Rab5制造技术

本发明专利技术公开了

【技术实现步骤摘要】
Rab5作为靶点在促进中枢神经轴突再生和运动功能恢复方面的应用


[0001]本专利技术属于生物医学
，具体涉及一种蛋白
Rab5
及其在促进中枢神经轴突再生和运动功能恢复方面的应用
。

技术介绍

[0002]中枢神经元的轴突损伤是生活中常见的疾病，其以神经轴突断裂为特征，常见于外力诱发的各种事故中，例如车祸
、
摔伤等
。
轴突损伤会导致运动功能的丧失，给患者的生活带来极大的不便
。
在如今的治疗水平下，轴突修复在临床上鲜有成功案例
。
主要原因是高等动物的中枢神经元的轴突在损伤后几乎不会再生，导致运动功能难以恢复
。
为此，发掘与探索中枢神经元轴突损伤后再生的分子机制，可以帮助我们了解再生的原理，有助于促进中枢神经元的轴突损伤修复
。
[0003]Rab
家族是最大的
Ras
亚家族之一，存在于所有真核生物中，而
Rab5
则在所有真核生物中都极度保守
。Rab5
在体内的主要作用是介导内体的生成以及运输
。
但尚未见关于
Rab5
与中枢神经轴突再生和运动功能恢复的关系的研究
。

技术实现思路

[0004]本专利技术要解决的问题是提供
Rab5
作为靶点在促进神经轴突再生和运动功能恢复当面的应用，体内过表达
Rab5
，可以显著的促进斑马鱼毛特纳神经元轴突的再生，为中枢神经元的轴突再生提供新的靶点
。
[0005]具体来说，本专利技术提供以下技术方案：
[0006]一方面，本专利技术提供促进
Rab5
表达的试剂在制备促进中枢神经轴突再生和运动功能恢复的药物中的用途
。
[0007]在一些实施方案中，所述试剂包括过表达
Rab5
蛋白的系统
。
[0008]在一些实施方案中，采用
GAL4/UAS
表达系统过表达
Rab5
蛋白，
GAL4
基因与
UAS
基因分别存在于两个表达载体中，所述
Rab5
蛋白的核苷酸序列与
UAS
基因连接，启动子与
GAL4
基因连接，所述
GAL4
基因与所述
UAS
基因结合后启动所述
Rab5
蛋白的表达
。
[0009]在一些实施方案中，所述启动子为
CMV
启动子
。
[0010]在一些实施方案中，所述
CMV
启动子的核苷酸序列如
SEQ ID NO:4
所示
。
[0011]在一些实施方案中，所述
GAL4
基因的核苷酸序列如
SEQ ID NO:5
所示
。
[0012]在一些实施方案中，所述
UAS
基因的核苷酸序列如
SEQ ID NO:6
所示
。
[0013]另一方面，本专利技术提供促进中枢神经轴突再生和运动功能恢复的药物组合物，其特征在于，所述组合物包含
Rab5
蛋白
。
[0014]在一些实施方案中，所述
Rab5
蛋白包含如
SEQ ID NO:1
或
SEQ ID NO:2
或
SEQ ID NO:3
所示的序列，或由其组成
。
[0015]另一方面，本专利技术提供筛选促进中枢神经轴突再生和运动功能恢复的药物的方
法，所述方法包括检测
Rab5
的表达水平
。
[0016]另一方面，本专利技术提供促进中枢神经轴突再生和运动功能恢复的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包含
Rab5
蛋白和药学上可接受的载体
。
[0017]另一方面，本专利技术提供促进
Rab5
表达的试剂或核酸构建体在制备促进受试者的中枢神经轴突再生和运动功能恢复的药物中的用途
。
[0018]另一方面，本专利技术提供促进中枢神经轴突再生和运动功能恢复的方法，其特征在于，所述方法包括向受试者施用有效量的
Rab5
蛋白或在受试者中过表达
Rab5。
[0019]在一些实施方案中，所述受试者可以是斑马鱼或人或其他哺乳动物，包括但不限于猴，猫，狗，马，兔，啮齿动物
(
例如，小鼠，大鼠，仓鼠和豚鼠
)、
牛
、
绵羊和山羊
。
[0020]本专利技术的实施例提供一种蛋白
Rab5
，其可作为中枢神经轴突损伤修复的蛋白靶点
。
[0021]本专利技术还提供
Rab5
的用途，用于制备促进神经轴突再生和运动功能恢复的药物
。
[0022]其中所述神经损伤为双光子毁损斑马鱼毛特纳神经元单侧轴突
。
[0023]本专利技术还提供
Rab5
在促进促进神经轴突再生和运动功能恢复方面的应用，包括如下验证步骤：
[0024]S1、
获取绿色荧光标记毛特纳神经元的斑马鱼，并利用单细胞电转染技术在单细胞内过表达
Rab5
，在利用双光子激光毁损其轴突后，观察其过表达促进轴突再生的情况；
[0025]S2、
利用药物处理绿色荧光标记毛特纳神经元的斑马鱼，在利用双光子激光毁损其轴突后，抑制性药物处理会阻碍
Rab5
的正常表达，观察其缺失抑制轴突再生的情况；
[0026]S3、
将前两步获得的斑马鱼收集，并在轴突毁损
48h
后拍摄其轴突再生长度，放置在行为学装置下观察轴突再生长度与运动功能恢复的关系
。
[0027]其中，步骤
S1
的具体步骤为：
[0028]S1.1、
将三条雌性
T056
品系斑马鱼与两条
WT
雄性斑马鱼分别置于同一产卵缸内，黑暗条件下过夜处理
12h。
[0029]S1.2、
早上将所有斑马鱼置于光亮场所下，并将雌雄斑马鱼混合
。
[0030]S1.3、
待斑马鱼产卵结束后回收斑马鱼，并收集产出的斑马鱼卵
。
[0031]S1.4、
将斑马鱼卵转移至玻璃大皿中，并挑去未受精与死亡的鱼卵，置于光亮培养箱中
24h。
[0032]S1.5、
取出斑马鱼卵，换水并挑去死卵，加入适量
PTU
以抑制色素的生成
。
置于培养箱中
24h。
[0033]本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
促进
Rab5
表达的试剂在制备促进中枢神经轴突再生和运动功能恢复的药物中的用途
。2.
根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述试剂包括过表达
Rab5
蛋白的系统
。3.
根据权利要求2所述的用途，其特征在于，采用
GAL4/UAS
表达系统过表达
Rab5
蛋白，
GAL4
基因与
UAS
基因分别存在于两个表达载体中，所述
Rab5
蛋白的核苷酸序列与
UAS
基因连接，启动子与
GAL4
基因连接，所述
GAL4
基因与所述
UAS
基因结合后启动所述
Rab5
蛋白的表达
。4.
根据权利要求3所述的用途，其特征在于，所述启动子为
CMV
启动子
。5.
根据权利要求4所述的用途，其特征在于，所述
CMV
启动子的核苷酸序列如
SEQ ID NO:4
所示...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡兵，崔剑涛，宋政，
申请(专利权)人：合肥综合性国家科学中心大健康研究院，
类型：发明
国别省市：