基于制造技术

本发明专利技术涉及细菌检测技术领域，公开了基于实时荧光定量多酶恒温快速扩增

【技术实现步骤摘要】
基于Real
‑
time MIRA技术检测高毒力肺炎克雷伯菌peg344基因和incA基因的引物探针组及其应用


[0001]本专利技术涉及细菌检测
，具体是基于
Real
‑
time MIRA
技术检测高毒力肺炎克雷伯菌
peg344
基因和
incA
基因的引物探针组及其应用
。

技术介绍

[0002]肺炎克雷伯菌
(Klebsiella pneumoniae
，
KP)
是一种条件性致病菌，当机体免疫力下降时常常可以引起呼吸系统
、
泌尿系统
、
血液系统
、
软组织等感染
。
在
20
世纪
80
年代中期，我国台湾地区首次报道了一种独特的社区获得性
、
组织侵袭性肺炎克雷伯菌感染的临床综合征，主要表现为化脓性肝脓肿，感染灶可出现在多个部位并可能发生转移性传播；该新发现的菌被命名为高毒力肺炎克雷伯菌
(hypervirulent Klebsiella pneumoniae
，
hvKP)
，
hvKP
能在相对健康的宿主造成严重的
、
潜在致命的感染，而经典肺炎克雷伯菌
(classic Klebsiella pneumoniae
，
cKP)
倾向于感染免疫功能低下的人群/>。hvKP
能造成如脑膜炎
、
坏死性筋膜炎
、
眼内炎和骨髓炎等原发感染，并且感染能力较
cKP
更强；其主要为毒力基因为
peg344
和
incA。
[0003]目前，针对高毒力肺炎克雷伯菌毒力基因
peg344
和
incA
检测的方法主要有传统
PCR
方法和
Real
‑
time PCR
方法，这些方法存在检测周期长
、
技术要求高
、
过程繁琐等不足
。
[0004]多酶等温快速扩增
(Multienzyme Isothermal Rapid Amplification
，
MIRA)
是近几年开发的一种新的恒温扩增技术，反应温度通常为
25
‑
42℃
，反应时间通常为
15
‑
20min
，引物数量为2条，结果判读方式有琼脂糖凝胶电泳
、
实时荧光检测
、
胶体金试纸条
。
目前暂无采用
Real
‑
time MIRA
检测高毒力肺炎克雷伯菌的报道
。
中国专利公开了快速检测高毒力肺炎克雷伯菌的检测方法及试剂盒
(
公告号
CN111500751A)
，该专利技术通过设计2对引物扩增高毒力肺炎克雷伯菌
peg344
基因的6个不同区域，建立一种快速
、
简便
、
经济地检测痰液中高毒力肺炎克雷伯菌的方法
。
检测高毒力肺炎克雷伯菌的时间更短，可在
2.5
个小时内得到结果，但是其检测周期还是较长，精度不高
。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供基于
Real
‑
time MIRA
技术检测高毒力肺炎克雷伯菌
peg344
基因和
incA
基因的引物探针组及其应用，以解决上述
技术介绍
中提出的问题
。
[0006]为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
[0007]基于
Real
‑
time MIRA
技术检测高毒力肺炎克雷伯菌
peg344
基因和
incA
基因的引物探针组，包括引物和探针组，所述引物包括正向引物和反向引物，并分别用于扩增高毒力肺炎克雷伯菌
peg344
基因和
incA
基因；所述探针组分别用于检测高毒力肺炎克雷伯菌
peg344
基因和
incA
基因；
[0008]所述用于检测高毒力肺炎克雷伯菌
peg344
基因的探针组的核苷酸序列为：
[0009]TCCTTTCTCTCTAATGATTTATGGTGAGGT[FAM
‑
dT]A[THF][BQH
‑
dT]GTAAACC CAGGACTT
‑
[C3spacer]；
[0010]所述用于检测高毒力肺炎克雷伯菌
incA
基因的探针组的核苷酸序列为：
[0011]TGGCTACCGACCACCTCTTCCCGCTCGCTC[VIC
‑
dT]A[THF][BHQ
‑
dT]GCGCCACC AGCAGCG
‑
[C3spacer。
[0012]作为本专利技术再进一步的方案：所述用于扩增高毒力肺炎克雷伯菌
peg344
基因的：正向引物为
peg344
‑
F1、peg344
‑
F2、peg344
‑
F3
中的一种，反向引物为
peg344
‑
R1、peg344
‑
R2、peg344
‑
R3
中的一种；
[0013]其中，
peg344
‑
F1
的核苷酸序列为
CCCTCCAGTCTTTGCTACCGGGATGAGATT
；
[0014]peg344
‑
F2
的核苷酸序列为
TCCGCTCAATTATTAATCATTATCGCATGG
；
[0015]peg344
‑
F3
的核苷酸序列为
TCCTGTTGGCCAGCGTCTATTTCAACTTGC
；
[0016]peg344
‑
R1
的核苷酸序列为
ATTAGTCCAGTAATCTGTATTGAGTTTG
；
[0017]peg344
‑
R2
的核苷酸序列为
CCTCCGTGATGAGGATGAACGAAAGTGAAG
；
[0018]peg344
‑
R3
的核苷酸序列为
AAGAAAGGGCAATAACTCCCGT本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
基于
Real
‑
time MIRA
技术检测高毒力肺炎克雷伯菌
peg344
基因和
incA
基因的引物探针组，包括引物和探针组，其特征在于，所述引物包括正向引物和反向引物，并分别用于扩增高毒力肺炎克雷伯菌
peg344
基因和
incA
基因；所述探针组分别用于检测高毒力肺炎克雷伯菌
peg344
基因和
incA
基因；所述用于检测高毒力肺炎克雷伯菌
peg344
基因的探针组的核苷酸序列为：
TCCTTTCTCTCTAATGATTTATGGTGAGGT[FAM
‑
dT]A[THF][BQH
‑
dT]GTAAACC CAGGACTT
‑
[C3spacer]
；所述用于检测高毒力肺炎克雷伯菌
incA
基因的探针组的核苷酸序列为：
TGGCTACCGACCACCTCTTCCCGCTCGCTC[VIC
‑
dT]A[THF][BHQ
‑
dT]GCGCCACC AGCAGCG
‑
[C3spacer。2.
根据权利要求1所述的基于
Real
‑
time MIRA
技术检测高毒力肺炎克雷伯菌
peg344
基因和
incA
基因的引物探针组，其特征在于，所述用于扩增高毒力肺炎克雷伯菌
peg344
基因的：正向引物为
peg344
‑
F1、peg344
‑
F2、peg344
‑
F3
中的一种，反向引物为
peg344
‑
R1、peg344
‑
R2、peg344
‑
R3
中的一种；其中，
peg344
‑
F1
的核苷酸序列为
CCCTCCAGTCTTTGCTACCGGGATGAGATT
；
peg344
‑
F2
的核苷酸序列为
TCCGCTCAATTATTAATCATTATCGCATGG
；
peg344
‑
F3
的核苷酸序列为
TCCTGTTGGCCAGCGTCTATTTCAACTTGC
；
peg344
‑
R1
的核苷酸序列为
ATTAGTCCAGTAATCTGTATTGAGTTTG
；
peg344
‑
R2
的核苷酸序列为
CCTCCGTGATGAGGATGAACGAAAGTGAAG
；
peg344
‑
R3
的核苷酸序列为
AAGAAAGGGCAATAACTCCCGTCCACTGG。3.
根据权利要求1所述的基于
Real
‑
time MIRA
技术检测高毒力肺炎克雷伯菌
peg344
基因和
incA
基因的引物探针组，其特征在于，所述用于扩增高毒力肺炎克雷伯菌
incA
基因的：正向引物为
incA
‑
F1、incA
‑
F2、incA
‑
F3
中的一种，反向引物
incA
‑
R1、incA
‑
R2、incA
‑

【专利技术属性】
技术研发人员：段治雄，
申请(专利权)人：重庆市沙坪坝区陈家桥医院，
类型：发明
国别省市：