产环状脂肽微生物株及环状脂肽的制备方法技术

本发明专利技术的课题在于提高基于微生物培养的表面活性素等环状脂肽的生产性

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】产环状脂肽微生物株及环状脂肽的制备方法


[0001]本专利技术涉及产环状脂肽微生物株及使用该微生物株的环状脂肽的制备方法
。

技术介绍

[0002]以表面活性素
、
伊枯草菌素为代表的环状脂肽是来自于微生物的两亲性物质，例如，表面活性素作为安全性和生物降解性高的生物表面活性剂而广泛地用于医药品
、
化妆品
、
食品等
。
另外，上述环状脂肽不仅显示出所谓的表面活性作用，还对广谱的细菌或真菌显示出优异的抗细菌作用或抗真菌作用，期待作为抗菌剂
、
防霉剂
、
感染症治疗剂
、
植物病害防治剂等而在医疗
、
食品制造
、
农业
、
环境卫生等多种领域中得到充分利用
。
[0003]表面活性素
、
伊枯草菌素等环状脂肽可由芽孢杆菌
(Bacillus)
属微生物产生，因此，环状脂肽的工业生产可通过培养芽孢杆菌属微生物而进行
(
专利文献1等
)。
在这样的基于微生物的有用物质的工业生产中，其生产性的提高是重要的课题
。
[0004]迄今为止，为了提高利用芽孢杆菌属微生物的培养进行的表面活性素的生产性，探讨了各种方法，但其多数是基于对培养基添加特殊的成分
、
严格控制培养条件的方法，无法满足生产性
、
经济性
。
[0005]另外，对于表面活性素的生产能力高的枯草芽孢杆菌的突变株也有一些报告
。
例如，专利文献2中公开了一种用
NMG
将枯草芽孢杆菌
(Bacillus subtilis)ATCC21332
进行诱变处理而得到的能够以高浓度生产表面活性素的枯草芽孢杆菌
(Bacillus subtilis)ATCC55033
株
。
另外，非专利文献1中报告了枯草芽孢杆菌
(Bacillus subtilis)ATCC21332
的利用紫外线照射得到的突变株具有亲本株3倍以上的表面活性素生产性，该突变位于遗传图谱上的
argC4
与
hisA1
之间
。
然而，它们并不是将与该突变相关的特定靶基因进行修饰而成的微生物菌株，无法为了工业生产而稳定且大量地供给
。
[0006]现有技术文献
[0007]专利文献
[0008]专利文献1：专利第
3635638
号公报
[0009]专利文献2：专利第
3030789
号公报
[0010]非专利文献
[0011]非专利文献1：
Appl.Microbiol.Biotech.,31:486
‑
489(1989)

技术实现思路

[0012]专利技术要解决的课题
[0013]因此，本专利技术的课题在于提供表面活性素等环状脂肽的生产性优异
、
而且能够稳定且大量地供给于环状脂肽的工业生产的微生物株，提高基于微生物培养的环状脂肽的生产性
。
[0014]解决课题的方法
[0015]本专利技术人等为了解决上述课题而进行了深入研究，结果发现，在编码甜菜碱醛脱
atrophaeus)、
死谷芽胞杆菌
(Bacillus vallismortis)、
索诺拉沙漠芽孢杆菌
(Bacillus sonorensis)、
耐盐芽胞杆菌
(Bacillus halotolerans)、
炭疽芽孢杆菌
(Bacillus anthracis)、
蜡样芽孢杆菌
(Bacillus cereus)、
苏云金芽胞杆菌
(Bacillus thuringiensis)、
蕈状芽胞杆菌
(Bacillus mycoides)、
地衣芽孢杆菌
(Bacillus licheniformis)、
副地衣芽孢杆菌
(Bacillus paralicheniformis)、Bacillus swezeyi、Bacillus genomospecies、
甲基营养型芽胞杆菌
(Bacillus methylotrophicus)
，最优选为枯草芽孢杆菌
(Bacillus subtilis)。
需要说明的是，这些成为宿主
(
亲本株
)
的微生物也可以是野生型，也可以施加了突变
。
[0034]本专利技术的一个以上的实施方式的微生物株是在宿主中使甜菜碱醛脱氢酶
(EC:1.2.1.8)
或胆碱脱氢酶
(EC:1.1.1.1)
中的至少1个基因缺损的转化体
(
重组微生物
)。
[0035]＜甜菜碱醛脱氢酶
(EC:1.2.1.8)
＞
[0036]已知在多数细菌
、
植物
、
动物中调节细胞内的渗透压的甜菜碱通过若干途径合成，其中之一是通过
(i)
从胆碱向甜菜碱醛的转变和
(ii)
从甜菜碱醛向甜菜碱的转变这2步进行合成的途径
。
甜菜碱醛脱氢酶
(EC:1.2.1.8)
是催化该第2步反应的酶，以
NAD
+
作为辅酶将甘氨酸甜菜碱醛转变为甘氨酸甜菜碱
。
[0037]作为甜菜碱醛脱氢酶的例子，将枯草芽孢杆菌
(Bacillus subtilis)
来源的甜菜碱醛脱氢酶的碱基序列及由该碱基序列编码的氨基酸序列分别示于序列号1及序列号
2。
[0038]另外，甜菜碱醛脱氢酶并不限定于由序列号2所示的氨基酸序列构成的甜菜碱醛脱氢酶，也可以是其活性突变体
、
其它种直系同源体等具有甜菜碱醛脱氢酶活性的其它多肽
。
具有甜菜碱醛脱氢酶活性的其它多肽优选为相对于由序列号2所示的氨基酸序列构成的甜菜碱醛脱氢酶的活性显示出
10
％以上
、
优选为
40
％以上
、
更优选为
60
％以上
、80
％以上
、
进一步优选为
90
％以上的活性的多肽
。
[0039]因此，作为甜菜碱醛脱氢酶的具体例，可以列举：
[0040](1A)
由序列号2所示的氨基酸序列构成的多肽；
[0041](1B)
由在序列号2所示的氨基酸序列中1～多个氨基酸发生了添加
、
缺失或置换的氨本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.
一种产环状脂肽微生物株，其中，以下的
(1)
或
(2)
中的至少1个基因缺损：
(1)
编码甜菜碱醛脱氢酶
(EC:1.2.1.8)
的基因
、(2)
编码胆碱脱氢酶
(EC:1.1.1.1)
的基因
。2.
根据权利要求1所述的微生物株，其中，所述微生物株是以细菌作为宿主的重组微生物株
。3.
根据权利要求2所述的微生物株，其中，所述细菌为革兰氏阳性细菌
。4.
根据权利要求3所述的微生物株，其中，所述革兰氏阳性细菌为芽孢杆菌
(Bacillus)
属细菌
。5.
根据权利要求4所述的微生物株，其中，所述芽孢...

【专利技术属性】
技术研发人员：青木里奈，小林新吾，田冈直明，
申请(专利权)人：株式会社钟化，
类型：发明
国别省市：