【技术实现步骤摘要】
乳制品中副干酪乳杆菌活菌数字PCR定量检测方法
[0001]本专利技术属于微生物
,具体地说,是一种乳制品中副干酪乳杆菌活菌数字
PCR
定量检测方法
。
技术介绍
[0002]副干酪乳杆菌是一种革兰氏阳性同型发酵乳酸菌,是乳杆菌属的重要成员,广泛存在于人体肠道
、
传统发酵乳制品和泡菜等环境中
。
有研究表明,优良的副干酪乳杆菌具有较好的抗胃肠道消化能力等益生特性且对宿主安全
。
其代谢物如有机酸和细菌素等可抑制病原菌生长
。
通过胞外酶作用分解蛋白产生的小肽分子具有降血压
、
抗肿瘤和抗氧化等功能,在健康和功能性食品中得到广泛应用
。
[0003]我国现行有效的乳酸菌定量检测方法标准为
GB 4789.35
‑
2016
,可采用平板计数法对样品中所有乳酸菌进行计数,检测周期长,且不能对单一种类的乳酸菌进行区分计数,难以满足日益壮大的多元复合乳酸菌产品市场
。
[0004]ddPCR
作为一种新兴的检测技术已被成功用于临床诊断
、
转基因成分定量
、
单细胞基因表达
、
环境微生物检测等领域
。
例如
2017
年赵丽青等利用微滴式数字
PCR
技术定量检测食品中单核细胞增生李斯特氏菌,检出限为
(3.6
±
0.1 ...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.
一种乳制品中副干酪乳杆菌活菌数字
PCR
定量检测方法,其特征在于,使用以下引物和探针序列:正向引物
cad A
‑
F
:
CCGGGTGCATTGGTGATT
和
CCTGGTGCATTGGTGATT
的混合物;反向引物
cad A
‑
R
:
CACATCCCCGCCTTTGATC
;探针
cad A
‑
P
:
CGCCCCCGTCAGCAATGTTGTC。2.
根据权利要求1所述的数字
PCR
定量检测方法,其特征在于
:
所述数字
PCR
的反应体系如下:
ddPCR master mix for Probes(no dUTP)10
μ
L
,上
、
下游引物各
1.8
μ
L(
终浓度
900nmol/L)
,探针
0.5
μ
L(
终浓度
250nmol/L)
,经
PMA
处理并曝光后的样品
DNA
模板2μ
L
,用双蒸水补足总体积
20
μ
L
;所述数字
PCR
的扩增反应条件如下:
95℃
预变性
10min
;
94℃
变性
30s
,
55
~
60℃
退火
1min
,
40
个循环;
98℃
固化微滴
10min。3.
根据权利要求2所述的数字
...
【专利技术属性】
技术研发人员:张奕南,刘洋,杨捷琳,杨娟,赵磊,
申请(专利权)人:上海市质量监督检验技术研究院,
类型:发明
国别省市:
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。