iNKT制造技术

本发明专利技术提出了

【技术实现步骤摘要】
iNKT细胞的体外扩增方法及其应用


[0001]本专利技术涉及生物领域，具体地，本专利技术涉及一种
iNKT
细胞的体外培养基组合及其扩增方法
。

技术介绍

[0002]恒定自然杀伤
T
细胞
(iNKT
细胞，
invariant natural killer T cells)
，又被称为
I
型
NKT
细胞，是一类具有特殊免疫特性的
T
淋巴细胞亚群
。
与传统的
T
细胞不同，
iNKT
细胞得名于它们的高度保守特定
T
细胞受体
(TCR)
结构，这种
TCR
可以识别由
MHC
‑
I
分子类似物
CD1d
分子所递呈的脂类和糖脂抗原
。
这些抗原通常由许多病原体和肿瘤细胞表面表达，因此
iNKT
细胞可以对上述非正常细胞进行特异性识别和杀伤
。iNKT
细胞具有既能通过
TCR
识别脂质抗原，又能迅速响应刺激的特点，结合了先天免疫和适应性免疫的特征，
iNKT
细胞在免疫应答中起着重要的调节作用
。
此外，它们能够迅速产生大量的细胞因子，如干扰素
γ
(IFN
‑
γ
)
以及其他免疫调节分子
。
这些分子的释放可以激活和调节其他免疫细胞，如
B
细胞和其他
T
细胞，增强免疫应答
。iNKT
细胞也可以直接杀伤肿瘤细胞，并参与抗肿瘤免疫应答
。
另一方面，与常规
T
细胞不同，
iNKT
细胞不介导移植物抗宿主反应
(GvHD
移植物抗宿主反应是一种异体骨髓或免疫细胞移植产生的并发症
)
，适合用于异体免疫细胞治疗产品的开发
。
结合以上特点，
iNKT
细胞在肿瘤与自身免疫性疾病治疗领域中均具有广泛的应用前景
。
[0003]尽管
iNKT
细胞具有潜在的治疗应用，但
iNKT
细胞的临床转化目前还存在一些限制尚待解决，其中最主要的问题在于如何获得足够数量的
iNKT
细胞来发挥体内临床疗效
。iNKT
细胞在人血液中的数目相当少，通常仅占所有淋巴细胞的
0.1
％左右
。
因此，相比于
T
细胞或
NK
细胞疗法，想获取足够数量的
iNKT
细胞具有较高的挑战性
。iNKT
细胞的活化与扩增需要合适的抗原或激活剂，传统
iNKT
细胞扩增方法通常需要在培养过程中与抗原递呈细胞
(APC)
，例如：淋巴细胞
、
树突状细胞
、
单核细胞，或稳定表达
CD1d
分子的肿瘤细胞株
(
如：
C1R、K562
细胞等
)
共培养，并添加
α
‑
半乳糖神经酰胺
(
α
‑
GalCer)
为代表的脂类抗原分子作为
iNKT
细胞的
TCR
抗原，来使得
iNKT
细胞得到充分的激活而扩增，不仅生产工艺复杂
、
成本较高且扩增效果有限，影响
iNKT
细胞的转化应用前景
。
[0004]因此，考虑到临床治疗的需求和用量，有必要提供一种无
APC、
无
α
‑
GalCer
或其衍生物
、
无血清
、
无人源
、
无动物源成分的培养体系，且操作简单的高效
iNKT
细胞激活和扩增方法
。

技术实现思路

[0005]本专利技术旨在至少在一定程度上解决现有技术中存在的技术问题至少之一
。
[0006]专利技术人在研究过程中发现前期已公开的
iNKT
细胞扩增方法所达到的细胞扩增倍数普遍不高，绝大多数仅有百倍至千倍水平
。
然而，由于
iNKT
细胞在人血液中的数目及占比均相当稀少，细胞扩增倍数不足将会严重限制后续的细胞临床应用与转化前景，因此细胞扩增倍数还需进一步提升
。
[0007]此外，目前已报道的
iNKT
细胞扩增方法经常需要添加人或其他动物的血液成分
(
如：血清和血浆等
)
，会导致细胞培养过程中存在外源因子污染风险；还有一些已报道方法经常需要添加
APC
来对
iNKT
细胞进行激活及扩增，常用的
APC
包含人原代细胞来源
APC(
如：外周血单个核细胞
、
树突状细胞
、
单核细胞
)
和工程化人肿瘤细胞来源
APC(
如：
C1R、K562
细胞
)
，不仅生产工艺更为复杂，且生产成本较高；还有一些已报道方法经常需要使用
α
‑
GalCer
或其类似物作为
iNKT
细胞的激活剂，然而，上述物质在人体内的功能尚未明确且存在争议，有些文章曾报道过
α
‑
GalCer
在体内容易非特异性激活体内
iNKT
细胞进一步导致皮疹或肝脏毒性
。
因此，使用
α
‑
GalCer
或其类似物扩增
iNKT
细胞时，需在后续的临床试验中确认所残留的量不足以导致相关不良反应
。
[0008]因此，本专利技术提出了一种更加简易
、
高效
、
低风险的
iNKT
淋巴细胞的扩增激活方法
。
全程采用具有无
APC、
无
α
‑
GalCer
或其衍生物
、
无血清
、
无人源
、
无动物源成分的培养体系，
iNKT
细胞在培养
28
天之后扩增倍数可达数百万倍以上，
iNKT
细胞纯度可达
95
％以上，满足临床免疫细胞治疗的需求，具备较高的临床转化潜力
。
[0009]因此，在本专利技术的第一方面，本专利技术提出了本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种扩增
iNKT
细胞的培养基，其特征在于，包括细胞培养基和细胞因子
。2.
根据权利要求1所述的培养基，其特征在于，所述细胞培养基选自无血清
、
无人源
、
无动物源成分的细胞培养基；任选地，所述细胞培养基选自依科赛生物的
T
细胞无血清培养基或
Lonza
的
T
‑
VIVO
无血清培养基；任选地，所述细胞因子选自
IL
‑
2、IL
‑
7、IL
‑
15、IL
‑
21
和
IL
‑4的至少之一；任选地，所述细胞因子选自
IL
‑7和
IL
‑
15。3.
根据权利要求1所述的培养基，其特征在于，所述
IL
‑7在所述培养基中的终浓度为1～
100ng/mL
；优选地，所述
IL
‑7在所述培养基中的终浓度为
10ng/mL
；任选地，所述
IL
‑
15
在所述培养基中的终浓度为1～
100ng/mL
；优选地，所述
IL
‑
15
在所述培养基中的终浓度为
10ng/mL。4.
一种扩增
iNKT
细胞的方法，其特征在于，包括：将接种在培养基中的
iNKT
细胞进行激活处理，将激活处理后的所述
iNKT
细胞在所述培养基中进行扩增处理，所述培养基为权利要求1～3任一项所述的培养基
。5.
根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述激活处理是在
T
细胞激活剂存在的条件下进行的；任选地，所述
T
细胞激活剂包括抗
CD3
抗体
、CD3
结合片段
、
抗
CD28
抗体和
CD28
结合片段的至少之一；任选地，所述
T
细胞激活剂包括抗
...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈育圣，白丽，张静，
申请(专利权)人：合肥综合性国家科学中心大健康研究院，
类型：发明
国别省市：