靶向制造技术

本公开涉及一种靶向

【技术实现步骤摘要】
靶向c
‑
MET的嵌合抗原受体、CAR
‑
M及其用途


[0001]本公开涉及临床
、
生物学
、
肿瘤学领域
。

技术介绍

[0002]胰腺癌发病率呈明显升高趋势，其预后极差，总体5年生存率仅约为
10
％
。
到
2030
年，胰腺癌有可能成为第二大癌症死亡原因
。
以嵌合抗原受体
‑
T
细胞
(CAR
‑
T)
为代表的过继免疫细胞治疗以及以
PD
‑
L1
以及
CTLA4
为代表的免疫检查点抑制治疗是肿瘤免疫治疗取得成功的里程碑事件，但是这两种治疗方法在胰腺癌中效果极其有限
。CAR
‑
T
在实体肿瘤中的应用面临诸多困难，仍未能有效解决
。
[0003]巨噬细胞
(CAR
‑
M)
较
CAR
‑
T
具有更强的肿瘤组织内浸润能力
、
吞噬及杀伤能力
、
抗原呈递能力以及微环境重塑能力，是细胞免疫治疗最前沿领域
。
巨噬细胞具有强大的向肿瘤组织中迁移的能力，从而解决了效应细胞不能进入肿瘤组织中的难题
。CAR
‑
M
会同时具有特异性和非特异的广泛吞噬及杀伤能力
。CAR
‑
M
细胞可以作为高效的抗原呈递细胞，继而激活效应
T
细胞
。
最后，作为肿瘤微环境调控的关键细胞，
CAR
‑
M
可以改善肿瘤微环境的免疫抑制状态
。
[0004]目前，仅有少量的
CAR
‑
M
临床前研究报道
。
迄今，
Clinicltrial.org
仅有一项注册临床研究
。Klichinsky
等开发了人
CAR
‑
PBCM
‑
HER2
并发现其可以明显延长
HER2
阳性的荷小鼠的生存期以及减少转移的肿瘤负荷
。
迄今，国内外未见
CAR
‑
M
在胰腺癌中的研究报道
。

技术实现思路

[0005]c
‑
MET
被称为细胞间质上皮转换因子，其为受体酪氨酸激酶家族成员，在多种肿瘤中被异常激活，促进肿瘤生长
。
专利技术人发现，
c
‑
MET
在胰腺癌中广泛高表达，促进胰腺癌进展，与患者预后呈负相关，可以成为
CAR
‑
M
治疗的潜在靶点
。
[0006]鉴于此，根据本申请的一些实施方案，提供了一种靶向
c
‑
MET
的构建体，并在体外验证了靶向
c
‑
MET
的
CAR
‑
M
细胞
(
以下简称
CAR
‑
M
‑
c
‑
MET
细胞
)
对高表达
c
‑
MET
的实体肿瘤
(
如胰腺癌
)
的特异性结合及杀伤能力
。
[0007]根据本申请的一些实施方案，提供了一种靶向人
c
‑
MET
的构建体
。
[0008]靶标是指本公开的构建体所针对的客体；靶标可以是核酸
(
基因
、mRNA
等
)
，也可以是蛋白
(
前体
、
成熟蛋白
、
同种型
、
变体等
)。
在本公开中，靶标尤其是指人
c
‑
MET
基因或其表达产物
。
[0009]本公开中人
c
‑
MET
应作做广泛的解读，是指人
c
‑
MET
基因本身及其在各阶段中各种形式的表达产物，例如但不限于基因在扩增
、
复制
、
转录
、
剪接
、
加工
、
翻译
、
修饰过程中所产生的分子，例如
cDNA、mRNA、
前体蛋白
、
成熟蛋白
、
天然变体
、
修饰形式
、
及其片段
。
[0010]作为一个具体的示例，本公开中的靶标是人
c
‑
MET
蛋白或肿瘤细胞表面表达的
c
‑
MET。
[0011]人
c
‑
MET
的核苷酸或氨基酸信息是本领域公知的，例如但不限于可以从文献或数
据库中获取
。
技术人员应当理解，人
c
‑
MET
不限于特定数据库中的登录号，还意图涵盖现有技术中任何文献
、
书籍
、
数据库中的等同指代物
。
[0012]根据本申请的一些实施方案，靶向人
c
‑
MET
的构建体是式1所示，按照从氨基端至羧基端的顺序：
[0013]信号肽
‑
scFv
‑
铰链区
‑
跨膜结构域
‑
细胞内激活信号结构域
(
式
1)。
[0014]可以根据
N
‑
和
C
‑
末端结构域的位置，对跨膜蛋白进行分类
。I、II、III
型为一次跨膜蛋白，
IV
型是多次跨膜蛋白
。I
型跨膜蛋白用停止
‑
传输锚定序列锚定到脂质膜上，其
N
‑
末端结构域在合成时瞄准于内质网腔，如果成熟形式是位于质膜上，则
N
‑
末端结构域则瞄准于细胞外间隙
。
[0015]鉴于上述，原则上任何
I
型跨膜蛋白的信号肽均适用于本申请的信号肽
。
作为一个非限制性示例，信号肽是
CD8
信号肽或
igk
信号肽
。
一些具体的实施方案中，所述
CD8
信号肽是
SEQ本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种靶向人
c
‑
MET
的构建体，其是式1所示，按照从氨基端至羧基端的顺序：信号肽
‑
scFv
‑
铰链区
‑
跨膜结构域
‑
细胞内激活信号结构域
(
式
1)
；其中：所述信号肽是
I
型跨膜蛋白的信号肽，优选
CD8
信号肽
、igk
信号肽；所述
scFv
特异性结合人
c
‑
MET
，所述
scFv
包含重链可变区
(VH)、
接头和轻链可变区
(VL)
；所述重链可变区包含：
SEQ ID No
：3所示的
HCDR1、SEQ IDNo
：4所示的
HCDR2、SEQ ID No
：5所示的
HCDR3
；所述轻链可变区包含：
SEQ ID No
：6所示的
LCDR1、SEQ IDNo
：7所示的
LCDR2
和
SEQ ID No
：8所示的
LCDR3
；所述重链可变区和所述轻链可变区能够互换顺序；优选地，所述铰链区选自以下的任一项：
CD8
的铰链区
、CD28
的铰链区
、IgG1
的铰链区
、IgG4
的铰链区；优选地，所述跨膜结构域选自以下的任一项：
CD8
跨膜结构域
、CD3
ζ
跨膜结构域
、CD4
跨膜结构域
、CD28
跨膜结构域；所述细胞内激活信号结构域包含：
FCER1G
的免疫受体酪氨酸激活结构域和
CD19
的
YXXM
结构域；所述
FCER1G
的免疫受体酪氨酸激活结构域和所述
CD19
的
YXXM
结构域能够互换顺序
。2.
根据权利要求1所述的靶向人
c
‑
MET
的构建体，其是选自以下任一项所示：式1‑
1、
式1‑
2、
式1‑
3、
式1‑
4、
式1‑
5、
式1‑6所示，按照从氨基端至羧基端的顺序：信号肽
‑
VH
‑
接头
‑
VL
‑
铰链区
‑
跨膜结构域
‑
细胞内激活信号结构域
(
式1‑
1)
；信号肽
‑
VL
‑
接头
‑
VH
‑
铰链区
‑
跨膜结构域
‑
细胞内激活信号结构域
(
式1‑
2)
；信号肽
‑
VH
‑
接头
‑
VL
‑
铰链区
‑
跨膜结构域
‑
FCER1G
的免疫受体酪氨酸激活结构域
‑
YXXM
结构域
(
式1‑
3)
；信号肽
‑
VL
‑
接头
‑
VH
‑
铰链区
‑
跨膜结构域
‑
FCER1G
的免疫受体酪...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑淮今，刘乔飞，吴文铭，廖泉，赵玉沛，
申请(专利权)人：中国医学科学院北京协和医院，
类型：发明
国别省市：