一种制造技术

本发明专利技术属于免疫分析技术领域，具体涉及一种

【技术实现步骤摘要】
一种vWF片段残留检测试剂盒及方法


[0001]本专利技术属于免疫分析
，具体涉及一种
vWF
片段残留检测试剂盒及方法
。

技术介绍

[0002]A
型血友病是一种遗传性出血疾病，由凝血因子
VIII(FVIII)
的缺乏或完全缺失引起
。
这种疾病的特点是反复出血，主要在肌肉和关节，可发展为衰弱性关节病
。
严重
A
型血友病的定义为
FVIII<1%
，可导致损伤后频繁的自发性或过度出血
。
在中度和轻度
A
型血友病患者中，出血症状通常与损伤和手术相关
。
[0003]A
型血友病的主要治疗方法是使用血浆或重组人凝血因子
VIII
（
phFVIII
或
rhFVIII
）浓缩物为基础的替代疗法
。phFVIII
是人血浆经分离纯化获得，由于受到原料的产能限制及潜在的病毒感染风险等因素的影响，
rhFVIII
正逐渐取代
phFVIII
成为替代疗法的首选药物
。
然而，由于结构复杂，分子量巨大，
rhFVIII
的单位产量低下，导致价格昂贵，阻碍了
A
型血友病的治疗与预防
。
[0004]为克服上述困难，庄亚（北京）生物科技有限公司专利技术了
rhFVIII
共表达载体技术：血管性血友病因子片段和八因子的共表达载体（授权公告号，
CN 111440820 B
）
。
通过在工程细胞中使用同一个表达载体共表达截短型血管性血友病因子（
vWF
‑
D
’
D3
片段）与重组人凝血因子
VIII
（
rhFVIII
），优化了重组凝血因子
VIII
的代谢，大大提高了
rhFVIII
在工程细胞中的单位产量及稳定性
。
为制备高纯度的
rhFVIII
，与
rhFVIII
共表达的截短型血管性血友病因子需要通过层析方法从
vWF
‑
D
’
D3
片段
/FVIII
复合物中分离并去除
。
为检测残留的
vWF
‑
D
’
D3
片段含量是否达到要求，需要开发针对该残留物的检测方法
。

技术实现思路

[0005]为了解决上述问题，本专利技术提供了一种检测
vWF
‑
D
’
D3
残留的试剂盒及方法，所述的方法能够检测通过专利
CN 111440820 B
制备的
FVIII
蛋白中的
vWF
‑
D
’
D3
含量，该方法具有良好的专属性
、
准确度
、
精密度
、
定量限
、
线性和范围
。
[0006]术语：本专利技术中，捕获抗体是特异性结合待测物质的抗体，用以捕获和固定待测物质
。
[0007]本专利技术中，检测抗体是与待测物质结合的抗体，用于检测待测物质的存在
。
其结合位点需要有别于待测物质与捕获抗体结合的位点
。
[0008]一方面，本专利技术提供了一种检测
vWF
片段的试剂盒，所述的试剂盒包括捕获抗体和检测抗体；所述的捕获抗体为
15B11A8
，包括重链和轻链，所述的重链包括重链可变区，所述的轻链包括轻链可变区；所述的重链可变区包括
HCDR1、HCDR2
和
HCDR3
，所述的轻链可变区包括
LCDR1、LCDR2
和
LCDR3
，其中：（1）
HCDR1
为
SEQ ID NO.1
所示的氨基酸序列；（2）
HCDR2
为
SEQ ID NO.2
所示的氨基酸序列；
（3）
HCDR3
为
SEQ ID NO.3
所示的氨基酸序列；（4）
LCDR1
为
SEQ ID NO.4
所示的氨基酸序列；（5）
LCDR2
的氨基酸序列为
KVS
；（6）
LCDR3
为
SEQ ID NO.5
所示的氨基酸序列；所述的检测抗体为
5D4A10
，包括重链和轻链，所述的重链包括重链可变区，所述的轻链包括轻链可变区；所述的重链可变区包括
HCDR1、HCDR2
和
HCDR3
，所述的轻链可变区包括
LCDR1、LCDR2
和
LCDR3
，其中：（1）
HCDR1
为
SEQ ID NO.6
所示的氨基酸序列；（2）
HCDR2
为
SEQ ID NO.7
所示的氨基酸序列；（3）
HCDR3
为
SEQ ID NO.8
所示的氨基酸序列；（4）
LCDR1
为
SEQ ID NO.9
所示的氨基酸序列；（5）
LCDR2
的氨基酸序列为
EAN
；（6）
LCDR3
为
SEQ ID NO.10
所示的氨基酸序列
。
[0009]具体的，所述的捕获抗体
15B11A8
重链可变区的氨基酸序列为
SEQ ID NO.11
或与
SEQ ID NO.11
具有
80%
以上序列相似性的序列；所述的捕获抗体
15B11A8
轻链可变区的氨基酸序列为
SEQ ID NO.12
或与
SEQ ID NO.12
具有
80%
以上序列相似性的序列；所述的检测抗体
5D4A10
，重链可变区的氨基酸序列为
SEQ ID NO.13
或与
SEQ ID NO.13
具有
80%
以上序列相似性的序列；所述的检测抗体
5D4A10
，轻链可变区的氨基酸序列为
SEQ ID NO.14
或与
SEQ ID NO.14
具有
80%
以上序列相似性的序列；具体地，所述的捕获抗体
15B11本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种检测
vWF
片段残留的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒包括捕获抗体和检测抗体；所述的捕获抗体为
15B11A8
，包括重链和轻链，所述的重链包括重链可变区，所述的轻链包括轻链可变区；所述的重链可变区包括
HCDR1、HCDR2
和
HCDR3
，所述的轻链可变区包括
LCDR1、LCDR2
和
LCDR3
，其中：（1）
HCDR1
为
SEQ ID NO.1
所示的氨基酸序列；（2）
HCDR2
为
SEQ ID NO.2
所示的氨基酸序列；（3）
HCDR3
为
SEQ ID NO.3
所示的氨基酸序列；（4）
LCDR1
为
SEQ ID NO.4
所示的氨基酸序列；（5）
LCDR2
的氨基酸序列为
KVS
；（6）
LCDR3
为
SEQ ID NO.5
所示的氨基酸序列；所述的检测抗体为
5D4A10
，包括重链和轻链，所述的重链包括重链可变区，所述的轻链包括轻链可变区；所述的重链可变区包括
HCDR1、HCDR2
和
HCDR3
，所述的轻链可变区包括
LCDR1、LCDR2
和
LCDR3
，其中：（1）
HCDR1
为
SEQ ID NO.6
所示的氨基酸序列；（2）
HCDR2
为
SEQ ID NO.7
所示的氨基酸序列；（3）
HCDR3
为
SEQ ID NO.8
所示的氨基酸序列；（4）
LCDR1
为
SEQ ID NO.9
所示的氨基酸序列；（5）
LCDR2
的氨基酸序列为
EAN
；（6）
LCDR3
为
SEQ ID NO.10
所示...

【专利技术属性】
技术研发人员：李齐，刘旭，李倩卉，程屏，王立豪，王志军，
申请(专利权)人：庄亚北京生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：