【技术实现步骤摘要】
本申请属于磁性材料，尤其涉及一种羧基化琼脂糖生物磁珠的制备方法及其应用。
技术介绍
1、生物磁珠是一种具有超强顺磁性的微粒，其内部负载了磁性粒子，磁响应性能优越且分散性好，能够在磁场中能够迅速聚集，离开磁场后又能够均匀分散，内部负载磁性粒子的生物磁珠结构有多种，例如包括磁性粒子内核和二氧化硅外壳的核壳型二氧化硅磁珠，包括聚苯乙烯内核、磁性粒子中间层以及聚合物外壳的夹层型聚苯乙烯磁珠，磁性粒子分散在琼脂糖基质中的弥散型琼脂糖磁珠；除了内部负载的磁性粒子外，生物磁珠表面还具有丰富的表面活性基团，这些表面活性基团可以和对应的生化物质偶联，偶联后施加外磁场可以实现与待测样品的分离，因此，生物磁珠在磁场作用下，可以同时实现分离和富集，提升分离速度和富集效率，分析检测的灵敏度高，目前已经被广泛应用于蛋白纯化、免疫分析、核酸分离提取、细胞分选、酶固定等
2、与聚苯乙烯等生物磁珠相比，琼脂糖生物磁珠具有良好的生物相容性，并且微球表面凝胶孔丰富，有利于覆盖丰富的表面活性基团，是一种很有应用前景的磁性微球；长期以来，人们一直考虑用四氧化三铁作为磁核制备琼脂糖生物磁珠，然而目前制备的琼脂糖生物磁珠粒径分布较宽，琼脂糖生物磁珠之间粒径差距大，大粒径琼脂糖生物磁珠含量较高，大部分的琼脂糖生物磁珠粒径超过12微米，或小于4微米，粒径为4μm～12μm的，可用于蛋白纯化和免疫检测的小粒径琼脂糖生物磁珠的收率较低，加工制备成本高，限制了琼脂糖生物磁珠的应用。
技术实现思路
1、有鉴于此，本申
2、本申请第一方面提供了一种羧基化琼脂糖生物磁珠的制备方法，制备方法包括步骤：
3、步骤s1、将分散有磁性琼脂糖水相液滴的油相悬浊液进行均质处理，冷却后得到磁性琼脂糖微粒；
4、步骤s2、将磁性琼脂糖微粒进行交联反应，得到交联强化的磁性琼脂糖微粒；
5、步骤s3、将交联强化的磁性琼脂糖微粒进行羧基化表面改性，得到羧基化琼脂糖生物磁珠。
6、优选的，步骤s3之后，还包括步骤s4：将羧基化琼脂糖生物磁珠进行筛分，得到窄粒径分布的羧基化琼脂糖生物磁珠。
7、优选的，步骤s1中，所述均质处理的过程包括：将分散有磁性琼脂糖水相液滴的油相悬浊液加入到高压均质机中，在温度为90～100℃，压力为20～40bar的条件下进行均质处理。
8、优选的，步骤s2中，所述交联反应的过程包括：将磁性琼脂糖微粒和交联剂加入到有机溶剂中，在温度为30-40℃的条件下搅拌进行交联反应。
9、优选的，步骤s3中，所述羧基化表面改性的过程包括：将交联强化的磁性琼脂糖微粒与氨基化合物的有机溶液进行氨基改性后，加入酸酐的有机溶剂进行反应，得到羧基化琼脂糖生物磁珠。
10、优选的，步骤s4中，所述筛分的过程包括依次采用孔径为4μm和12μm的筛网筛分羧基化琼脂糖生物磁珠。
11、进一步优选，步骤s4中，所述筛分的过程包括依次采用孔径为5μm和10μm的筛网筛分羧基化琼脂糖生物磁珠。
12、优选的，步骤s1中，所述分散有磁性琼脂糖水相液滴的油相悬浊液中，磁性琼脂糖水相液滴和油相的体积比为1:2～4；
13、所述磁性琼脂糖水相液滴中，琼脂糖的浓度为4～10wt％，磁性粒子和琼脂糖的质量比为1：2～6。
14、优选的，步骤s1中，所述分散有磁性琼脂糖水相液滴的油相悬浊液的制备方法包括：将分散磁性粒子的琼脂糖水相溶液加入到含有表面活性剂的油相烃类溶剂中，搅拌分散得到分散有磁性琼脂糖水相液滴的油相悬浊液；
15、所述磁性粒子选自四氧化三铁；
16、所述油相烃类溶剂选自甲苯、液体石蜡、植物油中的至少一种；
17、所述表面活性剂选自司班40、司班60、司班80、司班85、磷酸酯中的至少一种；
18、所述含有表面活性剂的油相烃类溶剂中表面活性剂的含量为0.5-5wt％。
19、优选的，步骤s2中，所述交联剂选自环氧氯丙烷。
20、优选的，步骤s3中，所述氨基化合物选自乙二胺，所述酸酐选自戊二酸酐；
21、所述交联强化的磁性琼脂糖微粒和乙二胺的质量比为1～2：1，交联强化的琼脂糖磁珠和戊二酸酐的质量比为1：1～4。
22、本申请第二方面提供了一种羧基化琼脂糖生物磁珠，由第一方面所述制备方法制备得到。
23、本申请第三方面提供了第一方面所述制备方法制备得到的羧基化琼脂糖生物磁珠在提纯领域或检测分析领域中的应用。
24、优选的，所述提纯领域包括蛋白纯化、核酸分离提取以及细胞分选。
25、所述检测领域包括免疫分析、重金属检测。
26、综上所述，本申请提供了一种羧基化琼脂糖生物磁珠的制备方法及其应用，制备方法包括将分散有磁性琼脂糖水相液滴的油相悬浊液进行均质化处理，制备得到磁性琼脂糖微粒，随后进行交联强化和表面羧基官能团改性；均质化处理后，可以有效制备得到窄粒径分布，且小粒径琼脂糖生物磁珠，提供了足够多的活性位点供表面羧基官能团结合，同时均质化处理过程中促使四氧化三铁颗粒均匀包裹在琼脂糖微球内部，从而制备得到的琼脂糖生物磁珠收率高，饱和磁化强度高；因此，本申请通过均质化处理过程，使得成品琼脂糖生物磁珠的粒径分布较窄，粒径为4μm～12μm的小粒径磁珠的占比较高，表面的活性基团含量增加，改善琼脂糖生物磁珠的磁反应性和分离效果等性能，琼脂糖生物磁珠灵敏度高，拓展了琼脂糖生物磁珠的应用领域，从而解决现有制备方法中制备得到的小粒径琼脂糖生物磁珠收率较低，性能较差，限制了其应用的技术问题。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种羧基化琼脂糖生物磁珠的制备方法，其特征在于，包括步骤：
2.根据权利要求1所述的一种羧基化琼脂糖生物磁珠的制备方法，其特征在于，步骤S1中，所述均质处理的过程包括：将分散有磁性琼脂糖水相液滴的油相悬浊液加入到高压均质机中，在温度为90～100℃，压力为20～40bar的条件下进行均质处理。
3.根据权利要求1所述的一种羧基化琼脂糖生物磁珠的制备方法，其特征在于，步骤S3之后，还包括步骤S4：将羧基化琼脂糖生物磁珠进行筛分，得到窄粒径分布的羧基化琼脂糖生物磁珠。
4.根据权利要求1所述的一种羧基化琼脂糖生物磁珠的制备方法，其特征在于，步骤S1中，所述分散有磁性琼脂糖水相液滴的油相悬浊液中，磁性琼脂糖水相液滴和油相的体积比为1:2～4；
5.根据权利要求1所述的一种羧基化琼脂糖生物磁珠的制备方法，其特征在于，步骤S2中，所述交联反应的过程包括：将磁性琼脂糖微粒和交联剂加入到有机溶剂中，在温度为30-40℃的条件下搅拌进行交联反应。
6.根据权利要求1所述的一种羧基化琼脂糖生物磁珠的制备方法，其特征在于，步骤S3中，所
7.根据权利要求6所述的一种羧基化琼脂糖生物磁珠的制备方法，其特征在于，步骤S3中，所述氨基化合物选自乙二胺，所述酸酐选自戊二酸酐；
8.根据权利要求1所述的一种羧基化琼脂糖生物磁珠的制备方法，其特征在于，步骤S4中，所述筛分的过程包括：依次采用孔径为5μm和10μm的筛网筛分羧基化琼脂糖生物磁珠。
9.权利要求1-8任一项所述的制备方法制备得到的羧基化琼脂糖生物磁珠在提纯领域或检测分析领域中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述应用所述提纯领域包括蛋白纯化、核酸分离提取以及细胞分选；
...【技术特征摘要】
1.一种羧基化琼脂糖生物磁珠的制备方法，其特征在于，包括步骤：
2.根据权利要求1所述的一种羧基化琼脂糖生物磁珠的制备方法，其特征在于，步骤s1中，所述均质处理的过程包括：将分散有磁性琼脂糖水相液滴的油相悬浊液加入到高压均质机中，在温度为90～100℃，压力为20～40bar的条件下进行均质处理。
3.根据权利要求1所述的一种羧基化琼脂糖生物磁珠的制备方法，其特征在于，步骤s3之后，还包括步骤s4：将羧基化琼脂糖生物磁珠进行筛分，得到窄粒径分布的羧基化琼脂糖生物磁珠。
4.根据权利要求1所述的一种羧基化琼脂糖生物磁珠的制备方法，其特征在于，步骤s1中，所述分散有磁性琼脂糖水相液滴的油相悬浊液中，磁性琼脂糖水相液滴和油相的体积比为1:2～4；
5.根据权利要求1所述的一种羧基化琼脂糖生物磁珠的制备方法，其特征在于，步骤s2中，所述交联反应的过程包括：将磁性琼脂糖微粒和交联剂加入到有机溶剂中，在...
【专利技术属性】
技术研发人员：牛月伟，杨正根，邹华，陈伟康，郭欣然，唐嘉忆，陈校园，
申请(专利权)人：广州康盛生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。