一种用于鉴定体液来源的三重制造技术

本发明专利技术公开了一种用于鉴定体液来源的三重

【技术实现步骤摘要】
一种用于鉴定体液来源的三重RT
‑
qPCR体系


[0001]本专利技术属于法医学领域，具体涉及一种用于鉴定体液来源的三重
RT
‑
qPCR
体系
。

技术介绍

[0002]体液鉴别是法医学中的一个重要课题，它可以为犯罪现场重建
、
嫌疑人排除
、
受害者辨认等提供重要的线索和证据
。MicroRNA(miRNA)
凭借其高度稳定性及组织特异性等优点逐渐被广泛应用于法医体液鉴别，越来越多的体液特异性
miRNA
被筛选和验证
。
[0003]犯罪现场中常见的体液类型主要包括外周血
(peripheral blood
，
PB)、
月经血
(menstrual blood
，
MB)、
唾液
(saliva
，
SA)、
精液
(semen
，
SE)、
阴道分泌物
(vaginal secretion
，
VA)。
要实现对未知体液的准确鉴别，往往需要该检材中多个
miRNA
标记的数据，即需要对该检材进行多次
RT
‑
qPCR
检测
。
同时实际犯罪现场中提取到的检材往往是微量的，对多个标记检测时需要进行检材的等分或者稀释，一定程度上会降低检测方法的灵敏度<br/>。
此外，并行多个单重检测会成倍的增加工作量
、
各项成本以及错误风险，不利于将鉴别方法真正意义的应用到法医实践中
。
基于以上原因，亟需建立准确和快速对
miRNA
进行检测的多重实时荧光定量
PCR
检测体系
。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的为鉴定待测体液为外周血
、
月经血
、
精液
、
唾液还是阴道分泌液
。
[0005]本专利技术首先保护用于鉴定体液来源的成套试剂；所述体液来源为外周血
、
月经血
、
精液
、
唾液或阴道分泌液
。
本专利技术所保护的用于鉴定体液来源的成套试剂可包括成套试剂
1、
成套试剂
2、
成套试剂
3、
成套试剂4和成套试剂5；
[0006]所述成套试剂1可包括逆转录引物
miR
‑
451a
‑
RT、
通用正向引物
F、
特异性反向引物
miR
‑
451a
‑
R
和荧光探针
miR
‑
451a
‑
P
；
[0007]所述成套试剂2可包括逆转录引物
miR
‑
891a
‑
5p
‑
RT、
通用正向引物
F、
特异性反向引物
miR
‑
891a
‑
5p
‑
R
和荧光探针
miR
‑
891a
‑
5p
‑
P
；
[0008]所述成套试剂3可包括逆转录引物
miR
‑
203a
‑
3p
‑
RT、
通用正向引物
F、
特异性反向引物
miR
‑
203a
‑
3p
‑
R
和荧光探针
miR
‑
203a
‑
3p
‑
P
；
[0009]所述成套试剂4可包括逆转录引物
miR
‑
223
‑
3p
‑
RT、
通用正向引物
F、
特异性反向引物
miR
‑
223
‑
3p
‑
R
和荧光探针
miR
‑
223
‑
3p
‑
P
；
[0010]所述成套试剂5可包括逆转录引物
miR
‑
320a
‑
3p
‑
RT、
通用正向引物
F、
特异性反向引物
miR
‑
320a
‑
3p
‑
R
和荧光探针
miR
‑
320a
‑
3p
‑
P。
[0011]所述逆转录引物
miR
‑
451a
‑
RT
可为
SEQ ID NO:6
所示的单链
DNA
分子
。
[0012]所述通用正向引物
F
可为
SEQ ID NO:7
所示的单链
DNA
分子
。
[0013]所述特异性反向引物
miR
‑
451a
‑
R
可为
SEQ ID NO:8
所示的单链
DNA
分子
。
[0014]所述荧光探针
miR
‑
451a
‑
P
可为
SEQ ID NO:9
所示的单链
DNA
分子
。
[0015]所述逆转录引物
miR
‑
891a
‑
5p
‑
RT
可为
SEQ ID NO:10
所示的单链
DNA
分子
。
[0016]所述特异性反向引物
miR
‑
891a
‑
5p
‑
R
可为
SEQ ID NO:11
所示的单链
DNA
分子
。
[0017]所述荧光探针
miR
‑
891a
‑
5p
‑
P
可为
SEQ ID NO:12
所示的单链
DNA
分子
。
[0018]所述逆转录引物
miR
‑
203a
‑
3p
‑
RT
可为...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
用于鉴定体液来源的成套试剂，包括成套试剂
1、
成套试剂
2、
成套试剂
3、
成套试剂4和成套试剂5；所述成套试剂1包括逆转录引物
miR
‑
451a
‑
RT、
通用正向引物
F、
特异性反向引物
miR
‑
451a
‑
R
和荧光探针
miR
‑
451a
‑
P
；所述成套试剂2包括逆转录引物
miR
‑
891a
‑
5p
‑
RT、
通用正向引物
F、
特异性反向引物
miR
‑
891a
‑
5p
‑
R
和荧光探针
miR
‑
891a
‑
5p
‑
P
；所述成套试剂3包括逆转录引物
miR
‑
203a
‑
3p
‑
RT、
通用正向引物
F、
特异性反向引物
miR
‑
203a
‑
3p
‑
R
和荧光探针
miR
‑
203a
‑
3p
‑
P
；所述成套试剂4包括逆转录引物
miR
‑
223
‑
3p
‑
RT、
通用正向引物
F、
特异性反向引物
miR
‑
223
‑
3p
‑
R
和荧光探针
miR
‑
223
‑
3p
‑
P
；所述成套试剂5包括逆转录引物
miR
‑
320a
‑
3p
‑
RT、
通用正向引物
F、
特异性反向引物
miR
‑
320a
‑
3p
‑
R
和荧光探针
miR
‑
320a
‑
3p
‑
P
；逆转录引物
miR
‑
451a
‑
RT
为
SEQ ID NO:6
所示的单链
DNA
分子；通用正向引物
F
为
SEQ ID NO:7
所示的单链
DNA
分子；特异性反向引物
miR
‑
451a
‑
R
为
SEQ ID NO:8
所示的单链
DNA
分子；荧光探针
miR
‑
451a
‑
P
为
SEQ ID NO:9
所示的单链
DNA
分子；逆转录引物
miR
‑
891a
‑
5p
‑
RT
为
SEQ ID NO:10
所示的单链
DNA
分子；特异性反向引物
miR
‑
891a
‑
5p
‑
R
为
SEQ ID NO:11
所示的单链
DNA
分子；荧光探针
miR
‑
891a
‑
5p
‑
P
为
SEQ ID NO:12
所示的单链
DNA
分子；逆转录引物
miR
‑
203a
‑
3p
‑
RT
为
SEQ ID NO:13
所示的单链
DNA
分子；特异性反向引物
miR
‑
203a
‑
3p
‑
R
为
SEQ ID NO:14
所示的单链
DNA
分子；荧光探针
miR
‑
203a
‑
3p
‑
P
为
SEQ ID NO:15
所示的单链
DNA
分子；逆转录引物
miR
‑
223
‑
3p
‑
RT
为
SEQ ID NO:16
所示的单链
DNA
分子；特异性反向引物
miR
‑
223
‑
3p
‑
R
为
SEQ ID NO:17
所示的单链
DNA
分子；荧光探针
miR
‑
223
‑
3p
‑
P
为
SEQ ID NO:18
所示的单链
DNA
分子；逆转录引物
miR
‑
320a
‑
3p
‑
RT
为
SEQ ID NO:19
所示的单链
DNA
分子；特异性反向引物
miR
‑
320a
‑
3p
‑
R
为
SEQ ID NO:20
所示的单链
DNA
分子；荧光探针
miR
‑
320a
‑
3p
‑
P
为
SEQ ID NO:21
所示的单链
DNA
分子
。2.
根据权利要求1所述成套试剂，其特征在于：所述荧光探针
miR
‑
451a
‑
P、
所述荧光探针
miR
‑
891a
‑
5p
‑
P、
所述荧光探针
miR
‑
203a
‑
3p
‑
P、
所述荧光探针
miR
‑
223
‑
3p
‑
P
和所述荧光探针
miR
‑
320a
‑
3p
‑
P
的一端均用荧光标记，另一端具有荧光猝灭基团
。3.
根据权利要求2所述成套试剂，其特征在于：所述荧光探针
miR
‑
451a
‑
P、
所述荧光探针
miR
‑
203a
‑
3p
‑
P
和所述荧光探针
miR
‑
320a
‑
3p
‑
P
的荧光标记不同；所述荧光探针
miR
‑
891a
‑
5p
‑
P、
所述荧光探针
miR
‑
223
‑
3p
‑
P
和所述荧光探针
miR
‑
320a
‑
3p
‑
P
的荧光标记不同
。4.
用于鉴定体液来源的体系，包括同时逆转录反应体系
、
三重
qPCR
反应体系1和三重
qPCR
反应体系2；所述同时逆转录反应体系包括权利要求1所述逆转录引物
miR
‑
451a
‑
RT、
所述逆转录引
物
miR
‑
891a
‑
5p
‑
RT、
所述逆转录引物
miR
‑
203a
‑
3p
‑
RT、
所述逆转录引物
miR
‑
223
‑
3p
‑
RT
和所述逆转录引物
miR
‑
320a
‑
3p
‑
RT
；三重
qPCR
反应体系1包括权利要求1‑3任一所述通用正向引物
F、
所述特异性反向引物
miR
‑
451a
‑
R、
所述荧光探针<...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙启凡，胡舒啸，胡胜，季安全，赵一霞，王哲，
申请(专利权)人：公安部鉴定中心，
类型：发明
国别省市：