一种用于宠物源性葡萄球菌属耐药性预警监测的引物组和探针组合物及其试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及生物检测技术领域，提供了一种用于宠物源性葡萄球菌属耐药性预警监测的引物组和探针组合物及其试剂盒，组合物包含针对葡萄球菌属

【技术实现步骤摘要】
一种用于宠物源性葡萄球菌属耐药性预警监测的引物组和探针组合物及其试剂盒


[0001]本专利技术涉及生物检测
，具体地说是一种用于宠物源性葡萄球菌属耐药性预警监测的引物组和探针组合物及其试剂盒
。

技术介绍

[0002]葡萄球菌属
(Stahylococcus aureus,SA)
为革兰氏阳性菌，直径约
0.5
‑
1.5
μ
m
，呈葡萄串状排列，无鞭毛，无芽孢
。
分为凝固酶阳性葡萄球菌属
(CoPS)
和凝固酶阴性葡萄球菌属
(CoNS)。
一般来说，
CoPS
的毒力高于
CoNS
，金黄色葡萄球菌属
、
伪中间葡萄球菌属
、
施氏葡萄球菌属是人和犬的主要病原体，是一种典型的凝固酶阳性葡萄球菌属
(CoPS)
，由于能产生各种毒素，会在人类中引起各种传染病
。
近年来，随着宠物饲养的数量大幅增加
(
我国现阶段犬猫的饲养量已超过1亿只
)
，宠物诊疗抗微生物药物的广泛使用甚至是滥用导致细菌耐药性问题日益严重，人类与宠物间的密切接触给人类健康及公共安全造成严重威胁；
[0003]科学研究发现，在患有脓皮病的宠物中鉴定耐甲氧西林伪中间葡萄球菌属
(MRSP)
和耐甲氧西林施氏葡萄球菌属
(MRSS)
是兽医领域的一个难题，此外由于氨基糖苷类耐药基因
(aacA
‑
aphD)、
大环内酯类耐药基因
(ermB)
和四环素耐药基因
(tetM、tetK)
的存在，一些
MRSP
菌株表现出多药耐药性
。
针对宠物源性葡萄球菌属中的甲氧西林耐药基因
(mecA)、
大环内酯类耐药基因
(ermB)、
万古霉素耐药基因
(vanA)
等开展预警监测，进而开展针对性防治是阻断人宠间传播，保障公共卫生安全的重要举措
。
现有的大部分针对检测宠物源性葡萄球菌属耐药性基因的引物探针组合
、
试剂盒和方法，比如用于检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌属的耐药基因
mecA
的引物探针组
、
用于检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌属的耐药基因
mecC
的引物探针组合等，仅实现了对单一的金黄色葡萄球菌属的某一具体基因的检测，缺乏关于葡萄球菌属的其他耐药基因的检测，同时所采用的
PCR
技术在扩增时需要三个或两个温度的循环变化，操作复杂繁琐，其扩增速度还取决于仪器加热和冷却的速率，受限度较高
。
[0004]为此，本专利技术旨在提供实现宠物源性葡萄球菌属3种耐药基因
mecA、ermB、vanA
一体化检测技术，并具备检出率高
、
检测时间短
、
灵敏度高
、
特异性强
、
灵活方便等优势，为宠物源性葡萄球菌属耐药性预警监测提供一种快速高效检测的新选择
。

技术实现思路

[0005]为了解决上述技术问题，本专利技术提供一种用于宠物源性葡萄球菌属耐药性预警监测的引物组和探针组合物及其试剂盒，以解决
技术介绍
中所提出的问题
。
[0006]根据本公开的第一方面，提供了一种用于宠物源性葡萄球菌属耐药性预警监测的引物组和探针组合物，组合物包含针对葡萄球菌属
mecA
基因
、ermB
基因和
vanA
基因分别制定的引物组和探针；组合物还包含针对葡萄球菌属靶属基因制定的第三引物组
。
[0007]优选的，针对葡萄球菌属
mecA
基因的第一引物组和第一探针包括第一上游外部引
物
、
第一下游外部引物
、
第一上游内部引物
、
第一下游内部引物和第一探针，所述第一上游外部引物
、
第一下游外部引物
、
第一上游内部引物
、
第一下游内部引物和第一探针的核苷酸序列分别如
SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4
和
SEQ ID NO.5
所示
。
[0008]优选的，针对葡萄球菌属
ermB
基因的第二引物组和第二探针包括第二上游外部引物
、
第二下游外部引物
、
第二上游内部引物
、
第二下游内部引物和第二探针，所述第二上游外部引物
、
第二下游外部引物
、
第二上游内部引物
、
第二下游内部引物和第二探针的核苷酸序列分别如
SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9
和
SEQ ID NO.10
所示
。
[0009]优选的，针对葡萄球菌属
vanA
基因的第四引物组和第四探针包括第四上游外部引物
、
第四下游外部引物
、
第四上游内部引物
、
第四下游内部引物和第四探针，所述第四上游外部引物
、
第四下游外部引物
、
第四上游内部引物
、
第四下游内部引物和第四探针的核苷酸序列分别如
SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.13、SEQ ID NO.14、SEQ ID NO.15
和
SEQ ID NO.16
所示
。
[0010]优选的，针对葡萄球菌属靶属基因制定的第三引物组包括环引物，所述环引物的核苷酸序列如
SEQ ID NO.11
所示
。
[0011]优选的，所述第一引物组
3'
端
、
第二引物组
3'
端和第四引物组
3'
端的
F1 c、F2c
和
F3c
区以及第一引物组的
5'
端
、
第二引物组
5'
端和第四引物组的
5'
端的
B1、B2
和
B3
区设置4种引物
。
[0012]优选的，所述4种引物包括上游外部引物
F3、
下游外部引物
B3、
上游内部引物
F IP
和下游内部引物组
BIP
，所述
F IP
和
B IP
分别本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种用于宠物源性葡萄球菌属耐药性预警监测的引物组和探针组合物，其特征在于：组合物包含针对葡萄球菌属
mecA
基因
、ermB
基因和
vanA
基因分别制定的引物组和探针；组合物还包含针对葡萄球菌属靶属基因制定的第三引物组
。2.
如权利要求1所述一种用于宠物源性葡萄球菌属耐药性预警监测的引物组和探针组合物，其特征在于：针对葡萄球菌属
mecA
基因的第一引物组和第一探针包括第一上游外部引物
、
第一下游外部引物
、
第一上游内部引物
、
第一下游内部引物和第一探针，所述第一上游外部引物
、
第一下游外部引物
、
第一上游内部引物
、
第一下游内部引物和第一探针的核苷酸序列分别如
SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4
和
SEQ ID NO.5
所示
。3.
如权利要求1所述一种用于宠物源性葡萄球菌属耐药性预警监测的引物组和探针组合物，其特征在于：针对葡萄球菌属
ermB
基因的第二引物组和第二探针包括第二上游外部引物
、
第二下游外部引物
、
第二上游内部引物
、
第二下游内部引物和第二探针，所述第二上游外部引物
、
第二下游外部引物
、
第二上游内部引物
、
第二下游内部引物和第二探针的核苷酸序列分别如
SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9
和
SEQ ID NO.10
所示
。4.
如权利要求1所述一种用于宠物源性葡萄球菌属耐药性预警监测的引物组和探针组合物，其特征在于：针对葡萄球菌属
vanA
基因的第四引物组和第四探针包括第四上游外部引物
、
第四下游外部引物
、
第四上游内部引物
、
第四下游内部引物和第四探针，所述第四上游外部引物
、
第四下游外部引物
、
第四上游内部引物
、
第四下游内部引物和第四探针的核苷酸序列分别如
SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.13、SEQ ID NO.14、SEQ ID NO.15
和
SEQ ID NO.16
所示
。5.
如权利要求1所述一种用于宠物源性葡萄球菌属耐药性预警监测的引物组和探针组合物，其特征在于：针对葡萄球菌属靶属基因制定的第三引物组包括环引物，所述环引物的核苷酸序列如
SEQ ID NO.11
所示
。6....

【专利技术属性】
技术研发人员：王晓旭，赵洪进，王建，徐锋，沈莉萍，张玉杰，杨德全，齐新永，夏炉明，徐平，金一春，何随彬，
申请(专利权)人：上海市动物疫病预防控制中心上海市兽药饲料检测所，
类型：发明
国别省市：