一种检测9种致病细菌的引物探针组和微流控芯片制造技术

本发明专利技术公开了一种检测9种致病细菌的引物探针组和微流控芯片，属于生物检测技术领域

【技术实现步骤摘要】
一种检测9种致病细菌的引物探针组和微流控芯片


[0001]本专利技术属于生物检测
，具体涉及一种检测9种致病细菌的引物探针组和微流控芯片
。

技术介绍

[0002]传统的生物威胁病原检测方法包括：细菌培养
、
生化分析
、
细胞和动物实验等，这些方法不仅所需设备数量和种类多
、
体积庞大，而且操作过程繁琐
、
检测周期长，无法满足现场快速检测的要求
。
基于扩增的核酸检测方法，可以实现多种细菌
、
病毒或真菌等的并行
、
快速
、
高灵敏度和高特异性检测，是生物威胁病原检测的一种理想方法
。
但是，常规的核酸检测技术，一方面自动化程度低，例如需要手动利用试剂盒进行核酸提取等，极大增加了操作者遭受生物战剂危害的风险，容易造成人员伤亡；另一方面，核酸提取
、
扩增和检测分离等操作，容易导致样品污染
、
出现假阳性等问题，无法满足生物威胁病原现场一体化快速检测的迫切要求
。
[0003]20
世纪
90
年代发展起来的微流控技术，具有样品和试剂消耗量极少
、
灵敏度高
、
检测速度快
、
通量高
、
微型化
、
集成化和便携化等优点
。
因此，近年来研究者提出利用微流控技术，将核酸提取
、/>扩增和检测全部集成在封闭的微流控芯片中，既可以有效降低检测人员遭受生物危害的风险，又可以避免出现污染和假阳性等问题，但是目前并没有针对炭疽芽孢杆菌
、
土拉弗朗西斯菌
、
霍乱弧菌
、
鼻疽伯克霍尔德菌
、
类鼻疽伯克霍尔德菌
、
鼠疫耶尔森菌
、
布鲁菌
、
鹦鹉热衣原体和
Q
热立克次体的微流控芯片
。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供一种检测9种致病细菌的引物探针组和微流控芯片，灵敏度高，特异性好
。
[0005]本专利技术提供了一种检测9种致病细菌的引物探针组，包括针对炭疽芽孢杆菌
(Bacillus anthracis)、
土拉弗朗西斯菌
(Francisella tularensis)、
霍乱弧菌
(Vibrio cholerae)、
鼻疽伯克霍尔德菌
(Burkholderia mallei)、
类鼻疽伯克霍尔德菌
(Burkholderiapseudomallei)、
鼠疫耶尔森菌
(Yersiniapestis)、
布鲁菌
(Brucella)、
鹦鹉热衣原体
(Chlamydiapsittaci)
和
Q
热立克次体
(Coxiella burnetii)
的保守序列依次设计的引物探针组
。
[0006]优选的，所述
Q
热立克次体
、
鹦鹉热衣原体
、
鼠疫耶尔森菌
、
类鼻疽伯克霍尔德菌
、
布鲁菌
、
炭疽芽孢杆菌
、
鼻疽伯克霍尔德菌
、
土拉弗朗西斯菌和霍乱弧菌的保守序列的核苷酸序列依次如
SEQ ID No.28
～
SEQ ID No.36
所示
。
[0007]优选的，针对所述
Q
热立克次体设计的引物探针组的核苷酸序列如
SEQ IDNo.1
～
SEQ ID No.3
所示；
[0008]针对所述鹦鹉热衣原体设计的引物探针组的核苷酸序列如
SEQ ID No.4
～
SEQ ID No.6
所示；
[0009]针对所述鼠疫耶尔森菌设计的引物探针组的核苷酸序列如
SEQ ID No.7
～
SEQ ID No.9
所示；
[0010]针对所述类鼻疽伯克霍尔德菌设计的引物探针组的核苷酸序列如
SEQ ID No.10
～
SEQ ID No.12
所示；
[0011]针对所述布鲁菌设计的引物探针组的核苷酸序列如
SEQ ID No.13
～
SEQ IDNo.15
所示；
[0012]针对所述炭疽芽孢杆菌设计的引物探针组的核苷酸序列如
SEQ ID No.16
～
SEQ ID No.18
所示；
[0013]针对所述鼻疽伯克霍尔德菌设计的引物探针组的核苷酸序列如
SEQ ID No.19
～
SEQ ID No.21
所示；
[0014]针对所述土拉弗朗西斯菌设计的引物探针组的核苷酸序列如
SEQ ID No.22
～
SEQ ID No.24
所示；
[0015]针对所述霍乱弧菌设计的引物探针组的核苷酸序列如
SEQ ID No.25
～
SEQ ID No.27
所示
。
[0016]优选的，在每条探针的5’
端标记荧光基团，3’
端标记淬灭基团
。
[0017]本专利技术还提供了上述引物探针组在制备检测9种致病细菌的工具中的应用
。
[0018]优选的，所述工具包括微流控芯片
。
[0019]本专利技术还提供了一种同时检测9种致病细菌的微流控芯片，所述微流控芯片包括上述引物探针组
。
[0020]优选的，所述引物探针组固化在微流控芯片中
。
[0021]优选的，当利用所述微流控芯片进行所述9种致病细菌的检测时，
Ct
值大于
40
认定为阴性，
Ct
值为
40
时需重新检测，0＜
Ct
值＜
40
时认定为阳性
。
[0022]优选的，每一种致病细菌的引物探针组的固化，包括以下步骤：将上游引物
、
下游引物和探针共同溶解到无菌水中，得引物探针液；将溶解后的琼脂糖加入所述引物探针液中，混合均匀，得混合液；利用所述混合液点样反应孔，冻干后进行芯片封装
。
[0023]有益效果：本专利技术提供了一种检测9种致病细菌的引物探针组，包括针对炭疽芽孢杆菌
、
土拉弗朗西斯菌
、
霍乱弧菌
、
鼻疽伯克霍尔德菌
、
类鼻疽本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种检测9种致病细菌的引物探针组，其特征在于，包括针对炭疽芽孢杆菌
(Bacillus anthracis)、
土拉弗朗西斯菌
(Francisella tularensis)、
霍乱弧菌
(Vibrio cholerae)、
鼻疽伯克霍尔德菌
(Burkholderia mallei)、
类鼻疽伯克霍尔德菌
(Burkholderiapseudomallei)、
鼠疫耶尔森菌
(Yersiniapestis)、
布鲁菌
(Brucella)、
鹦鹉热衣原体
(Chlamydiapsittaci)
和
Q
热立克次体
(Coxiella burnetii)
的保守序列依次设计的引物探针组
。2.
根据权利要求1所述引物探针组，其特征在于，所述
Q
热立克次体
、
鹦鹉热衣原体
、
鼠疫耶尔森菌
、
类鼻疽伯克霍尔德菌
、
布鲁菌
、
炭疽芽孢杆菌
、
鼻疽伯克霍尔德菌
、
土拉弗朗西斯菌和霍乱弧菌的保守序列的核苷酸序列依次如
SEQ ID No.28
～
SEQ ID No.36
所示
。3.
根据权利要求1或2所述引物探针组，其特征在于，针对所述
Q
热立克次体设计的引物探针组的核苷酸序列如
SEQ ID No.1
～
SEQ ID No.3
所示；针对所述鹦鹉热衣原体设计的引物探针组的核苷酸序列如
SEQ ID No.4
～
SEQ ID No.6
所示；针对所述鼠疫耶尔森菌设计的引物探针组的核苷酸序列如
SEQ ID No.7
～
SEQ ID No.9
所示；针对所述类鼻疽伯克霍尔德菌设计的引物探针组的核苷酸序列如
SEQ ID No.10
～
SEQ ID No.12...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘鹏，李倩，律清宇，黄文华，江华，姜永强，
申请(专利权)人：中国人民解放军军事科学院军事医学研究院，
类型：发明
国别省市：