抗肿瘤通关藤醇及其高纯度制备方法技术

一种抗肿瘤通关藤醇及其高纯度制备方法，通过将通关藤水煎煮后大孔树脂、硅胶柱层析、HPLC制备分离后，从通关藤中同时制备3种高纯度、具有显著抗肿瘤作用的通关藤醇A(tenacissimol A)、通关藤醇B(tenacissimol B)、通关藤醇C(tenacissimol C)，能够用于通关藤药材的质量评价，以及抗肿瘤药物的制备；本发明专利技术具有简便、快速、纯度高、生产成本低等优点。点。点。

【技术实现步骤摘要】
抗肿瘤通关藤醇及其高纯度制备方法


[0001]本专利技术涉及的是一种生物医药领域的技术，具体是一种抗肿瘤通关藤醇及其高纯度制备方法。

技术介绍

[0002]通关藤又名通关散、通光藤、乌骨藤、奶浆藤、通天散、龙爪草、下奶藤，为萝藦科植物通关藤Marsdenia tenacissima(Roxb.)Wight et Arn.的干燥藤茎。通关藤为常用中药，始载于《滇南本草》，历史悠久，具有止咳平喘，祛痰，通乳，清热解毒等功效，常用于治疗喘咳痰多，产后乳汁不通，风湿肿痛，疮痈等，应用广泛。现代研究发现通关藤具有显著的抗肿瘤作用，用于治疗原发性肝癌、食管癌和胃癌，亦用于肺癌等肿瘤，效果肯定。

技术实现思路

[0003]本专利技术针对现有提取技术所得成分均为皂苷类成分、得率较低的不足，提出一种抗肿瘤通关藤醇及其高纯度制备方法。通过将通关藤水煎煮后大孔树脂、硅胶柱层析、HPLC制备分离后，从通关藤中同时制备3种高纯度、具有显著抗肿瘤作用的通关藤醇A(tenacissimol A)、通关藤醇B(tenacissimol B)、通关藤醇C(tenacissimol C)，能够用于通关藤药材的质量评价，以及抗肿瘤药物的制备。该方法具有简便、快速、纯度高、生产成本低等优点。
[0004]本专利技术是通过以下技术方案实现的：
[0005]本专利技术涉及一类通关藤醇类化合物，包括：通关藤醇A(tenacissimol A)、通关藤醇B(tenacissimol B)、通关藤醇C(tenacissimol C)，其化学结构如下所示：
[0006][0007]本专利技术涉及上述通关藤醇类化合物的应用，将其用于制备抗肿瘤药物或用于通关藤药材的鉴定。
[0008]本专利技术涉及上述通关藤醇类化合物的提取方法，通过将萝藦科植物通关藤Marsdenia tenacissima(Roxb.)Wight et Arn.的干燥藤茎水煎煮，水煎液离心、经大孔树脂柱层析后，再经硅胶柱层析、HPLC制备分离后分别收集三个主要色谱峰，即得通关藤醇A精制品、通关藤醇B精制品和通关藤醇C精制品。
[0009]所述的大孔树脂柱层析，采用D101型大孔树脂，乙醇溶液作为洗脱剂。
[0010]所述的硅胶柱层析，均通过TLC检测并合并主斑点R
f
为0.2～0.5的流份，以二氯甲烷
‑
甲醇的混合液为展开剂。
[0011]所述的提取方法，具体包括：将通关藤粉碎，水煎煮，水煎液经D101大孔树脂柱层
析，先用60％乙醇洗脱除杂，然后95％乙醇洗脱，收集95％乙醇洗脱液，减压回收溶剂得通关藤醇浸膏；通关藤醇浸膏进行硅胶柱层析，二氯甲烷洗脱，回收二氯甲烷，弃去提取物；然后二氯甲烷
‑
甲醇梯度洗脱，收集洗脱液后进行TLC检测，合并主斑点相同(R
f
0.2～0.5)的流份，减压回收溶剂，得通关藤醇粗品。将通关藤醇粗品进行HPLC制备分离，分别收集三个主峰并回收溶剂，即得通关藤醇A、通关藤醇B、通关藤醇C精制品。
[0012]所述的水煎煮，水的用量与药材质量的比例为10:1～20:1，煎煮时间为0.5～1小时，煎煮次数为1～2次。
[0013]所述的大孔树脂柱层析，大孔树脂型号为D101，用量为药材质量的1～2倍。除杂质洗脱剂为60％乙醇；然后用95％乙醇洗脱，洗脱剂用量为3～5倍BV(柱体积)。
[0014]所述的硅胶柱层析硅胶粒径为200～300目，样量比为1:60～1:100(样品比硅胶，w/w)。所述二氯甲烷洗脱除质方法为先用二氯甲烷洗脱4～6BV，回收二氯甲烷，弃去洗脱物。所述梯度洗脱为二氯甲烷
‑
甲醇比例为39：1、19：1(v/v)，每个梯度洗脱4～6BV，流速1BV/h，0.25BV/流份。收集洗脱液后进行TLC检测，合并主斑点Rf0.2～0.5的流份，减压回收溶剂，得通关藤醇粗品。
[0015]所述的HPLC制备分离，所用色谱柱为C
18
柱(250*20mm，5μm)，流动相为乙腈
‑
水，梯度洗脱30min(7:13～9:1，v/v)；流速为8.0ml/min；DAD检测，分别先后收集2个最大吸收波长为240nm(通关藤醇A、通关藤醇C)、以及1个最大吸收波长为210nm(通关藤醇B)的主峰，回收溶剂即得通关藤醇精制品。
附图说明
[0016]图1为通关藤醇A的
13
C
‑
NMR图(C5D5N,150MHz)；
[0017]图2为通关藤醇B的
13
C
‑
NMR图(C5D5N,150MHz)；
[0018]图3为通关藤醇C的
13
C
‑
NMR图(C5D5N,150MHz)。
具体实施方式
实施例1
[0019]本实施例是在以下实施条件和技术要求条件下实施的：
[0020]1.通关藤1kg，加入15L水煎煮1h，提取液离心，进行大孔树脂(1kg)柱层析，60％乙醇洗脱3BV，除去杂质；95％乙醇洗脱3BV，回收乙醇得通关藤醇浸膏(4.5g)。
[0021]2.取上述通关藤醇浸膏进行硅胶柱层析(270g硅胶)，二氯甲烷洗脱6BV洗脱，回收二氯甲烷，弃去提取物。用二氯甲烷
‑
甲醇梯度洗脱(每个梯度洗脱6个BV)，收集洗脱液。TLC检测，合并主斑点在0.2～0.5的流份，回收溶剂得通关藤醇粗品(331mg)。3.将通关藤醇粗品进行HPLC分离，分别收集三个主要色谱峰，即得通关藤醇A精制品19mg(纯度95.6％，HPLC法)、通关藤醇B精制品23mg(纯度为97.2％，HPLC法)、通关藤醇C精制品15mg(纯度为96.7％，HPLC法)。
[0022]所得成分物理性质及波谱数据如下：
[0023]通关藤醇A：白色粉末；1H、
13
C
‑
NMR：见表1；HR
‑
ESI
‑
MS m/z：429.2643([M+H]+
，C
26
H
37
O5，计算值429.2641)。
[0024]通关藤醇B：白色粉末；1H、
13
C
‑
NMR：见表1；HR
‑
ESI
‑
MS m/z：349.2417([M+H]+
，C
21
H
33
O4，计算值349.2379)。
[0025]通关藤醇C：白色粉末；1H、
13
C
‑
NMR：见表1；HR
‑
ESI
‑
MS m/z：347.2205([M+H]+
，C
21
H
31
O4，计算值347.2222)。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一类通关藤醇类化合物，其特征在于，包括通关藤醇A、通关藤醇B、通关藤醇C，其化学结构如下所示：2.一种根据权利要求1所述的通关藤醇类化合物的应用，其特征在于，用于制备抗肿瘤药物。3.根据权利要求2所述的应用，其特征是，所述的肿瘤，包括人肺癌细胞A549和人肝癌细胞Bel
‑
7402。4.一种根据权利要求1所述的通关藤醇类化合物的应用，其特征在于，用于鉴定通关藤药材。5.一种根据权利要求1中所述的通关藤醇类化合物的提取方法，其特征在于，通过将通关藤的干燥藤茎水煎煮并将得到的水煎液离心并经大孔树脂柱层析后，经硅胶柱层析、HPLC制备分离后分别收集三个主要色谱峰，即得通关藤醇A精制品、通关藤醇B精制品和通关藤醇C精制品。6.根据权利要求5所述的通关藤醇类化合物的提取方法，其特征是，所述的大孔树脂柱层析是指：将水煎液经用量为药材质量的1～2倍的D101大孔树脂柱层析后，用60％乙醇洗脱3～5BV，除去水溶性杂质；再用95％乙醇洗脱3～5BV，收集95％乙醇洗脱液，减压回收溶剂得通关藤醇浸膏。7.根据权利要求6所述的通关藤醇类化合物的提取方法，其特...

【专利技术属性】
技术研发人员：韩永龙，王梦月，李晓波，陈君君，周阳云，张科之，吴子薇，朱琴芳，孟昭阳，孟晶晶，向丹凤，韩忻云，
申请(专利权)人：上海市第六人民医院，
类型：发明
国别省市：