【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物，具体涉及一种鉴定具有上皮细胞成分生物物证的dna来源的标记物组合及其应用。
技术介绍
1、体液斑迹是犯罪现场常见的生物物证，利用脱氧核糖核酸(deoxyribonucleicacid,dna)鉴定技术可以对其进行分析，以达到认定或排除嫌疑人的目的。近年，仅仅从生物物证上获取dna分型以确定个体来源越来越不满足证据的完整性需求，且这种单一的结果指向也引起了一定的争议，而体液斑迹的鉴定恰恰是引起争议的一个重要环节。传统的体液斑迹检测方法，如唾液淀粉酶试验，主要是通过颜色的变化来判定目标产物的存在，这种方法受外界影响较大，且判定主要依靠人眼的主观判断，因而存在一定的误判可能，不能作为确证试验；而对于阴道分泌物、月经血等体液斑迹，传统方法并不能进行有效的识别；对于当前dna检验的热点——无法肉眼可见的皮肤接触类斑迹，更是没有确定的鉴定方法，鉴定人员可能从所谓的“接触性生物物证”上获得dna分型，却无法解释确定该dna的组织细胞来源。因而需要有一种检测手段来对接触性生物物证上的dna来源进行分析。
2、自1999年m.bauer报道发表第一篇相关研究文章以来，利用信使核糖核酸(messenger ribonucleic acid,mrna)对体液斑迹进行识别的研究已经有了十余年的历史，研究者们发现并验证了一系列具有组织特异性和体液斑迹识别价值的mrna标记。与学界曾普遍认为的mrna极易降解不同，mrna被发现在干燥载体上具有良好的稳定性，结合dna和rna共提取技术，dna和rna分析可以平行进行，可大大
3、体液斑迹组织来源的推断可以为案件侦破提供更充足的证据，有利于提升生物物证作为证据的法律效力，避免证据采信过程中由于误解或歧义而引发诉讼纠纷；为案件的定性、定罪量刑、以及现场重现等提供科学依据。阴道分泌物和唾液留下的斑迹是目前法医dna检验中常见的且容易混淆的生物物证，传统检测方法不易将它们区分，且它们在组织学上有一定的相似性，但目前法庭诉讼中对它们准确识别的需求却越来越高，因此亟需寻找这些体液斑迹的鉴别方法。
技术实现思路
1、本专利技术的目的是提供一种鉴定具有上皮细胞成分(唾液及阴道分泌物)生物物证的dna来源的标记物组合及其应用。
2、第一方面，本专利技术要求保护mrna组合作为标记物在鉴定体液斑迹组织来源中的应用；
3、所述mrna组合由如下6个mrna组成：htn3 mrna、stath mrna、muc7 mrna、cyp2b7p1mrna、muc4 mrna和hbd1 mrna。
4、所述htn3 mrna的核苷酸序列如seq id no.13所示；所述stath mrna的核苷酸序列如seq id no.14所示；所述muc7 mrna的核苷酸序列如seq id no.15所示；所述cyp2b7p1mrna的核苷酸序列如seq id no.16所示；所述muc4 mrna的核苷酸序列如seq id no.17所示；所述hbd1 mrna的核苷酸序列如seq id no.18所示。
5、第二方面，本专利技术要求保护用于检测mrna组合的物质在鉴定体液斑迹组织来源中的应用：
6、所述mrna组合由如下6个mrna组成：htn3 mrna、stath mrna、muc7 mrna、cyp2b7p1mrna、muc4 mrna和hbd1 mrna。
7、其中，所述物质能够特异性检测所述mrna组合，可为引物、探针等。
8、在本专利技术的具体实施方式中，所述物质具体为成套引物对或含有所述成套引物对的试剂或试剂盒。
9、所述成套引物对由用于特异性扩增所述htn3 mrna对应dna序列的引物对a、用于特异性扩增所述stath mrna对应dna序列的引物对b、用于特异性扩增所述muc7mrna对应dna序列的引物对c、用于特异性扩增所述cyp2b7p1 mrna对应dna序列的引物对d、用于特异性扩增所述muc4 mrna对应dna序列的引物对e，以及用于特异性扩增所述hbd1 mrna对应dna序列的引物对f组成。
10、进一步地，所述引物对a由seq id no.1和seq id no.2所示两条单链dna组成；所述引物对b由seq id no.3和seq id no.4所示两条单链dna组成；所述引物对c由seq idno.5和seq id no.6所示两条单链dna组成；所述引物对d由seq id no.7和seq id no.8所示两条单链dna组成；所述引物对e由seq id no.9和seq id no.10所示两条单链dna组成；所述引物对f由seq id no.11和seq id no.12所示两条单链dna组成。
11、更进一步地，在所述引物对a中，seq id no.1所示的正向引物上标记有荧光标记hex。在所述引物对b中，seq id no.3所示的正向引物上标记有荧光标记fam。在所述引物对c中，seq id no.5所示的正向引物上标记有荧光标记rox。在所述引物对d中，seq id no.7所示的正向引物上标记有荧光标记fam。在所述引物对e中，seq id no.9所示的正向引物上标记有荧光标记tamra。在所述引物对f中，seq id no11所示的正向引物上标记有荧光标记rox。
12、在上述两个方面中，所述鉴定体液斑迹组织来源具体可为如下任一情况：(1)区分待测体液斑迹为唾液斑迹还是阴道分泌物斑迹，亦或是由唾液和阴道分泌物组成的混合斑迹；(2)检测待测体液斑迹中是否含有唾液斑迹和/或阴道分泌物斑迹。
13、第三方面，本专利技术要求保护一种鉴定体液斑迹组织来源的方法。
14、本专利技术要求保护的鉴定体液斑迹组织来源的方法，可包括如下步骤：从待测体液斑迹中提取总rna，并反转录为cdna；以所得cdna为模板，用前文所述的成套引物对进行pcr扩增，得到扩增产物；根据扩增产物中的基因表达情况按照如下确定所述待测体液斑迹组织来源：
15、若所述pcr扩增产物中同时具有htn3、stath和muc7三种基因表达，则所述待测体液斑迹为(候选为)或含有(候选含有)唾液斑迹。不同标记检出组合下，待测体液斑迹含有唾液成分的概率不同，在同时检出3个基因表达时，有充分的理由证明待测体液斑迹含有唾液成分。
16、若所述pcr扩增产物中同时具有cyp2b7p1、muc4和hbd1三种基因表达，则所述待测体液斑迹为(候选为)或含有(候选本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.mRNA组合作为标记物在鉴定体液斑迹组织来源中的应用；
2.用于检测mRNA组合的物质在鉴定体液斑迹组织来源中的应用：
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：用于检测所述mRNA组合的物质为成套引物对或含有所述成套引物对的试剂或试剂盒；
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述引物对A由SEQ ID No.1和SEQ IDNo.2所示两条单链DNA组成；所述引物对B由SEQ ID No.3和SEQ ID No.4所示两条单链DNA组成；所述引物对C由SEQ ID No.5和SEQ ID No.6所示两条单链DNA组成；所述引物对D由SEQ ID No.7和SEQ ID No.8所示两条单链DNA组成；所述引物对E由SEQ ID No.9和SEQ IDNo.10所示两条单链DNA组成；所述引物对F由SEQ ID No.11和SEQ ID No.12所示两条单链DNA组成。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：在所述引物对A中，SEQ ID No.1所示的正向引物上标记有荧光标记HEX；和/或
6.一种鉴
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：进行所述PCR扩增时为单重PCR或者多重PCR；
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：在所述用于检测唾液的PCR体系中，所述引物对A、所述引物对B和所述引物对C的摩尔配比为2:2:1；和/或
9.权利要求3-5任一中所述的成套引物对。
10.含有权利要求7所述成套引物对的试剂或试剂盒。
...【技术特征摘要】
1.mrna组合作为标记物在鉴定体液斑迹组织来源中的应用；
2.用于检测mrna组合的物质在鉴定体液斑迹组织来源中的应用：
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：用于检测所述mrna组合的物质为成套引物对或含有所述成套引物对的试剂或试剂盒；
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述引物对a由seq id no.1和seq idno.2所示两条单链dna组成；所述引物对b由seq id no.3和seq id no.4所示两条单链dna组成；所述引物对c由seq id no.5和seq id no.6所示两条单链dna组成；所述引物对d由seq id no.7和seq id no.8所示两条单链dna组成；所述引物对e由seq id no.9和seq idno.10所示两条单链dna组成；所述引物对f由seq id no.11和seq id no.12所示两...
【专利技术属性】
技术研发人员：赵禾苗，王冲，陈静，李万水，孙辉，丁光树，刘洪迪，
申请(专利权)人：公安部鉴定中心，
类型：发明
国别省市：
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