一种用于检测分枝杆菌菌种的引物组制造技术

本申请公开了一种用于检测分枝杆菌菌种的引物组

【技术实现步骤摘要】
一种用于检测分枝杆菌菌种的引物组、应用及试剂盒


[0001]本申请涉及生物检测
，尤其涉及一种用于检测分枝杆菌菌种的引物组
、
应用及试剂盒
。

技术介绍

[0002] 结核病（
TB
）从
1882
年发现至今一直是严重威胁人类健康的一个重大的全球性公共卫生问题，是全球十大死亡原因之一，具有死亡率高
、
传染性极强等特点
。
非结核分枝杆菌（
NTM
）是指分枝杆菌属中除结核分枝杆菌复合群（
Mycobacterium tuberculosis complex
， MTC
）和麻风分枝杆菌以外的其它分枝杆菌的统称
。NTM
广泛存在于自然界中，有
200
多个菌种，其分布因地理区域差异而不同
。
近
20、30
年来，各项研究表明
NTM
发病率持续上升，东南沿海地区可高达
30%。
目前很多发达国家，如美国
、
法国
、
荷兰等，由
NTM
引起的疾病人数甚至超过了
TB。
而诺卡菌属是一种人兽共患的机会性病原体，广泛存在于自然界中，可导致肺部
、
脑部和皮肤等部位感染
。
[0003]诺卡菌
、
结核分枝杆菌
、NTM
具有相似的染色特征
、
形态特征和培养特征，在临床症状和影像学特点上也很相似，难以鉴别，但不同菌种有着不同的药物的敏感度，临床治疗方案也大相径庭
。
此外，临床医生常依据涂片“抗酸杆菌阳性”即诊断为结核病，但相当比例的“结核病”患者在后续被鉴定为
NTM
病，且由于绝大多数
NTM
菌种对常用抗结核药物天然耐药，临床易于将
NTM
病误诊为“耐药结核病”，导致不恰当的治疗
。
随着非结核分枝杆菌病和诺卡菌病发病率的逐步提高，结核病控制的难度和复杂性也随之增加
。
因此，快速
、
准确地鉴定结核
、NTM
和诺卡菌对制定有效的针对性治疗方案起着关键作用
。
[0004]目前，对于肺结核患者的临床诊断主要根据病史
、
胸片
、
痰培养
、
涂片抗酸染色等结果
。
但这些传统检测方法存在灵敏度低
、
耗时长
、
不能准确区分结核
、NTM
和诺卡菌等缺点，容易对部分患者造成误诊或漏诊
。
结核病免疫学检测技术，如
PPD
和
IGRA
虽然快速
、
简便，但会受卡介苗
、NTM
或既往感染影响
。
分枝杆菌菌种鉴定的“金标准”为
DNA
序列比对技术，但该技术对试验人员的专业技术水平要求较高，且很多基层实验室无法实现
。

技术实现思路

[0005]为了解决上述至少一种技术问题，开发一种检测精确度高
、
特异性强
、
操作简便以及能够准确并快速地鉴定结核
、NTM
和诺卡菌的检测方法，本申请提供一种用于检测分枝杆菌菌种的引物组
、
应用及试剂盒
。
[0006] 一方面，本申请提供一种用于检测分枝杆菌菌种的引物组，该种用于检测分枝杆菌菌种的引物组包括结核分枝杆菌检测引物组
、
非结核分枝杆菌检测引物组以及诺卡菌检测引物组
。
结核分枝杆菌检测引物组包括引物组
A1
，引物组
A1
包括上游引物
A1
‑
F
和下游引物
A1
‑
R
，其序列表分别如
SEQ ID NO.1
和
SEQ ID NO.2
所示
。
诺卡菌检测引物组包括引物组
C1
，引物组
C1
包括上游引物
C1
‑
F
和下游引物
C1
‑
R
，其序列表分别如
SEQ ID NO.3
和
SEQ ID NO.4
所示
。
非结核分枝杆菌检测引物组选自引物组
B1~B24
中的至少一种，引物组
B1~B24
分
别包括上游引物
B1
‑
F~B24
‑
F
和下游引物
B1
‑
R~B24
‑
R。
上游引物
B1
‑
F~B24
‑
F
的序列表如
SEQ ID NO.5~SEQ ID NO.28
所示
。
下游引物
B1
‑
R~B24
‑
R
的序列表如
SEQ ID NO.29~SEQ ID NO.52。
引物组
B1~B24
分别用于检测牛分枝杆菌
、
胞内分枝杆菌
、
鸟分枝杆菌
、
堪萨斯分枝杆菌
、
脓肿分枝杆菌
、
戈登分枝杆菌
、
偶发分枝杆菌
、
龟分枝杆菌
、
瘰疬分枝杆菌
、
蟾蜍分枝杆菌
、
猿猴分枝杆菌
、
耻垢分枝杆菌
、
哥伦比亚分枝杆菌
、
海
/
溃疡分枝杆菌
、
玛尔摩分枝杆菌
、
浅黄分枝杆菌
、
苏尔加分枝杆菌
、
亚洲分枝杆菌
、
草分枝杆菌
、
次要分枝杆菌
、
土分枝杆菌
、
嗜血分枝杆菌
、
胃分枝杆菌和分枝杆菌属
。
[0007]通过采用上述技术方案，本申请解决了现有技术中存在的存在的检测精确度不高
、
特异性低以及灵敏性较低等问题，实现了对结核分枝杆菌
、
非结核分枝杆菌以及诺卡菌的精确的菌种鉴定
。
其机理在于，由于诺卡菌
、
结核分枝杆菌
、
非结核分枝杆菌具有相似的染色特征
、
形态特征和培养特征，临床症状和影像学特点也很相似
、
因此难以实现精确鉴别，而本申请为了解决对诺卡菌
...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种用于检测分枝杆菌菌种的引物组，其特征在于，所述用于检测分枝杆菌菌种的引物组包括结核分枝杆菌检测引物组
、
非结核分枝杆菌检测引物组以及诺卡菌检测引物组；所述结核分枝杆菌检测引物组包括引物组
A1
，所述引物组
A1
包括上游引物
A1
‑
F
和下游引物
A1
‑
R
，其序列表分别如
SEQ ID NO.1
和
SEQ ID NO.2
所示；所述诺卡菌检测引物组包括引物组
C1
，所述引物组
C1
包括上游引物
C1
‑
F
和下游引物
C1
‑
R
，其序列表分别如
SEQ ID NO.3
和
SEQ ID NO.4
所示；所述非结核分枝杆菌检测引物组为引物组
B1~B24
中的至少一种，所述引物组
B1~B24
分别包括上游引物
B1
‑
F~B24
‑
F
和下游引物
B1
‑
R~B24
‑
R
；所述上游引物
B1
‑
F~B24
‑
F
的序列表如
SEQ ID NO.5~SEQ ID NO.28
所示，所述下游引物
B1
‑
R~B24
‑
R
的序列表如
SEQ ID NO.29~SEQ ID NO.52
所示；所述引物组
B1~B24
依序分别用于检测牛分枝杆菌
、
胞内分枝杆菌
、
鸟分枝杆菌
、
堪萨斯分枝杆菌
、
脓肿分枝杆菌
、
戈登分枝杆菌
、
偶发分枝杆菌
、
龟分枝杆菌
、
瘰疬分枝杆菌
、
蟾蜍分枝杆菌
、
猿猴分枝杆菌
、
耻垢分枝杆菌
、
哥伦比亚分枝杆菌
、
海
/
溃疡分枝杆菌
、
玛尔摩分枝杆菌
、
浅黄分枝杆菌
、
苏尔加分枝杆菌
、
亚洲分枝杆菌
、
草分枝杆菌
、
次要分枝杆菌
、
土分枝杆菌
、
嗜血分枝杆菌
、
胃分枝杆菌和分枝杆菌属
。2.
根据权利要求1所述的用于检测分枝杆菌菌种的引物组，其特征在于，所述非结核分枝杆菌检测引物组包括：所述检测鸟分枝杆菌
、
脓肿分枝杆菌
、
堪萨斯分枝杆菌
、
玛尔摩分枝杆菌
、
蟾蜍分枝杆菌
、
瘰疬分枝杆菌
、
龟分枝杆菌
、
偶发分枝杆菌和海
/
溃疡分枝杆菌的引物组；或所述检测鸟分枝杆菌
、
脓肿分枝杆菌
、
堪萨斯分枝杆菌
、
玛尔摩分枝杆菌
、
蟾蜍分枝杆菌
、
龟分枝杆菌
、
偶发分枝杆菌
、
嗜血分枝杆菌
、
瘰疬分枝杆菌
、
苏尔加分枝杆菌
、
猿分枝杆菌
、
亚洲分枝杆菌
、
戈登分枝杆菌和耻垢分枝杆菌的引物组；或所述检测胞内分枝杆菌
、
鸟分枝杆菌
、
戈登分枝杆菌
、
蟾蜍分枝杆菌
、
偶发分枝杆菌
、
脓肿分枝杆菌和堪萨斯分枝杆菌的引物组；或所述检测胞内分枝杆菌
、
脓肿分枝杆菌
、
堪萨斯分枝杆菌和龟分枝杆菌的引物组；或所述检测胞内分枝杆菌
、
戈登分枝杆菌
、
龟分枝杆菌
、
偶发分枝杆菌
、
脓肿分枝杆菌
、
瘰疬分枝杆菌和堪萨斯分枝杆菌的引物组
。3. 根据权利要求1所述的用于检测分枝杆菌菌种的引物组，其特征在于，还包括检测内质控菌引物组，所述检测内质控菌引物组包括上游引物
D1
‑
F
和下游引物
D1
‑
R
；所述上游引物
D1
‑
F
基因序列如
SEQ ID NO.53
所示；所述下游引物
D1
‑
R
基因序列如
SEQ ID NO.54
所示
。4.
一种用于检测分枝杆菌菌种的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1所述的用于分枝杆菌菌种检测的引物组
。5.
根据权利要求4所述的用于检测分枝杆菌菌种的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中，检测分枝杆菌菌种的引物组的各引物的初始浓度均为
100~300
μ
mol/L。6.
根据权利要求5所述的用于检测分枝杆菌菌种的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括
PCR
反应管，所述
PCR
反应管内装有灭菌水，以及权利要求
1~3
任意一项所述的用于肺结核检测的引物组；优选的，所述
PCR
反应管中，所述
A1
‑
F、A1
‑
R、C1
‑
F、C1
‑
R、B1
‑
F~B24
‑<...

【专利技术属性】
技术研发人员：龚皎，王桂荣，傅成波，曾滨，王潮虹，黄海荣，闫玉敬，炊林亚，
申请(专利权)人：首都医科大学附属北京胸科医院，
类型：发明
国别省市：