一种抗制造技术

本发明专利技术公开了一种抗

【技术实现步骤摘要】
一种抗PD
‑
L1蛋白的纳米抗体及其应用


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及一种抗
PD
‑
L1
蛋白的纳米抗体及其应用
。

技术介绍

[0002]1993
年，
Hamers
的研究报告中提到，在羊驼科动物体内首次发现了一种特殊的抗体，被称为重链抗体或
VHH
抗体
。
这些抗体缺失了常见的轻链，在抗原结合方面仅依赖于重链的可变区域（
VHHs
）
。VHH
抗体是迄今为止功能最小完整的抗体分子片段，由4个框架区域（
FR1
～
FR4
）和3个互补决定区域（
CDR1
～
CDR3
）构成
。
其相对分子质量约为
15k Da
，仅为常规抗体的十分之一
。
这种抗体分子高度为
4.8 nm
，直径约为
2.2 nm
，因此被称为纳米抗体（
nanobody
）
。
纳米抗体具备许多优点，如分子量小
、
物理稳定性高
、
易于表达等
。
此外，纳米抗体不容易聚集沉淀，并且仍然保持与抗原结合的能力
。
[0003]PD
‑1（程序性死亡分子1）是一种免疫抑制性受体，属于
CD28
超家族的
T
细胞调节受体
。PD
‑1基因位于
2q37.3
染色体，编码一种含有
288
个氨基酸的跨膜蛋白
。
它的结构包括胞外区
、
跨膜区和胞质区，其中胞外区具有一个重要的
IgV
样结构域和4个
N
连接糖基化位点
。PD
‑1在氨基酸序列上与
CD28、CTLA
‑4和诱导型
T
细胞共刺激因子存在差异，因此与配体的结合非常特异
。PD
‑1的表达广泛分布在
T
淋巴细胞
、
自然杀伤细胞
、B
淋巴细胞
、
巨噬细胞
、
树突状细胞和单核细胞等免疫细胞中
。
特别是在肿瘤特异性
T
细胞上表达较高
。PD
‑1的转录受多种转录因子的调节，如
NFAT、NOTCH、FOXM1
和
IRF9
等
。PD
‑1的过度表达在肿瘤
、
慢性感染和其他免疫相关疾病中起到免疫抑制的作用
。
[0004]PD
‑
L1
（程序性死亡配体1）和
PD
‑
L2
（程序性死亡配体2）是
PD
‑1的两个配体，其中
PD
‑
L1
是主要配体，由
PD
‑
L1
基因编码
。PD
‑
L1
的全长由7个外显子编码，是一种1型跨膜蛋白
。PD
‑
L1
的表达可以是构成性的或诱导性的
。
构成性的
PD
‑
L1
低水平表达在静息淋巴细胞
、
抗原递呈细胞和某些组织中存在，并有助于维持组织的稳态
。
在炎症或感染的情况下，
PD
‑
L1
可以被诱导表达在造血细胞
、
内皮细胞和上皮细胞等免疫细胞上
。PD
‑
L1
的表达受多种因素影响，如
TLR
和
IFN
‑
γ
等信号通路
。PD
‑
L1
的过度表达在肿瘤中起到逃避免疫应答的作用
。PD
‑
L1
通过与其受体结合并激活增生性和存活信号通路，在癌细胞中具有促肿瘤发生的作用
。
[0005]肿瘤细胞表面的
PD
‑
L1
与
T
细胞表面的
PD
‑1受体结合后，可抑制
T
细胞的活性，使阻滞在
G0/G1
期，从而抑制
T
细胞的增殖，并诱导
T
细胞的凋亡，从而造成肿瘤免疫逃逸
。PD
‑
1/PD
‑
L1
抑制剂可阻断
PD
‑1和
PD
‑
L1
的结合，使
T
细胞恢复活性，实现对肿瘤细胞的免疫抑制
。
虽然
PD
‑
1/PD
‑
L1
抑制剂已在临床上用于治疗多种肿瘤，但仍面临着有效率低
、
引发自身免疫性疾病等问题
。
[0006]近年来，越来越多的研究发现多种肿瘤病人的血浆中存在着高浓度的和可溶性
PD
‑
L1
，并且可以发挥与细胞膜表面
PD
‑
L1
同样的免疫抑制功能，这可能是
PD
‑
1/PD
‑
L1
疗法反应率低的一个原因
。
免疫细胞暴露于不含
PD
‑
L1
的肿瘤细胞后可被重新激活，并可行进至远处攻击可分泌
PD
‑
L1
的肿瘤细胞，还会诱导
T
细胞产生强大的记忆反应，抑制可分泌
PD
‑
L1
肿瘤细胞的生长
。
[0007]CN115433281A
公开了抗
PD
‑
L1
的人源化纳米抗体，结果显示：纳米抗体
NB43
，
M2
，
M5
和
M7
亲和力分别为
6.772nM
，
2.667nM
，
1.047nM
和
19.84nM。
[0008]开发一种抗
PD
‑
L1
白的纳米抗体具有非常重要的意义
。

技术实现思路

[0009]本专利技术的目的在于克服现有技术的至少一个不足，提供一种
PD
‑
L1
蛋白的纳米抗体及其应用
。
[0010]本专利技术所采取的技术方案是：本专利技术的第一个方面，提供：一种抗
PD
‑
...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种抗
PD
‑
L1
蛋白的纳米抗体，包括框架区域和互补决定区域，其特征在于，其互补决定区域
CDR1
～
CDR3
的氨基酸序列为：
CDR1
：
GYTAS、CDR2
：
IENSDST、CDR3
：
AARDDDYAFLSRGARDFRY。2.
根据权利要求1所述的纳米抗体，其特征在于，其框架区域
FR1
～
FR4
的氨基酸序列如下：
FR1
：
VQLQESGGGSVQAGGSLRLSCAAS、FR2
：
MGWFRQAPGKEREGIAT、FR3
：
NYADSVRGRFTISKDNAKNTLYLQINSLKPEDTAVYYC、FR4
：
WGQGTQVTVSS。3.
一种基因，其编码权利要求1或2所述的纳米抗体
...

【专利技术属性】
技术研发人员：PD，
申请(专利权)人：广州康盛生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：