一种抗乙基葡萄糖醛酸苷抗体制造技术

本发明专利技术公开了一种抗乙基葡萄糖醛酸苷抗体

【技术实现步骤摘要】
一种抗乙基葡萄糖醛酸苷抗体、检测乙基葡萄糖醛酸苷的试剂和试剂盒


[0001]本专利技术涉及抗体
，具体而言，涉及一种抗乙基葡萄糖醛酸苷抗体
、
检测乙基葡萄糖醛酸苷的试剂和试剂盒
。

技术介绍

[0002]乙基葡萄糖醛酸苷
(Ethyl Glucuronide,ETG)
是不易挥发的水溶性乙醇糖苷结合代谢物
。
乙醇进入人体后约
90
％
‑
95
％通过肝脏进行氧化代谢，约
0.5
％
‑
1.5
％通过葡糖苷酸转移酶在内质网中转换成乙基葡萄糖醛酸苷
(ethyl glucuronide,ETG)。ETG
相对分子量为
222
，分子式为
C8H14O7
，其沸点约为
150℃。
饮酒后，
ETG
存在于血液
、
尿液
、
头发
、
以及其它组织和体液中，其代谢周期长于乙醇，乙醇完全消除
24
小时可在血液中检测到，乙醇完全消除
80
小时候仍可在尿液中检测到，长期饮酒者，毛发中样本中也可检测到
ETG。
[0003]酒精滥用是全世界广泛关注的公共卫生问题，酗酒不但严重危害人类健康，而且还引发一系列社会
、
经济以及法律问题
。
常规的酒精检测局限于乙醇的清除速率较快r/>(10mg/dL.h),
一次过量饮酒在
24
小时后便难以检出
。
已乙醇相比，
ETG
有更久的检出限，是检测乙醇滥用的良好指标，可为解决酒后驾车逃逸后归案时已无法检出乙醇的案件的判断提供科学的依据
。
因此
ETG
检测可以作为辅助性检测，以检测戒酒的效果，尤其作为呼气酒精检测及血乙醇浓度
(BAC)
检测的补充
。
[0004]1995
年
Schmitt
首次发现
ETG
，并作为判断近期乙醇摄入的特异性标志物
。
目前针对
ETG
的检测方法主要有色谱分析，如气相色谱法
/
质谱法
(GC/MS)、
液相色谱法
/
联用质谱法 (LC/MS/MS)、
高效液相色谱法
(HPLC)
，还有酶联免疫法
(ELISA)
及侧向流动免疫测定法等
。
色谱法的测定由于耗时较长
、
价格昂贵，其在临床上的应用有待进一步的研究
。
[0005]免疫学检测方法是基于抗体和抗原的特异性反应进行检测的一种手段，因其简单快速成为了研究的热点
。
免疫学检测方法都需要针对于乙基葡萄糖醛酸苷的抗体
。
因此，本领域对于有效且结合乙基葡萄糖醛酸苷并对其进行检测的抗体存在着强烈需求
。
[0006]鉴于此，特提出本专利技术
。

技术实现思路

[0007]本申请提供一种亲和力和
/
或活性改善的抗乙基葡萄糖醛酸苷抗体，以改善乙基葡萄糖醛酸苷的检测，为乙基葡萄糖醛酸苷的检测提供重要的原料来源
。
[0008]为了实现上述目的，根据本专利技术的一个方面，提供了一种抗体或其功能性片段，所述抗体或其功能性片段包括氨基酸序列如
SEQ ID NO:1
所示的
HCDR1、
氨基酸序列如
SEQ ID NO:2
所示的 HCDR2、
氨基酸序列如
SEQ ID NO:3
或
SEQ ID NO:15
所示的
HCDR3
，和氨基酸序列如
SEQ IDNO:4
所示的
LCDR1、
氨基酸序列如
SEQ ID NO:5
所示的
LCDR2、
氨基酸序列如
SEQ ID NO:6
或 SEQ ID NO:16
所示的
LCDR3。
[0009]为了实现上述目的，根据本专利技术的第二个方面，提供了一种抗乙基葡萄糖醛酸苷
抗体或其功能性片段，所述抗体或其功能性片段包含重链可变区和
/
或轻链可变区，所述重链可变区含有
HFR1
‑ꢀ
HCDR1
‑
HFR2
‑
HCDR2
‑
HFR3
‑
HCDR3
‑
HFR4
的序列结构，所述轻链可变区区含有
LFR1
‑
LCDR1
‑ꢀ
LFR2
‑
LCDR2
‑
LFR3
‑
LCDR3
‑
LFR4
的序列结构，所述
HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR 1、 LCDR2、LCDR3
的氨基酸序列为上述的
HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、LCDR3
的氨基酸序列
。
[0010]为了实现上述目的，根据本专利技术的第三个方面，提供了一种抗乙基葡萄糖醛酸苷抗体，包括重链和
/
或轻链，所述重链包括上述的重链可变区，所述轻链包括上述的轻链可变区
。
[0011]为了实现上述目的，根据本专利技术的第四个方面，提供了一种抗体偶联物，所述抗体偶联物包括上述的抗体或其功能性片段
。
[0012]为了实现上述目的，根据本专利技术的第五个方面，提供了一种检测乙基葡萄糖醛酸苷的试剂或试剂盒，所述试剂或试剂盒包括上述的抗体或其功能性片段或上述的抗体偶联物
。
[0013]为了实现上述目的，本专利技术还提供了一种载体
、
一种细胞及一种制备上述抗体或其功能性片段的方法
。
附图说明
[0014]为了更清楚地说明本专利技术实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本专利技术的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图
。
[0015]图1为
Anti
‑
ETG
‑
3B5Mut1
至
Anti
‑
ETG
‑
3B5Mut5
的还原性
SDS
‑
PAGE
的结果
。
具体实施方式
[0016]本专利技术提供了一种抗体或其功能性本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种抗乙基葡萄糖醛酸苷抗体或其功能性片段，其特征在于，所述抗体或其功能性片段包括氨基酸序列如
SEQ ID NO:1
所示的
HCDR1、
氨基酸序列如
SEQ ID NO:2
所示的
HCDR2、
氨基酸序列如
SEQ ID NO:3
或
SEQ ID NO:15
所示的
HCDR3
，和氨基酸序列如
SEQ ID NO:4
所示的
LCDR1、
氨基酸序列如
SEQ ID NO:5
所示的
LCDR2、
氨基酸序列如
SEQ ID NO:6
或
SEQ ID NO:16
所示的
LCDR3。2.
根据权利要求1所述的抗体或其功能性片段，其特征在于，所述抗体或其功能性片段还包括氨基酸序列如
SEQ ID NO:7
至
SEQ ID NO:10
所示的
HFR1、HFR2、HFR3、HFR4
和氨基酸序列如
SEQ ID NO:11
至
SEQ ID NO:14
所示的
LFR1、LFR2、LFR3
和
LFR4
，或与所述各序列具有至少
80
％同一性的氨基酸序列；可选地，所述抗体或其功能性片段的
HFR3
的氨基酸序列如
SEQ ID NO:17
所示；可选地，所述抗体或其功能性片段的
LFR3
的氨基酸序列如
SEQ ID NO:18
所示；可选地，所述抗体或其功能性片段以
KD≤6.11
×
10
‑
10
M
的亲和力结合乙基葡萄糖醛酸苷
。3.
一种抗乙基葡萄糖醛酸苷抗体或其功能性片段，其特征在于，所述抗体或其功能性片段包含重链可变区和
/
或轻链可变区，所述重链可变区含有
HFR1
‑
HCDR1
‑
HFR2
‑
HCDR2
‑
HFR3
‑
HCDR3
‑
HFR4
的序列结构，所述轻链可变区区含有
LFR1
‑
LCDR1
‑
LFR2
‑
LCDR2
‑
LFR3
‑
LCDR3
‑
LFR4
的序列结构，所述
HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、LCDR3
的氨基酸序列为权利要求1所述的
HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、LCDR3
的氨基酸序列，所述
HFR1、HFR2、HFR3、HFR4、LFR1、LFR2、LFR3、LFR4
的氨基酸序列为权利要求2所述的
HFR1、HFR2、HFR3、HFR4、LFR1、LFR2、LFR3、LFR4
的氨基酸序列；可选地，所述重链可变区氨基酸序列如
SEQ ID NO:21
至
24
任一所示；可选地，所述轻链可变区氨基酸序列如
SEQ ID NO:25
至
28
任一所示
。4.
根据权利要求1至3任一所述的抗体或其功能性片段，其特征在于，所述抗体或其功能性片段还包含恒定区；可选地，所述恒定区包括重链恒定区和
/
或轻链恒定区；可选地，所述重链恒定区选自
IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgM、IgE
或
IgD
的重链恒定区；所述轻链恒定区选自
κ
型或
λ
型轻链恒定区；可选地，所述恒定区的种属来源为牛
、
马
、
猪
、
绵羊
、
山羊
、
大鼠
、
小鼠
、
狗
、
猫
、
兔
、
驴
、
鹿
、
貂
、
鸡
、
鸭
、
鹅或人；可选地，所述恒定区的种属来源为羊；可选地，所述重链恒定区序列如
SEQ ID N...

【专利技术属性】
技术研发人员：孟媛，钟冬梅，唐丽娜，马秋燕，
申请(专利权)人：东莞市朋志生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：