一种鉴别蜀羊泉的引物探针组及实时荧光制造技术

本发明专利技术属于药材鉴定领域，具体涉及一种鉴别蜀羊泉的引物探针组及实时荧光

【技术实现步骤摘要】
一种鉴别蜀羊泉的引物探针组及实时荧光PCR鉴别方法


[0001]本专利技术属于药材鉴定领域，具体涉及一种鉴别蜀羊泉的引物探针组及实时荧光
PCR
鉴别方法
。

技术介绍

[0002]蜀羊泉是茄科植物青杞
Solanum SptemlobumBunge.
的全草，始载于
《
神农本草经
》
，列为中品
。
具有清热解毒的功效，用于热毒疮痈，咽喉肿痛，皮肤痒疹等
。
白英是茄科植物白英
Solanum lyratumThunb.
的干燥全草，具有清热利湿
、
解毒消肿的功效，用于风热感冒
、
咳嗽等
。
二者别名均有“白毛藤”之称，现代药用较为混乱
。
[0003]各省中药材标准或中药饮片炮制规范中，蜀羊泉检测方法为显微鉴别，白英与蜀羊泉均为全草给药，药材市场上均为干燥全草碎块，经加工处理后，外观和显微特征受到一定破坏，许多药材特征点消失或重合，因而从性状
、
显微角度无法鉴定准确基原
。2020
年版
《
中国药典
》
四部通则中药材
DNA
条形码分子鉴定法指导原则项下的核糖体
DNA
第二内部转录间隔区
TIS2
‑
ITS3
或叶绿体
psbA
‑
trnH
为引物的
>DNA
条形码技术可以从
DNA
层面鉴别白英
、
蜀羊泉药材，但对于混合样品则不适用
。

技术实现思路

[0004]针对现有技术中存在的无法准确的鉴别真伪等问题，本专利技术提供了一种鉴别蜀羊泉的引物探针组
。
[0005]本专利技术还提供了上述引物探针组用于实时鉴别蜀羊泉的荧光
PCR
方法，填补了该领域的技术空白，规范了蜀羊泉药材的市场秩序；本专利技术所提供的实时荧光
PCR
方法，与
DNA
条形码技术相比较准确度更高，更快捷，无需一代测序，节约试验成本，其对于混合样品能快速准确的鉴别蜀羊泉
。
[0006]本专利技术为了实现上述目的所采用的技术方案为：本专利技术提供了一种鉴别蜀羊泉的引物探针组，所述引物探针组为：
SYQ
‑
F
：
5'
‑ꢀ
TATAAAATCAAACTCGAATACTCAA
ꢀ‑
3'
；
SYQ
‑
R2
：
5'
‑ꢀ
AGTATTTTATTGACATAGACTTTTT
ꢀ‑
3'
；
SYQ
‑
P
：
5'FAM
‑ꢀ
AAATGCAGGCAAATACCCTCTCC
ꢀ‑
3'BHQ1。
[0007]进一步的，所述引物探针组特异性识别的蜀羊泉的基因序列为：
CACTGCCTTGATCCACTTGGCTACATCCGCCCCCTCGTCTACTTACAGTCCATTTTTACATTATTTAAATTAGAAAACAAAAGAGTAAAGTTCGAATATTTCTCTTCTTTCTTATTTCAATGATATTATTATTTCGATTATTATTTCAAAGAATAAGAATATGAAGTAAAAATTCTATTTTTTGTGAAATGAAATAAAAAAGATATAGTAACATTAGCAACAAGAGGAACAAGTTATATTTCTACAATTTTCAATAAATATAAAATCAAACTCGAATACTCAATCATGAATAAATGCAGGCAAATACCCTCTCCTTCTTTTTCTATAATGTAAACAAAAAAGTCTATGTCAATAAAATACTAGGAAATTAATAAAGAAAAAGAAAAAAAGAAAGGAGCAATAGCACCCTCTTGATAGAACAAGAAAATGGTTATTGCTCCTTTCTTTTCAAAACCTCCTATAGACTAGGCTCGGATCTTATCCATTTGTAGATGGAGCTTCGATAGCAGCTAGGTCTAGAGGGA
AG。
[0008]本专利技术还提供了一种含有上述鉴别蜀羊泉的引物探针组的检测试剂盒
。
[0009]本专利技术的另一目的为提供了一种上述鉴别蜀羊泉的引物探针组用于实时鉴别蜀羊泉的荧光
PCR
方法，包括以下步骤：（1）提取待测样品的模板
DNA
；（2）
PCR
反应体系配制：荧光
PCR
反应混合液，探针，上下游引物，供试品溶液，灭菌超纯水；（3）对照反应体系为用等体积对照药材溶液代替供试品溶液的反应体系；空白对照反应体系为用等体积灭菌超纯水代替供试品溶液的反应体系；供试品及对照均设二个重复，
CT
值取二个重复的平均值作为最终结果；（4）进行
PCR
反应，进行定性检测
。
[0010]进一步的，步骤（2）中，所述
PCR
反应体系具体为：总体积为
20
µ
L
，分别加入荧光
PCR
反应混合液（2×
）
10
µ
L
，探针（
2.5
µ
mol/L
）1µ
L
，上下游引物（5µ
mol/L
）各1µ
L
，供试品溶液1µ
L
，灭菌超纯水6µ
L。
[0011]进一步的，步骤（3）中，所述对照反应体系包括阳性对照和阴性对照；所述阳性对照为蜀羊泉药材；所述阴性对照为白英对照药材
。
[0012]本专利技术提供的鉴别方法，所述
PCR
反应的参数为：阶段1：
95℃
，3分钟；阶段2：
95℃
，
10
秒，
62℃
，
35
秒，
40
个循环
。
[0013]进一步的，鉴别过程中的判定原则为：白英无荧光对数增长，蜀羊泉有荧光对数增长，且相应的
CT
值＜
32.0。
[0014]本专利技术的有益效果为：本专利技术以蜀羊泉为研究对象，以白英
、
蜀羊泉的叶绿体基因序列为基础，研究找出蜀羊泉的特异性引物及探针，将引物
、
探针及荧光
PCR
方法应用蜀羊泉药材中，该方法快捷
、
准确
、
有效
、
安全，能够实现对蜀羊泉药材的定性检测
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种鉴别蜀羊泉的引物探针组，其特征在于，所述引物探针组为：
SYQ
‑
F
：
5'
‑ꢀ
TATAAAATCAAACTCGAATACTCAA
ꢀ‑
3'
；
SYQ
‑
R2
：
5'
‑ꢀ
AGTATTTTATTGACATAGACTTTTT
ꢀ‑
3'
；
SYQ
‑
P
：
5'FAM
‑ꢀ
AAATGCAGGCAAATACCCTCTCC
ꢀ‑
3'BHQ1。2.
根据权利要求1所述的鉴别蜀羊泉的引物探针组，其特征在于，所述引物探针组特异性识别的蜀羊泉的基因序列为：
CACTGCCTTGATCCACTTGGCTACATCCGCCCCCTCGTCTACTTACAGTCCATTTTTACATTATTTAAATTAGAAAACAAAAGAGTAAAGTTCGAATATTTCTCTTCTTTCTTATTTCAATGATATTATTATTTCGATTATTATTTCAAAGAATAAGAATATGAAGTAAAAATTCTATTTTTTGTGAAATGAAATAAAAAAGATATAGTAACATTAGCAACAAGAGGAACAAGTTATATTTCTACAATTTTCAATAAATATAAAATCAAACTCGAATACTCAATCATGAATAAATGCAGGCAAATACCCTCTCCTTCTTTTTCTATAATGTAAACAAAAAAGTCTATGTCAATAAAATACTAGGAAATTAATAAAGAAAAAGAAAAAAAGAAAGGAGCAATAGCACCCTCTTGATAGAACAAGAAAATGGTTATTGCTCCTTTCTTTTCAAAACCTCCTATAGACTAGGCTCGGATCTTATCCATTTGTAGATGGAGCTTCGATAGCAGCTAGGTCTAGAGGGAAG。3.
一种含有如权利要求1所述的鉴别蜀羊泉的引物探针组的检测试剂盒
。4.
一种权利要求1所述的鉴别蜀羊泉的引物探针组用于实时鉴别蜀羊泉的荧光
PCR
方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）提取待测样...

【专利技术属性】
技术研发人员：解盈盈，汪冰，林永强，王晓彤，崔伟亮，刘洪超，栾永福，梅桂雪，
申请(专利权)人：山东省食品药品检验研究院，
类型：发明
国别省市：