【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及蛋白质合成，具体为一种基于贝叶斯模型基因编辑获取三型胶原蛋白的方法。
技术介绍
1、ⅲ型胶原蛋白是人体皮肤、筋膜、肌腱中主要的胶原蛋白，与i型胶原蛋白比例为4比1，ⅲ型胶原蛋白较细小，存在于表皮层和真皮层之间，称之为“婴儿胶原蛋白”，微胶原层(cu设置有hionnetwork)主要由ⅲ型胶原蛋白构成，是指位于表皮层与真皮层之间的组织结构，是撑起表皮的关键。
2、贝叶斯模型具有极强的事故推理和事故原因诊断功能，是风险分析的常用方法之一，它不能直接判断出事故的发生，但是能在复杂系统中识别出各状态因子的相互关系，能在可能导致事故发生的众多原因中找到关联最为强烈的因子，贝叶斯网络作为评价电力系统技术故障和社会经济因素后果的一种方法，在政府部门、学术研究和工业领域上得到广泛应用，复杂生态系统具有极大的不确定性，并且大量数据受限，因而贝叶斯网络用于比较鱼类体内氮化硼的浓度，以此用于氮化硼在流域管理中的风险评价，贝叶斯网络也可用来评价气候、土地特性等因素对土壤的威胁
3、然而现有通过基因编辑获取人源三型胶原蛋白的过程充满极大的不确定性，即基因编辑过程在基因链不同切割点重组形成的启动子，在进行表达时获得的三型胶原蛋白的数量是不尽相同的，为此本申请提出了一种基于贝叶斯模型基因编辑获取三型胶原蛋白的方法。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种基于贝叶斯模型基因编辑获取三型胶原蛋白的方法，以解决上述
技术介绍
中提出的问题。
2、为实现上述目的，一
3、步骤s1，使用限制性核酸内切酶对人体成熟细胞的基因组dna模板不同点位进行切割；
4、步骤s2，克隆获取ⅲ型人源化胶原蛋白c3表达基因，并与切割后的人体成熟细胞的基因组dna模板顺次连接，构成转录单元；
5、步骤s3，将上一步骤的转录单元分别导入载体，从而获得重组载体微粒；
6、步骤s4，利用蛋白质包覆微粒，对上一步骤射入了包覆后的微粒的，注入受体进行培养从而获得三型胶原蛋白；
7、步骤s5，基于贝叶斯模型以及上一步骤获得的三型胶原蛋白计算不同内切点位胶原蛋白合成量发生的概率，从而获取三型胶原蛋白合成最佳内切点位。
8、优选的：所述步骤s2克隆获得ⅲ型人源化胶原蛋白c3基因启动子具体方法为，以人源成熟细胞的基因组dna为模板，以ⅲ型胶原蛋白c3基因序列的引物为扩增引物对模板进行pcr反应，从而得到ⅲ型人源化胶原蛋白c3表达基因启动子。
9、优选的：所述ⅲ型胶原蛋白c3基因序列的引物使用稀有切割核酸内切酶的靶向基因组修饰引入，且稀有切割核酸内切酶是转录激活因子样效应物核酸酶。
10、优选的：所述步骤s3重组载体微粒的直径为0.3μm-1.5μm。
11、优选的：所述步骤s1的限制性核酸内切酶为ecori。
12、优选的：所述步骤s4培养过程如下，取步骤s4重组后的微粒载体射入的细胞接种在体积百分比为0.04-2.5％的接种率的t2培养基中，在28-38℃，200-300rpm的条件下进行培养10-16h，后离心过滤再进行纯化即可得到三型胶原蛋白。
13、优选的：所述步骤s3的载体包含来自土壤杆菌t-dna序列的右边界序列及左边界序列，在被所述右边界序列和左边界序列夹住的传递区域配置有三型胶原蛋白编码的特异性重组酶的基因。
14、优选的：所述载体内还包括人源激素生物合成基因。
15、本专利技术相较于现有技术，其有益效果为：
16、本专利技术提出的基于贝叶斯模型基因编辑获取三型胶原蛋白的方法通过使用限制性核酸内切酶对人体成熟细胞的基因组dna模板不同点位进行切割，再克隆获取ⅲ型人源化胶原蛋白c3表达基因，并与切割后的人体成熟细胞的基因组dna模板顺次连接，构成转录单元，并将转录单元分别导入载体，从而获得重组载体微粒，利用蛋白质包覆微粒，对上一步骤射入了包覆后的微粒的，注入受体进行培养从而获得三型胶原蛋白，最后通过基于贝叶斯模型以及上一步骤获得的三型胶原蛋白计算不同内切点位胶原蛋白合成量发生的概率，从而获取三型胶原蛋白合成最佳内切点位。
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1.一种基于贝叶斯模型基因编辑获取三型胶原蛋白的方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种基于贝叶斯模型基因编辑获取三型胶原蛋白的方法，其特征在于：所述步骤S2克隆获得Ⅲ型人源化胶原蛋白C3基因启动子具体方法为，以人源成熟细胞的基因组DNA为模板，以Ⅲ型胶原蛋白C3基因序列的引物为扩增引物对模板进行PCR反应，从而得到Ⅲ型人源化胶原蛋白C3表达基因启动子。
3.根据权利要求2所述的一种基于贝叶斯模型基因编辑获取三型胶原蛋白的方法，其特征在于：所述Ⅲ型胶原蛋白C3基因序列的引物使用稀有切割核酸内切酶的靶向基因组修饰引入，且稀有切割核酸内切酶是转录激活因子样效应物核酸酶。
4.根据权利要求3所述的一种基于贝叶斯模型基因编辑获取三型胶原蛋白的方法，其特征在于：所述步骤S3重组载体微粒的直径为0.3μm-1.5μm。
5.根据权利要求4所述的一种基于贝叶斯模型基因编辑获取三型胶原蛋白的方法，其特征在于：所述步骤S1的限制性核酸内切酶为EcoRI。
6.根据权利要求5所述的一种基于贝叶斯模型基因编辑获取三型胶原
7.根据权利要求6所述的一种基于贝叶斯模型基因编辑获取三型胶原蛋白的方法，其特征在于：所述步骤S3的载体包含来自土壤杆菌T-DNA序列的右边界序列及左边界序列，在被所述右边界序列和左边界序列夹住的传递区域配置有三型胶原蛋白编码的特异性重组酶的基因。
8.根据权利要求7所述的一种基于贝叶斯模型基因编辑获取三型胶原蛋白的方法，其特征在于：所述载体内还包括人源激素生物合成基因。
...【技术特征摘要】
1.一种基于贝叶斯模型基因编辑获取三型胶原蛋白的方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种基于贝叶斯模型基因编辑获取三型胶原蛋白的方法，其特征在于：所述步骤s2克隆获得ⅲ型人源化胶原蛋白c3基因启动子具体方法为，以人源成熟细胞的基因组dna为模板，以ⅲ型胶原蛋白c3基因序列的引物为扩增引物对模板进行pcr反应，从而得到ⅲ型人源化胶原蛋白c3表达基因启动子。
3.根据权利要求2所述的一种基于贝叶斯模型基因编辑获取三型胶原蛋白的方法，其特征在于：所述ⅲ型胶原蛋白c3基因序列的引物使用稀有切割核酸内切酶的靶向基因组修饰引入，且稀有切割核酸内切酶是转录激活因子样效应物核酸酶。
4.根据权利要求3所述的一种基于贝叶斯模型基因编辑获取三型胶原蛋白的方法，其特征在于：所述步骤s3重组载体微粒的直径为0.3μm-1.5μm。
5.根据权利要求4所述的一种基于贝叶...
【专利技术属性】
技术研发人员：和雪梅，
申请(专利权)人：中科先研全息美科技北京有限公司，
类型：发明
国别省市：
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