一种鼻疽杆菌重组蛋白制造技术

本发明专利技术属于动物病毒抗体检测领域，公开了一种鼻疽杆菌重组蛋白

【技术实现步骤摘要】
一种鼻疽杆菌重组蛋白、试剂盒及其制备方法


[0001]本专利技术属于病毒抗体检测领域，具体地，涉及一种鼻疽杆菌重组蛋白
、
试剂盒及其制备方法
。

技术介绍

[0002]马鼻疽
(Glanders)
是由鼻疽杆菌引起的马
、
骡
、
驴等单蹄动物的一种高度接触性的致死性传染病，人也可感染
。
鼻疽病马以及患鼻疽的其它动物均为本病的传染源
。
病菌随鼻涕
、
皮肤的溃疡分泌物等排出体外，污染用具
、
草料
、
饮水
、
厩舍等
。
通过同槽饲养
、
同桶饮水
、
互相啃咬等经消化道感染，驴
、
骡最易感
。
人和多种温血动物都对本病易感
。
反刍动物中的牛
、
山羊
、
绵羊人工接种也可发病，但狼
、
狗
、
绵羊和山羊偶尔也会自然感染本病
。
捕获的野生狮
、
虎
、
豹
、
豺和北极熊因吃病畜肉也得此病而死亡
。
本病一年四季均可发生，潜伏期为6个月
。
临床上常分为急性型和慢性型，急性型发病较为严重可致死
。
[0003]我国已于
2004
年消灭马鼻疽，但亚洲和南美洲仍有马鼻疽疫情发生，存在传入我国的风险
。
对马的管理是控制马鼻疽疫情的关键
。
因此，研究有效的快速简便适于现场使用的鼻疽杆菌感染的方法对控制该疫情具有重要意义
。
[0004]鼻疽杆菌常用的检验方法包括病原分离鉴定
、
聚合酶链式反应
、
鼻疽菌素试验和血清学检验
。
开放性鼻疽的诊断以临床检查为主，病变不典型的，则须进行鼻疽菌素点眼试验或血清学试验
。
但检疫方法的时间长，且受人为因素的影响较大
。
胶体金方法操作简单，时间短，结果较准确，且受人为因素干扰少，适合用于大规模的检测，胶体金方法中抗原最为重要，影响着检测结果的准确性，因此，亟待开发出适用于特异检测的抗原
。

技术实现思路

[0005]为了解决上述问题中的至少一个问题，本专利技术提供了一种鼻疽杆菌重组蛋白
、
试剂盒及其制备方法
。
[0006]为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：本专利技术第一方面提供了一种鼻疽杆菌重组蛋白，包括
SEQ ID NO.5
或
SEQ ID NO.7
所示氨基酸序列
。
[0007]在本专利技术的一些具体实施方案中，一种鼻疽杆菌重组蛋白，由
SEQ ID NO.5
或
SEQ ID NO.7
所示氨基酸序列组成
。
[0008]在本专利技术中，所述的重组蛋白
、
融合蛋白
、
重组融合蛋白和融合重组蛋白具有相同的含义，均是指通过
DNA
重组技术得到的两个基因重组后的表达产物
。
[0009]可以看出，第一方面所述的鼻疽杆菌重组蛋白由包括
SEQ ID No. 1
所示氨基酸序列的
0375H
蛋白和包括
SEQ ID No. 3
所示氨基酸序列的
Tssb
蛋白片段中间用
GSGSG
（
SEQ ID No. 9
）连接重组而成
。
其中，编码氨基酸序列如
SEQ ID No. 1
所示的
0375H
蛋白的基因根据
NCBI Gene bank AAU46487.1
的蛋白序列设计的，其核苷酸序列如
SEQ ID No. 2
所示；编码氨基酸序列如
SEQ ID No. 3
所示的
Tssb
蛋白的基因其核苷酸序列如
SEQ ID No. 4
所示；本
专利技术将
0375H
全长蛋白和
Tssb
蛋白部分片段融合在一起表达，不仅能够提高诊断的灵敏度，还能减少与其他病原体的交叉反应
。
[0010]在本专利技术的一些具体实施方案中，优选地，鼻疽杆菌重组蛋白由
SEQ ID No. 5
所示氨基酸序列组成，在检测鼻疽杆菌抗体时，具有优异的灵敏性和特异性
。
[0011]本专利技术的第二方面提供了一种编码第一方面所述的重组蛋白的基因，包括
SEQ ID NO.6
或
SEQ ID NO.8
所述核苷酸序列
。
其中，包括
SEQ ID No. 6
所示核苷酸序列的基因编码包括
SEQ ID No. 5
所示氨基酸序列的鼻疽杆菌重组蛋白；包括
SEQ ID No. 8
所示核苷酸序列的基因编码包括
SEQ ID No. 7
所示氨基酸序列的鼻疽杆菌重组蛋白
。
[0012]该基因序列是为了在大肠杆菌中表达所述重组蛋白，根据大肠杆菌对密码子的偏好性，对密码子进行了优化
。
不同物种对同义密码子的使用频率是不同的，而这种密码子偏好性对翻译过程有影响
。
如果一条
mRNA
有很多成簇的稀有密码子，这会对核糖体的运动速度造成负面影响，大大降低蛋白表达水平
。
在此对基因序列进行密码子优化，适用于大肠杆菌表达，可以提高蛋白表达效率
。
[0013]本专利技术的第三方面提供了一种表达载体，包括第二方面所述基因
。
在本专利技术的一些实施方案中，所述表达载体为
pET30a
，其具有卡那霉素抗性，表达的融合蛋白具有组氨酸（
His
）标签
。
[0014]本专利技术的第四方面提供了一种宿主细胞，含有第三方面所述表达载体
。
在本专利技术的一些实施方案中，所述宿主细胞为原核宿主细胞
。
优选地，所述宿主细胞为大肠杆菌，更优选地，大肠杆菌为
BL21。
利用大肠杆菌进行表达具有周期短
、
成本低
、
表达量大等优点
。
[0015]本专利技术的第五方面提供了第一方面所述的重组蛋白在制备用于检测鼻疽杆菌抗体的试剂盒中的应用
。
[0016]本专利技术的第六方面提供了一种用于检测鼻疽杆菌抗体的试剂盒，包含第一方面所述的重组蛋白
。
在一些具体实施方案中，试剂盒还包括...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种鼻疽杆菌重组蛋白，其特征在于，包括
SEQ ID NO.5
或
SEQ ID NO.7
所示氨基酸序列
。2.
一种编码权利要求1所述的重组蛋白的基因，其特征在于，包括
SEQ ID NO.6
或
SEQ ID NO.8
所述核苷酸序列
。3.
一种表达载体，其特征在于，包括权利要求2所述基因
。4.
一种宿主细胞，其特征在于，含有权利要求3所述表达载体
。5.
权利要求1所述的重组蛋白在制备用于检测鼻疽杆菌抗体的试剂盒中的应用
。6.
一种用于检测鼻疽杆菌抗体的试剂盒，其特征在于，包含权利要求1所述的重组蛋白
。7.
根据权利要求6所述的一种用于检测鼻疽杆菌抗体的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括用于检测鼻疽杆菌抗体的试纸条
。8.
根据权利要求7所述的一种用于检测鼻疽杆菌抗体的试剂盒，其特征在于，所述试纸条的制备包括如下步骤：（1）在三角烧瓶中加入一定体积的超纯水，在磁力加热搅拌器上加热至沸腾，然后加入
10%
氯金酸和
10%
柠檬酸三钠溶液，继续加热沸腾，冷却至室温后用
0.22
μ
m
过滤器过滤胶体金，得到胶体金溶液1，放置
4℃
备用；（2）向冷却后的胶体金溶液1中加入
0.2M K2CO3调节至
pH 8.0
，加入
r
‑
SPA
，搅拌后加入
10g/L
：
10g/L
的
Tris
‑
Casein
溶液，再次搅拌后
11000rpm
离心
15
‑
...

【专利技术属性】
技术研发人员：安佳绮，马湘琳，胡小芳，吴晓杰，
申请(专利权)人：杭州爱谨生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：