一种基于制造技术

本发明专利技术涉及一种基于

【技术实现步骤摘要】
一种基于RAA技术的淡色库蚊快速鉴定试剂盒及鉴定方法


[0001]本专利技术涉及生物检测领域，具体涉及一种基于
RAA
技术的淡色库蚊快速鉴定试剂盒及鉴定方法
。

技术介绍

[0002]口岸蚊类种群鉴定主要手段为形态学鉴定，依靠有形态学鉴定经验和蚊类形态鉴定能力的口岸检验检疫人员，根据医学蚊类分类检索表进行鉴定
。
然而，形态学鉴定面临很多问题：蚊类专业鉴定人才少，人员培养周期长；鉴定人员的经验程度
、
专业水平
、
蚊类完整性与发育阶段等因素可导致鉴定周期长，效率低；一些复杂的种群如近缘种群和同形种群难以鉴定；对于蚊类卵
、
幼虫和蛹，为获取其可靠鉴定特征，经常需要蚊类人工培养后鉴定；口岸送检蚊类若数量较大，对口岸蚊类鉴定工作是非常大的考验；等等
。
因而，口岸蚊类鉴定除了提高检疫人员鉴定能力和研发鉴定辅助系统外，仍需要发展安全
、
快速
、
准确
、
灵敏的鉴定方法，以实现蚊类快速鉴定
。
[0003]传统的蚊类鉴定以形态学鉴定为主， 但病媒生物的形态学特征在收集或储存的过程中可能受损，并且不能同时鉴定所有发育阶段，因此只有经验丰富的形态学鉴定专家才能精确鉴定
。
近年来，随着分子生物学技术的发展，常规
PCR、
限制性内切酶片段长度多态性（
RFLP
）
、
随机扩增多态性
DNA
（
RAPD
）
、
单链构象多态性（
SSCP
）
、DNA
条形码技术等分子手段已经应用于蚊类种群鉴定
。
然而，这些鉴定方法均有不足之处：常规检测特异
PCR
产物序列，依赖于较贵的分子探针或产物测序；
RFLP
鉴定蚊种不仅耗时，而且需要大量样本；
RAPD
鉴定蚊种快速，但结果不稳定，且有时不可重复；
SSCP
只能作为检测蚊类基因突变的方法，要确定突变的位置和类型，需进一步测序，且电泳条件要求比较严格；
DNA
条形码技术的后续测序工作耗时
、
耗经费
。
鉴于上述方法的不足，为了安全
、
快速
、
准确
、
灵敏的实现蚊类种群的分子鉴定，需要探寻新的分子鉴定手段
。
[0004]基于线粒体
DNA
细胞色素氧化酶
I
基因（
cytochrome oxidaseⅠ，
COI
）的重组酶介导链置换核酸扩增（
Recombinase
‑
aid Amplification
，
RAA
）技术应用于蚊类鉴定，与传统的形态学鉴定方法共同使用，能够有效减少鉴定误差，提高鉴定效率和准确度
。

技术实现思路

[0005]本专利技术提供一种基于
RAA
技术的淡色库蚊快速鉴定试剂盒及鉴定方法
。
[0006]本专利技术是由以下技术方案来实现的：本专利技术基于线粒体
DNA
细胞色素氧化酶
I
基因（
cytochrome oxidaseⅠ，
COI
）的重组酶介导链置换核酸扩增（
Recombinase
‑
aid Amplification
，
RAA
）技术应用于蚊类鉴定，首先获得一组基于
RAA
技术的淡色库蚊快速鉴定特异性扩增引物，序列如下：淡色库蚊
‑
F7
：
ttcctgatagctgcttaacatgaaatattgtatcta
；淡色库蚊
‑
R7
：
gttctgctggaggtagtgtatgatatcgttcaa。
[0007]本专利技术还提供一种基于
RAA
技术的淡色库蚊快速鉴定试剂盒，包括上述的引物序列
。
[0008]与现有检测手段相比，本专利技术的有益效果在于：本专利技术依据线粒体
DNA
细胞色素氧化酶
I
基因（
cytochrome oxidaseⅠ，
COI
）获得了一组特异性和灵敏性高的引物序列
。
利用重组酶介导链置换核酸扩增（
Recombinase
‑
aid Amplification
，
RAA
）技术应用于淡色库蚊快速鉴定鉴定和蚊类携带病原体检测，与传统的形态学鉴定方法和荧光
PCR
方法相比，可大大提高蚊类分子鉴定效率和病原体检测效率
。
附图说明
[0009]图
1 淡色库蚊
RAA
检测方法的特异性结果
。
[0010]图
2 淡色库蚊
RAA
检测方法的灵敏性结果
。
实施方式
[0011]下面利用实施例对本专利技术作进一步描述
。
实施例
[0012]本实施例提供一组基于
RAA
技术的淡色库蚊快速鉴定核酸序列特异性扩增引物，序列如下：淡色库蚊
‑
F7
：
ttcctgatagctgcttaacatgaaatattgtatcta
；淡色库蚊
‑
R7
：
gttctgctggaggtagtgtatgatatcgttcaa。
[0013]实施例2特异性和灵敏性检测核酸提取利用
TaKaRa MiniBEST Viral RNA/DNA Extraction Kit Ver.5.0 （货号：
9766
）试剂盒提取白纹伊蚊
、
淡色库蚊
、
中华按蚊
、
骚扰阿蚊
、
三带喙库蚊等蚊种的各自的一条后足的线粒体基因组核酸
。
[0014]RAA
检测步骤利用杭州众测生物科技有限公司的
RAA
核酸扩增试剂（基础型）扩增各个蚊类的
DNA
核酸
。
[0015]淡色库蚊
RAA
检测方法的特异性
。
结果如图所示，淡色库蚊
F7
‑
R7
引物（图1）相比于相应的对照来看，具有较好的特异性
。
[0016]淡色库蚊
RAA
检测方法的灵敏性
。
结果如图所示，淡色库蚊
F7
‑
R7
引物（图2）...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种基于
RAA
技术的淡色库蚊快速鉴定特异性扩增引物，其特征在于，序列如下：淡色库蚊
‑
F7
：
ttcctgatagctgcttaacatgaaatattgtatcta
；淡色库蚊<...

【专利技术属性】
技术研发人员：滕新栋，刘迪，王巧黎，陈健，张娟，
申请(专利权)人：青岛国际旅行卫生保健中心青岛海关口岸门诊部，
类型：发明
国别省市：