留了病毒的抗原，但存在弱化不完全，或经变异后毒力恢复的可能；(2)疫苗包含病毒的所有抗原，成分复杂，具有较高引起副作用的可能；(3)疫苗中有效免疫原成分占比较低，相同剂量接种产生的免疫原性较弱；(4)病毒的部分成分可能具有抑制宿主免疫的功能，会起到反作用，降低疫苗的免疫原性。成分清晰的疫苗(mrna疫苗/重组蛋白疫苗等)可以解决以上问题。但是，对于痘病毒这类复杂的病毒，找到关键的成分作为免疫原是一个主要的技术瓶颈。
5、公开于该
技术介绍
部分的信息仅仅旨在增加对本专利技术的总体背景的理解，而不应当被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
技术实现思路
1、为克服上述现有技术中存在的问题，本专利技术提供了一种编码痘病毒多免疫原嵌合或混合抗原的多核苷酸，其相关核酸产品及其在制备用于预防和/或治疗痘病毒(特别是猴痘病毒)感染的疫苗中的用途；由所述多核苷酸编码的痘病毒多免疫原嵌合或混合抗原包含两种免疫原：猴痘病毒a35r蛋白或其抗原性片段(或它们的适当变体)和猴痘病毒m1r蛋白或其抗原性片段(或它们的适当变体)；基于所述多核苷酸的嵌合或混合核酸疫苗，其免疫原成分清晰，且能够高效地激发针对痘病毒(特别是猴痘病毒)的特异性免疫反应(例如，产生保护性抗体)，可用于痘病毒(特别是猴痘病毒)的预防和/或治疗。
2、具体地，本专利技术提供了以下技术方案：
3、第一方面，本专利技术提供了一种多核苷酸，其编码痘病毒多免疫原嵌合或混合抗原，其特征在于，所述嵌合或混合抗原包含：
4、免疫原i：猴痘病毒a35r蛋白或其抗原性片段，或与其具有至少90％，92％，95％，96％，97％，98％或99％同一性且与其具有相同或基本相同的免疫原性的氨基酸序列；和
5、免疫原ii：猴痘病毒m1r蛋白或其抗原性片段，或与其具有至少90％，92％，95％，96％，97％，98％或99％同一性且与其具有相同或基本相同的免疫原性的氨基酸序列。
6、在可行的实施方案中，所述a35r蛋白的抗原性片段为该蛋白的胞外段或其一部分，优选为具有如seq id no:1所示的氨基酸序列，或者如seq id no:1所示的氨基酸序列加上由其向a35r蛋白的n端延伸1-30个氨基酸的片段的氨基酸序列、优选如seq id no:2所示的氨基酸序列的肽段；
7、和/或，所述m1r蛋白的抗原性片段为该蛋白的胞外段或其一部分，优选为具有如seq id no:3所示的氨基酸序列的肽段。
8、在一些具体实施方案中，所述多核苷酸编码痘病毒多免疫原混合抗原，所述混合抗原为免疫原i、ii的混合物；
9、优选地，其中，所述免疫原i具有如seq id no:1或seq id no:2所示的氨基酸序列，或者如seq id no:1或seq id no:2所示的氨基酸序列经取代、缺失或添加一个或几个氨基酸获得的、与其具有相同或基本相同的免疫原性的氨基酸序列；
10、和/或，所述免疫原ii具有如seq id no:3所示的氨基酸序列，或者如seq id no:3所示的氨基酸序列经取代、缺失或添加一个或几个氨基酸获得的、与其具有相同或基本相同的免疫原性的氨基酸序列；
11、优选地，所述混合物中，所述免疫原i、ii的质量比为1：1。
12、进一步优选地，所述多核苷酸为多核苷酸组，包括：
13、i)序列如seq id no:4或5所示的dna分子，和/或其相应的mrna分子，其序列分别如seq id no:6或7所示；和
14、ii)序列如seq id no:8所示的dna分子，和/或其相应的mrna分子，其序列如seqidno:9所示。
15、在另一些具体实施方案中，所述多核苷酸编码痘病毒多免疫原嵌合抗原，所述嵌合抗原为一个或多个免疫原i、ii以串联方式形成的单链；
16、优选地，所述嵌合抗原具有如式(i)所示结构：
17、a1-c1-m1-c2-a2-c3-m2
18、(i)
19、式(i)中：
20、a1表示猴痘病毒a35r蛋白或其抗原性片段i，或与其具有至少90％，92％，95％，96％，97％，98％或99％同一性且与其具有相同或基本相同的免疫原性的氨基酸序列，
21、a2表示猴痘病毒a35r蛋白或其抗原性片段ii，或与其具有至少90％，92％，95％，96％，97％，98％或99％同一性且与其具有相同或基本相同的免疫原性的氨基酸序列，
22、m1表示猴痘病毒m1r蛋白或其抗原性片段i，或与其具有至少90％，92％，95％，96％，97％，98％或99％同一性且与其具有相同或基本相同的免疫原性的氨基酸序列，
23、m2表示猴痘病毒m1r蛋白或其抗原性片段ii，或与其具有至少90％，92％，95％，96％，97％，98％或99％同一性且与其具有相同或基本相同的免疫原性的氨基酸序列；
24、c本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种多核苷酸，其编码痘病毒多免疫原嵌合或混合抗原，其特征在于，所述嵌合或混合抗原包含：
2.根据权利要求2所述的多核苷酸，其特征在于，所述A35R蛋白的抗原性片段为该蛋白的胞外段或其一部分，优选为具有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，或者如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列加上由其向A35R蛋白的N端延伸1-30个氨基酸的片段的氨基酸序列、优选如SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列的肽段；
3.根据权利要求1或2所述的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸编码痘病毒多免疫原混合抗原，所述混合抗原为免疫原I、II的混合物；
4.根据权利要求3所述的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸为多核苷酸组，包括：
5.根据权利要求1或2所述的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸编码痘病毒多免疫原嵌合抗原，所述嵌合抗原为一个或多个免疫原I、II以串联方式形成的单链；
6.根据权利要求5所述的多核苷酸，其特征在于，所述A35R蛋白的抗原性片段I或II为该蛋白的胞外段或其一部分；
7.根据权利要求5或6所述的多核苷酸
8.根据权利要求7所述的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸为DNA分子和/或其相应的mRNA分子；
9.一种核酸构建体，其包含如权利要求1-8任一项所述的多核苷酸，以及任选地，与所述多核苷酸可操作地连接的至少一个表达调控元件。
10.一种表达载体，其包含如权利要求9所述的核酸构建体。
11.一种宿主细胞，其中转化或转染有如权利要求1-8任一项所述的多核苷酸、如权利要求9所述的核酸构建体或如权利要求10所述的表达载体。
12.如权利要求1-8任一项所述的多核苷酸、如权利要求9所述的核酸构建体、如权利要求10所述的表达载体或如权利要求11所述的宿主细胞在制备用于预防和/或治疗痘病毒感染的药物中的应用；
13.一种核酸疫苗或免疫原性组合物，其包含如权利要求1-8任一项所述的多核苷酸、如权利要求9所述的核酸构建体、如权利要求10所述的表达载体或如权利要求11所述的宿主细胞，以及生理学可接受的媒介物、佐剂、赋形剂、载体和/或稀释剂。
14.根据权利要求13所述的核酸疫苗或免疫原性组合物，其为痘病毒DNA疫苗，所述DNA疫苗包括：
15.根据权利要求13所述的核酸疫苗或免疫原性组合物，其为痘病毒mRNA疫苗，所述mRNA疫苗包括：
16.根据权利要求13所述的核酸疫苗或免疫原性组合物，其为痘病毒-病毒载体疫苗，其包括：
17.根据权利要求13-16任一项所述的核酸疫苗或免疫原性组合物，其特征在于，所述核酸疫苗或免疫原性组合物为鼻喷剂、口服制剂、栓剂或胃肠外制剂的形式；
18.一种试剂盒，其包括如权利要求1-8任一项所述的多核苷酸、如权利要求9所述的核酸构建体、如权利要求10所述的表达载体、如权利要求11所述的宿主细胞或者如权利要求13-17任一项所述的核酸疫苗或免疫原性组合物。
...【技术特征摘要】
1.一种多核苷酸，其编码痘病毒多免疫原嵌合或混合抗原，其特征在于，所述嵌合或混合抗原包含：
2.根据权利要求2所述的多核苷酸，其特征在于，所述a35r蛋白的抗原性片段为该蛋白的胞外段或其一部分，优选为具有如seq id no:1所示的氨基酸序列，或者如seq id no:1所示的氨基酸序列加上由其向a35r蛋白的n端延伸1-30个氨基酸的片段的氨基酸序列、优选如seq id no:2所示的氨基酸序列的肽段；
3.根据权利要求1或2所述的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸编码痘病毒多免疫原混合抗原，所述混合抗原为免疫原i、ii的混合物；
4.根据权利要求3所述的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸为多核苷酸组，包括：
5.根据权利要求1或2所述的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸编码痘病毒多免疫原嵌合抗原，所述嵌合抗原为一个或多个免疫原i、ii以串联方式形成的单链；
6.根据权利要求5所述的多核苷酸，其特征在于，所述a35r蛋白的抗原性片段i或ii为该蛋白的胞外段或其一部分；
7.根据权利要求5或6所述的多核苷酸，其特征在于，所述a1表示如seq id no:1所示的氨基酸序列，或者如seq id no:1所示的氨基酸序列经取代、缺失或添加一个或几个氨基酸获得的、与其具有相同或基本相同的免疫原性的氨基酸序列；
8.根据权利要求7所述的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸为dna分子和/或其相应的mrna分子；
9.一种核酸构建体，其包含如权利要求1-8任一项所述的多核苷酸，以及任选地，与所述多核苷酸...
【专利技术属性】
技术研发人员：高福，王奇慧，齐建勋，杜沛，王寒，孔天翔，
申请(专利权)人：中国科学院微生物研究所，
类型：发明
国别省市：
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