一种丁酸梭菌的简易培养方法技术

本发明专利技术公开了一种丁酸梭菌产芽孢培养基及其制备方法，采用基于玉米淀粉的产孢培养基接种基于牛肉膏和可溶性淀粉的种子培养基，质地粘稠，接种后静置培养，通过利用自身粘稠度隔绝空气，降低溶氧，减少溶氧对丁酸梭菌的生长抑制，能够确保丁酸梭菌的驱氧培养环境，同时工艺简化

【技术实现步骤摘要】
一种丁酸梭菌的简易培养方法


[0001]本专利技术属于微生物培养基及制备工艺
，具体涉及一种丁酸梭菌的简易培养方法
。

技术介绍

[0002]丁酸梭菌
(Clostridium butyricum)
是一种梭菌属的厌氧芽孢杆菌，革兰氏阳性，老培养物变成阴性，约
0.6
‑
1.2
×
3.0
‑
7.0
μ
m
，周生鞭毛，具运动性，菌体呈直或弯的杆菌，以单
、
双
、
短链形态存在，并偶见长丝状，在琼脂平板上形成白色或奶油色的不规则圆形菌落，稍突，表面湿润光滑，不透明，略有酸臭味，常发现于土壤
、
干酪
、
自然酸奶动物粪便中，发酵产物包括丁酸
、
醋酸
、
和丁醇
。
[0003]大量研究表明，丁酸梭菌具有耐高温
、
耐酸
、
耐胆盐的生物学特性，能较好的进行动物肠道而不被胃酸破坏，并于肠道内定植，有效平衡肠道微生态失调，修复肠道炎症
。
丁酸梭菌作为添加剂添加至饲料中，还可减少抗生素的用量，提高动物的免疫力和饲料转化率，降低养殖成本，提高经济效益
。
[0004]丁酸梭菌是一种严格厌氧菌，在培养过程中需要使用多种方法进行驱氧，例如采用充氮驱氧
、
生物除氧
、
添加还原剂等方式；现有技术中的各种驱氧方式均存在工艺复杂
、
操作繁琐
、
成本高昂的缺陷，寻找一种便捷
、
经济的培养方式可解决此难题
。

技术实现思路

[0005]为了解决现有技术存在的上述问题，本专利技术目的在于提供一种丁酸梭菌的简易培养方法，能够确保丁酸梭菌的无氧培养环境，同时工艺简化
、
操作方便，成本低廉
。
[0006]本专利技术所采用的技术方案为：
[0007]一种丁酸梭菌的简易培养方法
,
包括以下操作步骤，
[0008]S01
菌株活化：将冷冻保藏的丁酸梭菌冻存管菌种快速解冻后接种到灭菌液体种子培养基中，
37℃
静置培养8‑
12h
小时，获得活化好的丁酸梭菌种子；
[0009]S02
种液制备：将活化好的丁酸梭菌种子再次转接到灭菌液体种子培养基中进行扩培，接种量2％，
37℃
静置培养6‑
12h
小时；
[0010]S03
发酵培养：将步骤
S02
中的扩培种液接种到灭菌产孢培养基中，静止培养
4h
；
[0011]待液面有明显汽泡升腾时，再开启搅拌，搅拌培养至少
24
小时；
[0012]取样镜检；
[0013]若芽孢生成率
≥95
％，则结束培养；
[0014]获得丁酸梭菌菌液
。
[0015]进一步地，所述步骤
S01
和
S02
中的种子培养基包括以下组分：
[0016]牛肉膏
10g/L
，蛋白胨
5g/L
，酵母浸粉
3g/L
，葡萄糖
5g/L
，可溶性淀粉
1g/L
，氯化钠
5g/L
，醋酸钠
3g/L
，
L
‑
半胱氨酸盐酸盐
0.5g/L
，用
10
％
NaOH
溶液调
pH
至
6.8
，
121℃
，灭菌
15min
，制备固体平板时添加
20g/L
的琼脂
。
[0017]进一步地，所述步骤
S03
中的产孢培养基包括以下组分：
[0018]玉米淀粉，大豆蛋白胨，葡萄糖，酵母膏，牛肉膏，
FeSO4·
H2O
，
MgSO4
·
7H2O
，
CaCO3，
NaOH。
[0019]进一步地，所述步骤
S03
中的产孢培养基包括以下组分：玉米淀粉
30
‑
45g/L
，大豆蛋白胨
10
‑
15g/L
，葡萄糖1‑
5g/L
，酵母膏1‑
5g/L
，牛肉膏1‑
5g/L
，
FeSO4·
H2O 0.01
‑
0.1g/L
，
MgSO4
·
7H2O0.1
‑
1g/L
，
CaCO310
‑
30 g/L
，用
10
％
NaOH
溶液调
pH
至
7.2
±
0.2
，
121℃
灭菌
15min。
[0020]优选地，所述步骤
S03
的产孢培养基包括以下组分：玉米淀粉
35g/L
，大豆蛋白胨
12g/L
，葡萄糖
2g/L
，酵母膏
4g/L
，牛肉膏
1g/L
，
FeSO4·
H2O 0.02g/L
，
MgSO4
·
7H2O0.2g/L
，
CaCO315 g/L
，用
10
％
NaOH
溶液调
pH
至
7.2
±
0.2
，
121℃
灭菌
15min。
[0021]再进一步地，所述步骤
S03
中的产孢培养基接种量为3‑5％，优选4％
。
[0022]再进一步地，所述步骤
S03
中的培养温度
33
‑
37℃
，优选
35℃。
[0023]再进一步地，所述步骤
S03
中的搅拌转速为
30
‑
50rpm
，优选
50rpm。
[0024]再进一步地，所述步骤
S03
中结束培养时
pH
为
5.0
‑
6.0
，优选
pH5.5。
[0025]最后，所述步骤
S03
中的获得的丁酸梭菌的芽孢数不低于
7.0x108CFU/mL。
[0026本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种丁酸梭菌的简易培养方法
,
其特征在于：包括以下操作步骤，
S01
菌株活化：将冷冻保藏的丁酸梭菌冻存管菌种快速解冻后接种到灭菌液体种子培养基中，
37℃
静置培养8‑
12h
小时，获得活化好的丁酸梭菌种子；
S02
种液制备：将活化好的丁酸梭菌种子再次转接到灭菌液体种子培养基中进行扩培，接种量2％，
37℃
静置培养6‑
12h
小时；
S03
发酵培养：将步骤
S02
中的扩培种液接种到灭菌产孢培养基中，静止培养
4h
；待液面有明显汽泡升腾时，再开启搅拌，搅拌培养至少
24
小时；取样镜检；若芽孢生成率
≥95
％，则结束培养；获得丁酸梭菌菌液
。2.
根据权利要求1所述丁酸梭菌的简易培养方法
,
其特征在于：所述步骤
S01
和
S02
中的种子培养基包括以下组分：牛肉膏
10g/L
，蛋白胨
5g/L
，酵母浸粉
3g/L
，葡萄糖
5g/L
，可溶性淀粉
1g/L
，氯化钠
5g/L
，醋酸钠
3g/L
，
L
‑
半胱氨酸盐酸盐
0.5g/L
，用
10
％
NaOH
溶液调
pH
至
6.8
，
121℃
，灭菌
15min
，制备固体平板时添加
20g/L
的琼脂
。3.
根据权利要求1所述丁酸梭菌的简易培养方法
,
其特征在于：所述步骤
S03
中的产孢培养基包括以下组分：玉米淀粉，大豆蛋白胨，葡萄糖，酵母膏，牛肉膏，
FeSO4·
H2O
，
MgSO4
·
7H2O
，
CaCO3，
NaOH。4.
根据权利要求1所述丁酸梭菌的简易培养方法
,
其特征在于：所述步骤
S03
中的产孢培养基包括以下组分：玉米淀粉
30
‑
45g/L
，大豆蛋白胨
10
‑
15g/L
，葡萄糖1‑

【专利技术属性】
技术研发人员：李亚伟，王怡，王东荣，
申请(专利权)人：深圳市东荣生物科技有限责任公司，
类型：发明
国别省市：