一种制造技术

本发明专利技术属于动物病毒抗体检测领域，公开了一种

【技术实现步骤摘要】
一种MysB
‑
A27L重组蛋白及其制备方法和应用


[0001]本专利技术属于病毒抗体检测领域，具体地，涉及一种
MysB
‑
A27L
重组蛋白及其制备方法和应用
。

技术介绍

[0002]牛结节性皮肤病
(lumpyskin sisease
，
LSD)
，又称牛结节疹
、
牛疙瘩皮肤病，是由痘病毒科山羊痘病毒属的牛结节性皮肤病病毒
(lumpyskin disease virus
，
LSDV)
引起的一种牛的全身性感染疫病
。
牛结节性皮肤病的临床症状主要表现为体温升高
、
浅表淋巴结的肿大
、
皮肤表面出现广泛性的结节及皮肤水肿等
。LSD
的发病率为2％～
45
％，死亡率低于
10
％
。
然而
LSD
严重影响牛的生产性能
、
产奶量和身体状况，给
LSD
流行国家和地区的养生业及相关畜产品产业造成了严重威胁和巨大的经济损失
。
世界动物卫生组织
(WOAH)
将
LSD
列为必须通报的疫病之一，我国现按二类动物疫病进行管理
。
[0003][0004]LSD
的高效
、
快速
、
准确的诊断，是成功控制和根除
LSD
的基础
。LSD
主要通过临床和实验室诊断检测方法进行确诊，其中实验诊断包括病毒的分离与鉴定
、
分子生物学和血清学诊断检测等
。
临床诊断方法主要适用于对重症
LSD
病例的诊断，可通过其特征性的临床症状进行识别；但对于
LSD
感染初期
、
轻度或无症状病例，无法使用临床诊断方法进行区分，需要采用实验室检测方法进行确诊
。
病毒的分离培养与鉴定方法周期长，技术要求高且需在生物安全三级实验室
(ABSL
‑
3)
中进行
。
病毒中和试验是血清学检测中特异性最高的方法，但由于
LSDV
感染后主要表现为细胞免疫应答反应，产生的中和抗体水平较低，因该方法敏感性欠佳易造成假阴性结果
。
牛结节性皮肤病病毒
、
绵羊痘病毒和山羊痘病毒在基因组水平上的同源性达
96
％以上，所以，无法利用血清学检测方法对
LSD
进行鉴别诊断
。
分子生物学方法是敏感性和特异性较高的方法，现已被广泛应用于
LSDV
检测与鉴别诊断中
。
在
LSD
发病的早或初期阶段，采用分子生物学技术的核酸检测方法可准确
、
快速的进行检测诊断
。
但在
LSD
感染的后期阶段或疫苗免疫状态时，
LSDV
在体内的增殖水平较低，分子生物学检测方法较难检测出
LSDV
，容易造成漏诊或误诊
。

技术实现思路

[0005]为了解决上述问题中的至少一个问题，本专利技术提供了一种
MysB
‑
A27L
重组蛋白及其制备方法和应用
。
[0006]为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
[0007]本专利技术第一方面提供了一种
MysB
‑
A27L
重组蛋白，所述重组蛋白包括
SEQ ID NO.1
所示的氨基酸序列
。
[0008]在本专利技术中，重组蛋白也叫融合蛋白或者重组融合蛋白，是通过
DNA
重组技术将两个基因重组后得到的表达产物
。
[0009]A27L
是山羊痘病毒的一种
IMV
表面蛋白，可在病毒粘附过程中发挥重要作用，并能
够诱导和启动机体免疫系统产生免疫应答，山羊痘病毒属于痘病毒科
(poxiridae)、
脊椎动物痘病毒亚科
(chodopoxvirdae)
羊痘病毒属
(Capripoxvirus)
的成员，该属包括山羊痘病毒
(Goa t pox virus
；
GTPV)、
绵羊痘病毒
(Sheeppox virrus
，
P)
和疙瘩皮肤病病毒
(Lumpy skin disease virus
；
LSDV)3
个成员
。
山羊痘病毒其与猴痘病毒
、
天花病毒
、
牛痘病毒高度同源，彼此之间存在交叉保护，当此蛋白被用作检测抗原检测
LSDV
时，势必存在错检和漏检的风险，为了降低此风险，本专利技术将大肠杆菌的家族蛋白
MysB
与之融合在一起表达，如此不仅提高了对牛结节性皮肤病病毒诊断的灵敏度，还减少了于其他病原体的交叉反应
。
[0010]在一些具体实施方案中，优选地，所述重组蛋白由
SEQ ID NO.1
所示的氨基酸序列组成
。
[0011]本专利技术的第二方面提供了一种核酸，所述核酸编码第一方面所述的
MysB
‑
A27L
重组蛋白
。
[0012]在一些具体实施方案中，所述核酸的序列如
SEQ ID NO.2
所示
。
[0013]利用该核酸序列在大肠杆菌中表达所述重组蛋白，根据大肠杆菌对密码子的偏好性，对密码子进行了优化
。
由于不同物种对同义密码子的使用频率是不同的，而这种密码子偏好性对翻译过程有影响
。
如果一条
mRNA
有很多成簇的稀有密码子，这会对核糖体的运动速度造成负面影响，大大降低蛋白表达水平
。
本专利技术利用大肠杆菌作为表达系统，为了获得更高的表达效率和更高的表达量，在进行外源蛋白表达时进行了密码子优化，适用于大肠杆菌表达，提高蛋白表达效率
。
[0014]本专利技术的第三方面提供了一种表达载体，包括第二方面所述核酸
。
[0015]在本专利技术的一些实施方案中，所述表达载体为
pET30a
，使其具有卡那霉素抗性，表达的融合蛋白具有组氨酸
(His)
标签
。
[0016]本专利技术的第四方面提供了一种宿主细胞，含有第三方面所述表达载体
。
[0017]在本专利技术的一些实施方案中，所述宿主细胞为原核宿主细胞，优选地，宿主细胞选择大肠杆菌，利本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种
MysB
‑
A27L
重组蛋白，其特征在于：所述重组蛋白包括
SEQ ID NO.1
所示的氨基酸序列
。2.
一种核酸，其特征在于：所述核酸编码权利要求1所述的
MysB
‑
A27L
重组蛋白
。3.
根据权利要求2所述的一种核酸，其特征在于：所述核酸的序列如
SEQ ID NO.2
所示
。4.
一种表达载体，其特征在于，包括权利要求2或3所述核酸
。5.
一种宿主细胞，其特征在于，含有权利要求4所述表达载体
。6.
一种制备权利要求1所述
MysB
‑
A27L
重组蛋白的方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1、
质粒构建，原核表达将权利要求2或3所述的重组蛋白
MysB
‑
A27L
核酸序列连接到表达载体质粒中，将连接好的质粒转入宿主细胞中进行诱导表达；
S2、
破菌
、
离心收集表达后的菌体，用缓冲液
Binding Buffer
重悬，超声破碎菌体，之后经离心，弃上清，沉淀用含有
50mM...

【专利技术属性】
技术研发人员：王盈盈，马湘琳，胡小芳，吴晓杰，
申请(专利权)人：杭州爱谨生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：