一步法制备彩色时间分辨荧光微球的方法技术

本发明专利技术涉及免疫检测技术领域，尤其是一种一步法制备彩色时间分辨荧光微球的方法，将三口烧瓶中的乙醇和水的混合溶液通氮气置换空气，再向体系中加入分散剂和氯化铕搅拌溶解，缓慢加入稀土配体

【技术实现步骤摘要】
一步法制备彩色时间分辨荧光微球的方法


[0001]本专利技术涉及免疫检测
，具体领域为一种一步法制备彩色时间分辨荧光微球的方法
。

技术介绍

[0002]时间分辨荧光免疫分析技术是依赖于稀土元素独特的荧光性质而发展起来的一种免疫检测技术，它集合了放射免疫技术
、
酶联免疫技术以及普通荧光免疫技术的优点，具有灵敏度高
、
特异性强
、
稳定性好的优点，且具有线性范围宽
、
荧光寿命长
、
操作简单及非放射性的特点，在免疫分析领域展现了良好的应用前景
。
[0003]时间分辨荧光免疫分析中常用到的原材料
——
时间分辨荧光微球，通常是先通过乳液聚合法合成聚苯乙烯微球以及稀土离子荧光染料，然后再采用溶胀法将稀土离子包埋到微球内部而成
。
但是这种微球呈现出的是微球自身的白色或者淡黄色，在免疫层析的实验过程中以及应用中，用户肉眼观察不到检测线
T
线和质控线
C
线，必须借助仪器来观察并读取数值
。
[0004]如果将时间分辨荧光微球赋予鲜艳的染色，可以直观的对异常的测试条查找出现问题的原因
。
因此，专利技术一种彩色的时间分辨荧光微球至关重要
。
[0005]CN 111218270A
公布一种改性时间分辨荧光微球的制备方法，首先通过乳液聚合法制备聚苯乙烯微球，再将溶剂染料
、2
‑
噻吩甲酰三氟丙酮
、
邻菲罗啉盐酸盐
、
氯化铕及电子介体若干溶解在石油醚中生成混合物，最后将混合物缓慢滴加到聚苯乙烯微球溶液中制备而成
。
[0006]CN 105424923A
中公布一种彩色
‑
荧光双功能免疫层析试纸条及其制备的方法，其中涉及到彩色
‑
荧光双功能微球的制备方法，首先通过微乳液聚合法制备羧基聚苯乙烯微球，再使用溶胀剂二氯甲烷或者四氢呋喃采用溶胀法将荧光标记物和脂溶性彩色染料包埋到微球内部制备而成
。
[0007]但是以上方法仍存在一些缺陷和不足：
[0008](1)
操作步骤繁琐：先要通过乳液聚合法合成聚苯乙烯微球以及稀土离子荧光染料，然后再通过溶胀法将染料包埋到微球内部；
[0009](2)
毒性较大：制备过程中需要毒性较大的溶胀剂如石油醚
、
二氯甲烷
、
四氢呋喃等有机溶剂，此类溶剂易于挥发，造成环境污染，且有害身体健康
。

技术实现思路

[0010]本专利技术的目的在于提供一种一步法制备彩色时间分辨荧光微球的方法，采用分散聚合法，在乙醇
/
水体系中，首先生成稀土离子，再由引发剂引发单体聚合，聚合过程中将染料包埋进微球内部，无染料泄露，一步合成彩色时间分辨荧光微球
。
该方法操作简单，不使用溶胀剂如石油醚
、
二氯甲烷
、
四氢呋喃等有机溶剂，制备出来的彩色时间分辨荧光微球粒径均一
、
分散性好，颜色鲜艳，荧光强度强，无染料泄露
。
[0011]为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
[0012]一步法制备彩色时间分辨荧光微球的方法，具体为：将三口烧瓶中的乙醇和水的混合溶液通氮气置换空气，再向体系中加入分散剂和氯化铕搅拌溶解，缓慢加入稀土配体
1,10
‑
菲罗啉和2‑
二甲基氨基苯甲酸乙酯的醇溶液，用
NaOH
调整溶液的
pH
至6‑8，再将溶有引发剂和染料的苯乙烯和功能性单体加入反应体系中，
60
‑
80℃
反应6‑
16h
，制得单分散彩色时间分辨荧光微球
。
[0013]其中，所述功能性单体为
α
‑
甲基丙烯酸
。
[0014]其中，所述引发剂为偶氮二异丁腈
。
[0015]其中，所述分散剂为聚乙烯吡咯烷酮
。
[0016]其中，所述彩色时间分辨荧光微球的功能基团包括但不局限于羧基
、
氨基
、
羟基或醛基
。
[0017]其中，所述彩色时间分辨荧光微球的粒径在
100
‑
1000nm
之间，
PDI<0.05。
[0018]其中，所用染料为油溶性染料，包括偶氮类
、
蒽醌类染料
。
[0019]进一步的，所用染料包括但不局限于苏丹红
、
苏丹黑
、
分散红或溶剂红
。
[0020]其中，所述苯乙烯单体与染料的重量比为
1:0.1
‑
1。
[0021]其中，所述纯水与乙醇的体积比为1：3‑
20。
[0022]时间分辨荧光微球所包埋的稀土离子，可在乙醇
/
水体系中制备而成，且产率高，合成时间短，约
30min
产物即可形成；而分散聚合制备聚苯乙烯微球的分散介质亦可是乙醇
/
水，且微球形成过程时间较长，分为三个阶段：第一阶段为反应初期的成核期；第二阶段为粒子的增长期；第三阶段中，当单体转化率达
90
％以上时，由于玻璃化效应，分散聚合动力学曲线迅速趋于一水平线
。
整个反应过程时间一般为6‑
24h。
因此，在整个反应体系中，首先生成稀土离子配合物，再由引发剂引发单体聚合，聚合过程中将染料包埋进微球内部，无染料泄露
。
[0023]与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：
[0024](1)
本专利技术方法的操作步骤简单：通过分散聚合法，一步合成彩色时间分辨荧光微球，操作步骤简单，易于处理，提升了效率
。
[0025](2)
无染料泄露：聚合过程中将脂溶性染料及稀土离子包埋进微球内部，染料不易泄露
。
[0026](3)
绿色环保：制备过程中介质为乙醇和水，不使用毒性较大的有机溶剂如石油醚
、
二氯甲烷
、
四氢呋喃等，这类溶剂极易挥发，容易造成环境污染，且有害身体健康
。
[0027](4)
本专利技术制得的彩色时间分辨荧光微球的性能稳定，尺寸均一，粒径可控
。
附图说明
[0028]图1为实施例1的自然光
(
左
)
和
365nm
紫外光激发
(
右
)
的彩色时间分辨荧光微球照片
。
[0029]图2为对比例1的自然光...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一步法制备彩色时间分辨荧光微球的方法，其特征在于：将三口烧瓶中的乙醇和水的混合溶液通氮气置换空气，再向体系中加入分散剂和氯化铕搅拌溶解，缓慢加入稀土配体
1,10
‑
菲罗啉和2‑
二甲基氨基苯甲酸乙酯的醇溶液，用
NaOH
调整溶液的
pH
至6‑8，再将溶有引发剂和染料的苯乙烯和功能性单体加入反应体系中，
60
‑
80℃
反应6‑
16h
，制得单分散彩色时间分辨荧光微球
。2.
根据权利要求1所述的一步法制备彩色时间分辨荧光微球的方法，其特征在于：所述功能性单体为
α
‑
甲基丙烯酸
。3.
根据权利要求1所述的一步法制备彩色时间分辨荧光微球的方法，其特征在于：所述引发剂为偶氮二异丁腈
。4.
根据权利要求1所述的一步法制备彩色时间分辨荧光微球的方法，其特征在于：所述分散剂为聚乙烯吡咯烷酮
。5.
根据权利要求1所述的一步法制备彩色时间分辨荧光微球的方法，其特...

【专利技术属性】
技术研发人员：张玉基，陈贝贝，王鹏，
申请(专利权)人：南京立顶医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：