【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种抗trem样转录因子1抗体及其制备的抗肿瘤药物，属于免疫治疗。
技术介绍
1、肿瘤微环境是指肿瘤周围由血管、血细胞(红细胞，白细胞及血小板)、基质细胞(成纤维细胞，胞外基质)组成的微小环境，其与肿瘤紧密互动，促进肿瘤的生长与发展。针对免疫检查点(ctla-4及pd-1)的阻断剂是最早开发的针对肿瘤微环境的癌症治疗方法。部分病人对免疫检查点的阻断治疗反应良好，疗效显著，然而问题是大部分病人都对该疗法不敏感。近年来对其他肿瘤微环境靶点的研究越来越受到重视，但是由于肿瘤微环境的复杂性与多样性，进展不大(rodrigues et al.,int.j.mol.sci.2019,20,840；bejarano etal.,cancer discovery 2021,11,933)。
2、近来，血小板在肿瘤微环境中所起的作用得到了广泛的研究，包括实体瘤及转移瘤。血小板在血液循环中是占比第二大的血液成分，血小板的增多与各种肿瘤的不良预后关系密切。肿瘤引起的血栓是临床上癌症病人致死的第二主要原因，其原因在于肿瘤可激活血小板从而诱发血栓形成。对于原位瘤，血小板与其他成分是通过肿瘤组织内的血管渗透到肿瘤微环境中的。对于循环中的肿瘤细胞，血小板与肿瘤细胞的结合主要是通过细胞表面蛋白与血小板表面受体的直接结合方式来完成的，比如clec-2/podoplanin,p-selectin/psgl-1,以及纤维蛋白通过αiiβiii/αvβ3介导的结合(palacios-acedo et al.,frontiers inimmun
3、已上市的某些抗肿瘤药物被认为是与血小板相关或通过血小板达到药效，但它们往往不能完全消除肿瘤。阿司匹林被认为对某些癌症有一定疗效，如结直肠癌和乳腺癌(cao et al.,2016,jamaoncology,volume 2,pp.762-769；lie etal,2021,medicine,volume 100,e26870)，但也仅此而已。其他通过靶向血小板的抗肿瘤药物少之又少。
4、确定能够有效地攻击和杀死肿瘤的分子有效载荷是设计有希望展示治疗效果的靶向结构的关键。虽然数百种分子有效载荷以及针对肿瘤或免疫细胞的靶点已被发现，并设计了许多简单巧妙的策略(zhao et al.,2020,cell,volume 181,pp.151-167)，但其中很少是采用血小板作为肿瘤微环境中的靶点。
5、一类靶向药物的有效载荷是由毒性分子组成，这些分子通常来自美登素类化合物、奥瑞他汀类/海兔毒素、卡奇霉素、微囊藻素和蓝藻毒素等。当这些类型的分子附着在抗体上时，它们被称为抗体药物偶联物或adc。由于他们作为独立的分子毒性剧烈且半衰期较短，这些分子与靶向肿瘤细胞特定蛋白的抗体结合已被制成偶联物；其中一些已经进一步发展到临床(johanssen et al.,2017,scientific reports,volume 7,articleno.15920)。不幸的是，每个肿瘤或每种类型的肿瘤其细胞表面表达分子不同，这使得预测靶向抗体的性质变得困难。例如，乳腺癌通常使用针对her-2/neu受体的抗体，但这种受体仅存在于约30％的乳腺癌中。因此需要制备大量不同的偶联物以覆盖乳腺癌和其他肿瘤上存在的大量不同受体或受体组合，特别是在无法识别单个靶点的情况下。由于肿瘤的异质性和它们表达蛋白质的多样性，这种设想似乎不切实际。
6、白细胞介素-2已经作为一种独立药物(/aldesleukin)用于治疗转移性黑色素瘤和转移性肾癌；然而，系统性地使用会产生相当大的副作用。由于il-2与各种α、β和γ受体亚基结合的复杂性，人们已经投入了大量精力来制备各种il-2的变体，以便找出对淋巴细胞激活和生物功能产生有益影响的il-2分子(mitra et al.,2015,immunity,volume 42,pp.826-838)。也有人(waldhaueret al.,mabs,volume 13,articleno.e1913791)尝试将il-2融合到抗肿瘤抗原的抗体上来减少非靶向带来的副作用。但如前所述(vide supra)，由于肿瘤抗原的复杂性和多样性，这种方法面临相当大的困难。因此提出本专利技术。
技术实现思路
1、为解决上述问题，本专利技术发现血小板在肿瘤微环境中的持续激活为分子靶向提供了完美的环境，从而聚焦于分子有效载荷的应用，将他们特定的运输至肿瘤微环境，并通过单域抗体(sdab)或基于单域抗体的重链抗体(hcabs)与活化血小板上tlt-1蛋白的高亲和力定向于肿瘤微环境中激活的血小板。本专利技术以trem(髓系细胞触发受体)样转录因子-1(tlt-1)分子为靶点，其只在血小板被激活剂(如凝血酶)激活后从血小板α-颗粒中释放出来，而在静息血小板中以未激活的形式存在，并且不具有与其他蛋白质(如gpiibiiia和其他整合素)形成异二聚体的潜力，突破了现有技术无法提供不同肿瘤治疗方法的限制。
2、本专利技术的第一个目的是提供一种抗肿瘤药物，所述肿瘤治疗药物包括抗trem样转录因子1抗体(抗tlt-1抗体)。
3、进一步地，所述抗肿瘤药物为抗体偶联物或融合蛋白，包括抗trem样转录因子1抗体以及与其共价连接的有效载荷(药物)，所述有效载荷具有抑制肿瘤生长功能。
4、进一步地，所述抗trem样转录因子1抗体可以是抗体或其抗原结合片段。例如，抗tlt-1抗体包括全长抗体、单克隆抗体、双特异性单克隆抗体、fab、fv(单体、二聚体、三聚体等)、重链抗体(hcab)、单结构域抗体(sdab)、基于sdab的构建的重链的抗体(hcab)或二价/三价sdab(通过连接两个或三个sdab来实现)等。
5、本专利技术中，血小板在肿瘤微环境中的持续活化为针对活化血小板上的tlt-1蛋白的高亲和力抗体的分子靶向提供了极好的环境，特别是对于实体瘤，单域抗体的优异组织穿透特征对杀伤肿瘤至关重要。
6、图2展示了可用于构建抗体-药物偶联物的含有三个主要亚基的连接体。第一个亚基是附着单元，适合在还原的链间二硫键处与抗体偶联。第二个亚基是一个释放单元，它是一个可切割的蛋白酶敏感val-cit二肽单元，一旦adc到达其在微环境中的预期目标，就会释放出有效的细胞毒性弹头。第三个亚基是pab间隔单元，用于调节有效载荷(mmae)释放或与抗体的距离。
7、偶联物将诸如抗肿瘤剂(例如mmae)的有效载荷引导到单一类型的分子，比如tlt-1，该分子仅在原发性肿瘤及转移瘤微环境中的活化血小板的表面表达。由于肿瘤细胞与血小板结合紧密，因此与tlt-1结合的抗体偶联物在蛋白酶的作用下可以将具有细胞毒性的有效载荷释放至t本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种抗肿瘤药物，其特征在于，所述肿瘤治疗药物包括抗TREM样转录因子1抗体。
2.根据权利要求1所述的抗肿瘤药物，其特征在于，所述抗肿瘤药物为抗体偶联物或融合蛋白，包括抗TREM样转录因子1抗体以及与其共价连接的有效载荷，所述有效载荷具有抑制肿瘤生长功能。
3.根据权利要求2所述的抗肿瘤药物，其特征在于，所述有效载荷包括抗肿瘤分子、抗有丝分裂分子、转录或翻译抑制剂或细胞因子中的一种或几种。
4.根据权利要求2所述的抗肿瘤药物，其特征在于，通过连接体进行共价连接，且连接体上含有蛋白酶切割位点或含有多肽接头。
5.根据权利要求4所述的抗肿瘤药物，其特征在于，蛋白酶包括组织蛋白酶B、基质金属蛋白酶-2、基质金属蛋白酶-9、豆类蛋白酶、二肽基蛋白酶4、前列腺特异性抗原、肾素、纳普辛A或颗粒酶B。
6.一种识别小鼠和/或人TREM样转录因子1的单域抗体，其特征在于，包括以下任一种：
7.包含权利要求6所述单域抗体的重链抗体。
8.编码权利要求6所述的单域抗体或权利要求7所述重链抗体的核苷酸序列。
...【技术特征摘要】
1.一种抗肿瘤药物，其特征在于，所述肿瘤治疗药物包括抗trem样转录因子1抗体。
2.根据权利要求1所述的抗肿瘤药物，其特征在于，所述抗肿瘤药物为抗体偶联物或融合蛋白，包括抗trem样转录因子1抗体以及与其共价连接的有效载荷，所述有效载荷具有抑制肿瘤生长功能。
3.根据权利要求2所述的抗肿瘤药物，其特征在于，所述有效载荷包括抗肿瘤分子、抗有丝分裂分子、转录或翻译抑制剂或细胞因子中的一种或几种。
4.根据权利要求2所述的抗肿瘤药物，其特征在于，通过连接体进行共价连接，且连接体上含有蛋白酶切割位点或含有多肽接头。
5.根据权利要求4所述的抗...
【专利技术属性】
技术研发人员：李齐，邹骅飞，
申请(专利权)人：庄亚北京生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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