一种生产次黄嘌呤的基因工程菌及其构建方法与应用技术

技术编号:39786200 阅读:21 留言:0更新日期:2023-12-22 02:26
本发明专利技术提供了一种生产次黄嘌呤的基因工程菌及其构建方法与应用,以野生型

【技术实现步骤摘要】
一种生产次黄嘌呤的基因工程菌及其构建方法与应用


[0001]本专利技术涉及化合物生物技术及发酵工程技术生产领域,尤其是一种生产次黄嘌呤的基因工程菌及其构建方法与应用


技术介绍

[0002]次黄嘌呤是人体内嘌呤代谢的重要中间产物之一,是一种重要的生物碱嘌呤,在人体能量供应,调节生理机能等方面发挥着重要作用

嘌呤代谢途径显示次黄嘌呤可以通过腺嘌呤脱氨酶由腺嘌呤脱氨生成,也能通过核苷磷酸化酶酶解肌苷生成

次黄嘌呤在医药领域应用于许多疾病的诊断和治疗;是生产多种抗肿瘤药物的原料

有研究发现次黄嘌呤能促进小鼠的脂肪分解,起到降低体内脂肪的作用;同时在食品

化妆品

饲料等领域也广泛应用

[0003]目前合成次黄嘌呤的方法有天然产物提取法

化学合成法

微生物发酵法等,天然产物提取法是由于天然植物

动物组织中含有次黄嘌呤,优点是来源广泛,但同时也存在产率低且花费高的问题;本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种生产次黄嘌呤的基因工程菌,其特征在于:是通过下述基因改造方法获得的:首先通过在野生型
E.coliW3110
的基因组
yjiV
位点引入异源的嘌呤操纵子基因
pur(EKBCSQLFMNHD)
,由
P
trc
启动子启动;然后在基因组
yghX、ygaY
位点引入异源的腺苷酸琥珀酸合酶基因
purA
和腺苷酸琥珀酸裂解酶基因
purB
,分别由
PT7启动子和
P
trc
启动子启动;接着敲除嘌呤核苷酸阻遏蛋白基因
purR
,并在基因组
rpH

yjgX
位点分别引入
PRPP
转酰胺酶的抗反馈变体
purF
bazK316Q

PRPP
合成酶的抗反馈变体
prs
ecoD128A
,均由
P
trc
启动子启动;然后在基因组
ycgh
位点双拷贝腺苷脱氨酶基因
add
,由
Ptrc
启动子启动;之后通过敲除次黄苷酸脱氢酶基因
guaB
,再敲除次黄嘌呤磷酸核糖转移酶基因
hpt
,然后敲除黄嘌呤脱氢酶
xdhA、xdhB

xdhC
,得到改造成功后的目的菌
。2.
根据权利要求1所述的生产次黄嘌呤的基因工程菌,其特征在于:所述野生型
E.coliW3110
的保藏号为
ATCC 273250。3.
根据权利要求1所述的生产次黄嘌呤的基因工程菌,其特征在于:所述嘌呤操纵子基因
pur(EKBCSQLFMNHD)
的核苷酸序列如
SEQ ID NO.1
所示;所述腺苷酸琥珀酸合酶基因
purA
的核苷酸序列如
SEQ ID NO.2
所示;所述腺苷酸琥珀酸裂解酶基因
purB
的核苷酸序列如
SEQ ID NO.3
所示;所述嘌呤核苷酸阻遏蛋白基因
purR
的核苷酸序列如
SEQ ID NO.4
所示;所述抗反馈变体
purF
bazK316Q
的核苷酸序列如
SEQ ID NO.5
所示;所述抗反馈变体
prs
ecoD128A
的核苷酸序列如
SEQ ID NO.6
所示;所述腺苷脱氨酶基因
add
的核苷酸序列如
SEQ ID NO.7
所示
;
所述次黄苷酸脱氢酶基因
guaB
的核苷酸序列如
SEQ ID NO.8
所示;所述次黄嘌呤磷酸核糖转移酶基因
hpt
的核苷酸序列如
SEQ ID NO.9
所示;所述黄嘌呤脱氢酶
xdhA
的核苷酸序列如
SEQ ID NO.10
;所述黄嘌呤脱氢酶
xdhB
的核苷酸序列如
SEQ ID NO.11
所示;所述黄嘌呤脱氢酶
xdhC
的核苷酸序列如
SEQ ID NO.12
所示;所述
P
trc
启动子的核苷酸序列如
SEQ ID NO.13
所示;所述
PT7启动子的核苷酸序列如
SEQ ID NO.14
所示核苷酸序列
。4.
权利要求1所述生产次黄嘌呤的基因工程菌的构建方法,其特征在于:具体步骤如下:(1)通过在
E. coliW3110
的基因组
yjiV
位点引入异源的嘌呤操纵子基因
pur(EKBCSQLFMNHD)
,由
P
trc
启动子启动,增强嘌呤代谢途径的碳代谢流;(2)通过在基因组
yghX、ygaY
位点引入异源的腺苷酸琥珀酸合酶基因
purA
和腺苷酸琥珀酸裂解酶基因
purB
,分别由
PT7、P
trc
启动子启动;(3)敲除嘌呤核苷酸阻遏蛋白基因
purR
,在基因组
yjgX

rpH
位点分别引入解淀粉芽孢杆菌的
PRPP
转酰胺酶的抗反...

【专利技术属性】
技术研发人员:徐庆阳赵思宇时唐恩孙鹏杰陈志超
申请(专利权)人:天津科技大学
类型:发明
国别省市:

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