一种恒温组织消化装置及原代细胞分离方法制造方法及图纸

本发明专利技术公开了一种恒温组织消化装置及原代细胞分离方法，所述恒温组织消化装置包括用于提供恒温环境的恒温系统

【技术实现步骤摘要】
一种恒温组织消化装置及原代细胞分离方法


[0001]本专利技术属于原代细胞培养
，尤其涉及一种恒温组织消化装置及原代细胞分离方法
。

技术介绍

[0002]原代细胞培养越来越多地用作细胞和分子生物学的主要工具，为研究细胞的正常生理学和生物化学
(
例如，代谢研究
、
衰老
、
信号研究
)
，药物和有毒化合物的作用提供了出色的模型系统
。
目前从组织上获取原代细胞的方式通常为各种消化酶的解离作用
。
常用的组织消化液中的消化酶有：胰蛋白酶
、
胶原酶
、DNA
酶等，应用酶的生化作用和非酶的化学作用进一步使细胞间的桥连结构松动，使团块膨松，由块状变成絮状，将细胞从组织中解离出来，转变为单细胞或细胞团状态，用于后续的体外培养
。
[0003]传统酶消化方式主要依靠恒温组织消化装置来实现
。
而现有的恒温组织消化装置存在以下几点不足：
1、
对组织进行酶消化处理时，由于样品在离心管底尖部聚集，其与消化液的接触不充分，影响消化效率；
2、
酶解反应的最适温度为
37℃
，温度的高低对酶活性影响较大，从而影响消化效率，影响细胞活性；
3、
传统消化方式多采用
37℃
水浴的方式来控制温度，为保持消化效率，消化过程中需要多次取出混匀组织和消化液，水浴方式难以施加机械力维持组织与消化液长时间的充分接触，同时水浴用水易接触样品管口，增加微生物污染风险；
4、
单纯使用消化液消化组织，细胞解离效率较低，消化时间较长，先解离出的细胞长时间浸泡在消化液中，对细胞活性产生较大的影响，导致后续细胞培养的成功率降低；
5、
组织解离过程中，解离出的细胞团大小只能通过实验人员取出细胞悬液镜下观察，为把控消化时间，获得目标大小的细胞团，必须实验人员多次取液镜下观察，增加操作时间，增加微生物污染风险
。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供一种恒温组织消化装置及原代细胞分离方法，能够提高消化液对样品的消化效率
。
[0005]为了解决上述所提到的技术问题，本专利技术具体采用以下技术方案：一种恒温组织消化装置，其特征在于：包括用于提供恒温环境的恒温系统
、
用于样品与消化液充分接触的振荡机构
、
用于检测细胞团大小的检测装置；
[0006]所述恒温系统包括密闭的壳体，所述壳体内设置有温度传感器；还包括设置在壳体内的加热装置以及为壳体内空气降温的散热装置；
[0007]所述振动机构包括横向设置的转轴；所述转轴上沿轴向间隔设置有至少一组连接杆组件；每组连接杆组件包括若干沿所述转轴的圆周方向间隔设置的若干连接杆；所述连接杆端部设置有样品容器夹，所述样品容器夹与连接杆之间的角度可调节；还包括用于放置样品的样品容器，所述样品容器由样品容器夹夹持，使得所述样品容器的轴线在所述连杆轴线与所述转轴轴线所在平面上的投影与所述连接杆的轴线之间形成锐角
α
；
[0008]所述检测装置为超声波粒度检测装置，包括相对设置的超声波发生器和超声波接收器；所述超声波发生器与超声波接收器之间形成检测区域，所述样品容器由转轴带动旋转时，可经过检测区域
。
[0009]作为一种改进，所述样品容器的轴线
、
所述连杆的轴线与所述转轴的轴线在同一平面
。
[0010]作为另一种改进，所述样品容器的轴线与所述连接杆的轴线和所述转轴的轴线所在平面之间形成所述锐角
。
[0011]作为一种改进，所述样品容器呈圆柱形的套筒，以及设置在所述套筒一端的锥形容置腔，并且样品容器内设置有筛网；所述筛网固定在套筒底部，所述套筒内设置有便于夹取的横梁
。
[0012]作为一种改进，所述转轴上开有卡槽；还包括连接环，所述连接环利用卡槽固定在转轴上；所述连接杆固定在连接环上
。
[0013]作为一种改进，同组连接杆设置在同一连接环上，并沿连接环圆周均匀布置
。
[0014]作为一种改进，所述加热装置为电阻丝，所述散热装置为排风扇
。
[0015]作为一种改进，所述壳体为透明材质制作，并且壳体上设置有门板
。
[0016]作为一种改进，所述转轴由左右两个支架支撑，并由电机带动旋转
。
[0017]作为一种改进，还包括初始化装置，所述初始化装置包括设置在转轴上与连接杆组件中任一个连接杆平行的凸起；还包括设置在支架上的伸缩杆，当伸缩杆伸出时可与凸起发生干涉
。
[0018]作为另一种改进，所述初始化装置包括设置在所述转轴上沿径向延伸的凸起，且所述凸起在转轴的圆周平面上的投影位于相邻两个连接杆在所述圆周平面上的投影之间，还包括设置在所述支架上的伸缩杆，当伸缩杆伸出时可与凸起发生干涉，从而实现初始化定位
。
[0019]作为一种改进，还包括档位调节装置，所述档位调节装置可控制电机转速
。
[0020]本专利技术还提供一种原代细胞分离方法，应用于上述恒温组织消化装置，包括：
[0021]在带有编号的样品容器内放入样品以及消化液；
[0022]将样品容器顺序与连接杆连接，同一组中样品容器编号由小到大排列的方向与转轴旋转方向相反；
[0023]对样品容器位置进行初始化，使得同一组中编号为第一顺位的样品容器位于检测装置的检测区域内或靠近所述检测区域
(
也第一顺位的样品容器将作为进入检测区域的第一个样品容器
)
；且当转轴开始转动后，同组样品容器中从第一顺位至末位的样品容器依次经过所述检测区域；
[0024]利用恒温系统将环境温度控制在
36
～
38℃
，并驱动转轴旋转进行组织消化；
[0025]在样品容器内放置不同样品的时，利用检测装置对每个样品容器内样品的解离程度进行检测；当某个样品容器内的样品解离达到目标，停机取下相应编号的样品容器；
[0026]在样品容器内放置相同样品时，利用检测装置对每个样品容器内样品的解离程度进行检测；当解离出来的细胞占比达到第一预设目标至，降低转轴转速，直到解离出来的细胞占比达到第二预设目标值停机，其中，所述第一预设目标值小于所述第二预设目标值
。
[0027]作为一种改进，利用公式
t
＝
n
π
/180
ω
计算各样品容器经过检测区域的时间间隔，
其中
t
为时间间隔，
n
为当前检测到的样品容器所在连接杆与同组中第一顺位样品容器所在连接杆之间的夹角，
ω
为转轴的角速度
。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种恒温组织消化装置，其特征在于：包括用于提供恒温环境的恒温系统
、
用于样品与消化液充分接触的振荡机构
、
用于检测细胞团大小的检测装置；所述恒温系统包括密闭的壳体，所述壳体内设置有温度传感器；还包括设置在壳体内的加热装置以及为壳体内空气降温的散热装置；所述振动机构包括横向设置的转轴；所述转轴上沿轴向间隔设置有至少一组连接杆组件；每组连接杆组件包括若干沿所述转轴的圆周方向间隔设置且沿所述转轴径向延伸的若干连接杆；所述连接杆端部设置有样品容器夹，所述样品容器夹与所述连接杆之间的角度可调节；还包括用于放置样品的样品容器，所述样品容器由所述样品容器夹夹持，使得所述样品容器的轴线在所述连杆轴线与所述转轴轴线所在平面上的投影与所述连接杆的轴线之间形成锐角
α
；所述检测装置为超声波粒度检测装置，包括相对设置的超声波发生器和超声波接收器；所述超声波发生器与所述超声波接收器之间形成检测区域，所述样品容器由转轴带动旋转时，可经过所述检测区域
。2.
根据权利要求1所述的一种恒温组织消化装置，其特征在于：所述样品容器的轴线与所述连接杆的轴线和所述转轴的轴线所在平面之间形成所述锐角
。3.
根据权利要求1所述的一种恒温组织消化装置，其特征在于：所述样品容器包括呈圆柱形的套筒，以及设置在所述套筒一端的锥形容置腔，并且所述样品容器内设置有筛网；所述筛网固定在所述套筒底部，所述套筒内设置有便于夹取的横梁；和
/
或，所述转轴上开有卡槽；还包括连接环，所述连接环利用所述卡槽固定在所述转轴上；所述连接杆固定在所述连接环上；同组连接杆组件设置在同一连接环上，并沿连接环圆周均匀布置
。4.
根据权利要求1所述的一种恒温组织消化装置，其特征在于：所述加热装置为电阻丝，所述散热装置为排风扇
。5.
根据权利要求1所述的一种恒温组织消化装置，其特征在于：所述壳体为透明材质制作，并且所述壳体上设置有门板
。6.
根据权利要求1所述的一种恒温组织消化装置，其特征在于：所述转轴由左右两个支架支撑，并由电机带动旋转
。7.
根据权利要求6所述的一种恒温组织消化装置，其特征在于：还包括档位调节装置，...

【专利技术属性】
技术研发人员：何春花，龚刘萍，李胜，陆政昊，王嘉，杨云旭，彭宇，
申请(专利权)人：广州精科生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：