一种烟曲霉真菌制造技术

本发明专利技术涉及一种烟曲霉真菌

【技术实现步骤摘要】
一种烟曲霉真菌KLZNF17及其发酵产物与抗菌应用


[0001]本专利技术属于微生物次级代谢产物领域，具体涉及一种烟曲霉真菌
KLZNF17
及其发酵产物与抗菌应用
。

技术介绍

[0002]细菌生物膜
(Bacterial biofilm,BBF)
，以下简称“生物膜”，是指附着于有生命或无生命物体表面包裹在由细菌自身分泌的细胞外基质中的具有三维组织结构的细菌群体，被认为是造成耐药菌耐药性增强及感染难以治愈的重要原因之一
。
针对生物膜目前尚无特效药物，寻找满足临床需要的新型抗菌
、
抗生物膜活性成分成为迫切需要
。
随着人们对普通环境微生物的反复研究，从该类资源中找到新型抗菌
、
抗生物膜活性化合物愈发困难
。
因此，越来越多的研究者开始将抗生素药源研发聚焦于研究相对较少的特殊生态环境
(
以下简称“特境”)
中的微生物，尤其是从特境微生物中发掘抗生素活性成分
。
目前特境微生物抗生素活性天然药物研究主要集中于海洋生境
、
红树林湿地以及昆虫肠道等，而高海拔微生物的研究相对较少
。
滇西北黄芪属植物生长于高寒环境中，其根际微生物更具抗逆性，在进化过程中可能会产生特殊的活性物质
。
本专利技术对采集自云南省迪庆藏族自治州香格里拉市南部小中甸镇
(
海拔
3 225m)
的中甸黄芪植物根际微生物进行研究，利用宏基因组测序技术与传统微生物纯培养法对中甸黄芪植物根际微生物物种多样性进行探究，并利用
HPLC、UPLC
‑
MS
对菌株次生代谢产物进行化学多样性筛选，结合“微量肉汤稀释法”、“孔板法”等进行抗菌
、
抗生物膜活性筛选，获得了一种可生产抗生物膜活性物质的曲霉属真菌
。

技术实现思路

[0003]本专利技术提供一种曲霉属真菌
KLZNF17
，其特征在于所述曲霉属真菌
KLZNF17
的菌种保藏信息如下：保藏单位名称：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所；保藏日期：
2023
年6月
30
日；保藏编号：
CGMCC No.40717
；分类命名：烟草色曲霉
Aspergillus tabacinus。
[0004]本专利技术的另一实施方案提供一种上述曲霉属真菌
KLZNF17
的粗提物，其特征在于所述粗提物的制备方法包括如下步骤：
[0005](1)
将上述曲霉属真菌
KLZNF17
接种至
PDB
培养基中，
28℃
摇床培养
3d
得种子液；
[0006](2)
将步骤
(1)
得到的种子液转接到大米培养基中，置于
28℃
静置培养
28
‑
30d
得发酵物；
[0007](3)
将步骤
(2)
得到的发酵物中的发酵液和菌体分离，其中发酵液用乙酸乙酯萃取2‑4次，合并萃取液后减压浓缩
、
干燥，即得所述粗提物
。
[0008]步骤
(1)
中所述摇床培养的转速为
150
‑
180r/min
；
[0009]步骤
(2)
中种子液的转接量优选
10
％
‑
12
％；
[0010]步骤
(3)
中乙酸乙酯的用量为发酵液体积的1‑2倍
。
[0011]本专利技术的另一实施方案提供一种上述曲霉属真菌
KLZNF17
粗提物，其特征在于所
述粗提物经
HPLC
分析，其次级代谢产物在
27min
至
44min
出现，
HPLC
分析条件如下：
[0012]高效液相色谱仪：安捷伦
Agilent 1260
；色谱柱：
Agilent ZORBAX SB
‑
C18(
规格5μ
m
，
4.6mm
×
250mm)
；色谱条件：流速
1.0mL/min
，进样量5μ
L
；检测波长：
190、210、254
和
330nm
；流动相：水
(A)
‑
甲醇
(B)
，梯度洗脱程序：0‑
35min
，5％
‑
100
％ B
；
35
‑
40min
，
100
％ B
；
40
‑
41min
，
100
％
‑5％ B
；
41
‑
46min
，
100
％ B。
[0013]本专利技术的另一实施方案提供上述曲霉属真菌
KLZNF17
的粗提物的制备方法，其特征在于包括本专利技术所述的任一步骤
。
[0014]本专利技术的另一实施方案提供上述曲霉属真菌
KLZNF17
粗提物作为抗菌药物的应用
。
所述抗菌药物优选用于治疗革兰氏阳性菌引起的疾病
。
[0015]本专利技术的另一实施方案提供上述曲霉属真菌
KLZNF17
粗提物在制备抗
MRSA
生物膜活性的药物中的应用
。
[0016]本专利技术的另一实施方案提供一种药物组合物，其特征在于该药物组合物以上述曲霉属真菌
KLZNF17
粗提物作为有效成分
。
所述药物组合物用于治疗革兰氏阳性菌引起的疾病或者用于抗
MRSA
生物膜
。
[0017]本专利技术的另一实施方案提供上述曲霉属真菌
KLZNF17
在制备抗菌活性粗提物或次级代谢产物中的应用
。
[0018]本专利技术的另一实施方案提供上述曲霉属真菌
KLZNF17
在制备抗
MRSA
生物膜活性的粗提物或次级代谢产物中的应用
。
[0019]本专利技术涉及的试剂
、
仪器
、
微生物培养
、
发酵
、
粗提物的制备
、
分析
、
活性测试等方法，均为本本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种曲霉属真菌
KLZNF17
，其特征在于所述曲霉属真菌
KLZNF17
的菌种保藏信息如下：保藏单位名称：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所；保藏日期：
2023
年6月
30
日；保藏编号：
CGMCC No.40717
；分类命名：烟草色曲霉
Aspergillus tabacinus。2.
权利要求1所述曲霉属真菌
KLZNF17
的粗提物，其特征在于所述粗提物的制备方法包括如下步骤：
(1)
将上述曲霉属真菌
KLZNF17
接种至
PDB
培养基中，
28℃
摇床培养
3d
得种子液；
(2)
将步骤
(1)
得到的种子液转接到大米培养基中，置于
28℃
静置培养
28
‑
30d
得发酵物；
(3)
将步骤
(2)
得到的发酵物中的发酵液和菌体分离，其中发酵液用乙酸乙酯萃取2‑4次，合并萃取液后减压浓缩
、
干燥，即得所述粗提物
。3.
权利要求2所述的粗提物，其特征在于步骤
(1)
中所述摇床培养的转速为
150
‑
180r/min。4.
权利要求2‑3任一项所述的粗提物，其特征在于步骤
(3)
中乙酸乙酯的用量为发酵液体积的1‑2倍
。5.
权利要求2‑4任一项所述的粗提物，其特征在于所述粗提物经
HPLC
分析，其次级代谢产物在
27min
至
44min
出现，
HPLC
分析条件如下：高效液相色谱仪：安捷伦
Agilent 1260
；...

【专利技术属性】
技术研发人员：王开玲，宗鹏，丁佳洁，陈晓洁，周国军，
申请(专利权)人：大理大学，
类型：发明
国别省市：