一种具有杀松材线虫活性的链壶菌及其在松材线虫防治中的用途制造技术

本申请公开一种具有杀松材线虫活性的链壶菌及其在松材线虫防治中的用途，菌株的分类命名为

【技术实现步骤摘要】
一种具有杀松材线虫活性的链壶菌及其在松材线虫防治中的用途


[0001]本申请涉及生防菌剂领域，具体涉及一种具有杀松材线虫活性的链壶菌及其在松材线虫防治中的用途
。

技术介绍

[0002]松树萎蔫病又叫松材线虫病
(Pine wilt disease
，
PWD)
，是松材线虫
Bursaphelenchus xylophilus
寄生于松属植物内，引起松属植物生理活动紊乱，导致松树萎蔫直至死亡的疾病
。
自
1982
年松材线虫病传入我国以来，由于其传播迅速
、
防治困难，对我国生态环境造成严重影响
。
对于松材线虫病防治，国内外已经开展了大量的研究
。
包括了化学农药直接杀死天牛或者砍伐焚毁病死树来遏制天牛传播扩散，但不仅极大耗费资源，而且易造成耐药性病原产生，因此生物防治越来越受到重视
。
[0003]目前松材线虫病的生防菌研究主要包括生防细菌：穿刺巴氏杆菌
Pasteuria penetrans、
蜡样芽孢杆菌
Bacillus cereus
以及生防真菌：伊氏线虫菌
Esteya vermicola、
疣孢漆斑菌
Myrothecium verrucaria
等
。
生防菌剂主要通过预防病害的发生来减少植物发病率，有助于减少化学污染，保持生态平衡
。
杀线生防菌制剂已经有极为成熟的商品，而且应用历史悠久，以抑制植物寄生线虫为主，控制线虫的数量及种群繁衍
。Econem
生物农药是以穿刺芽孢杆菌为主要原材料研制而成的生防制剂，能针对多种线虫产生防治作用，目前己经在多国应用
。
另一种芽胞杆菌制剂
BioNem
用于控制根结线虫以及其他线虫
。
防治松材线虫病的生物农药以微生物活体农药和微生物代谢产物农药为主
。
由毒素致死型苏云金芽胞杆菌
JCK
‑
1233
开发获得的菌剂，已通过树干注射和叶面喷施控制松材线虫病
。
从黑松根际细菌
Lysinimonas M4
中分离出的两种杀线虫化合物2‑
coumaranone
和
cyclo
‑
(Phe
‑
Pro)
对
PWN
表现出显着的杀线活性，并且两种化合物对种卵孵化
、
摄食和繁殖均有显著的抑制作用
。

技术实现思路

[0004]目前对卵菌的研究多集中于作为病原菌的防治，对其杀线潜力的研究重视程度远远不够，本申请从死亡的土壤线虫上分离出一株具有杀松材线虫能力的卵菌
Lagenidium sp.
并命名
Lagenidium sp.NL03
，通过对
Lagenidium sp.NL03
进行生物学和分子鉴定及其生防潜力研究，为扩大松材线虫生物防治资源库及松材线虫病的绿色防控提供参考
。
[0005]一株具有杀松材线虫活性的链壶菌，分类命名为
Lagenidium juracyae
，菌株号为
NL03
，保藏号为
CGMCC NO.40587。
[0006]该菌株的形态学特征：
[0007]在2％萨氏琼脂培养基上，
Lagenidium sp.NL03
形成了无色或淡黄色的菌落，基本无气生菌丝，呈不规则的辐射状，有起伏皱褶
。
菌丝为有隔或无隔菌丝，并且会特化形成球形链段
。
断裂的球形菌丝细胞会继续萌发长出新的菌丝
。
利用孢子形成液可诱导孢子囊的
产生，诱导后细胞质和细胞核通过透明的出口管形成直径
35
‑
50
μ
m
孢子囊，囊泡具有
30
‑
40
个
10
μ
m
的肾形双鞭毛游动孢子，并通过透明的囊壁将活性的游动孢子包裹在内
。
游动孢子成熟后突破囊壁释放出来，游动孢子释放又游动了
30min
左右，最后包囊形成球形孢子，此后孢子逐渐萌发出芽管，形成细长的菌丝
。
[0008]该菌株的培养特性：菌株在
30℃
下生长速度最快，在
37℃
下不生长，说明该菌无法在恒温哺乳类动物体内生长
。
[0009]该菌株的分子生物学特征：
ITS
和三个外显子
(COXII、HSP90
和
β
‑
TUBB)
的核苷酸序列分别如
SEQ ID NO
：
9、SEQ ID NO
：
10、SEQ ID NO
：
11
和
SEQ ID NO
：
12
所示
。
[0010]本申请分离
、
鉴定后的菌株命名为
Lagenidium juracyae
，菌株号为
NL03
，于
2023
年5月8日保藏于位于北京市朝阳区北辰西路1号院3号的中国微生物菌株保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为
CGMCC NO.40587。
[0011]本申请还提供一种所述链壶菌在制备松材线虫杀虫剂中的应用
。
[0012]本申请还提供一种用于杀松材线虫的生防菌剂，以所述链壶菌的孢子悬浮液为活性成分
。
[0013]本申请还提供一种所述链壶菌或所述生防菌剂在林木松材线虫病防治中的应用
。
[0014]可选的，所述林木为松树
。
[0015]本申请还提供一种所述生防菌剂的制备方法，包括：
[0016]活化后的
Lagenidium sp.NL03
转接至蛋黄牛奶琼脂培养基上，培养后将部分菌丝团转移至诱导卵原细胞的
Brey
液体培养基继续培养；然后将
Brey
液体培养基中培养
2.5
～
3.5d(
优选
3d)
的菌丝与孢子诱导液混合，并在
28
～
30℃(
优选
30℃)
下培养6‑
10h。
[0017]可选的，所述
Brey
液体培养基的制备过程包括：第一组分含有
2.8g/L
酵母提取物，葡萄糖
2.4g/L
，
3.2g/L
小麦胚芽粉和
0.1ml/L本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一株具有杀松材线虫活性的链壶菌，其特征在于，分类命名为链壶菌
(Lagenidium juracyae)
，菌株号为
NL03
，保藏号为
CGMCC NO.40587。2.
如权利要求1所述链壶菌在制备松材线虫杀虫剂中的应用
。3.
一种用于杀松材线虫的生防菌剂，其特征在于，以如权利要求1所述链壶菌的孢子悬浮液为活性成分
。4.
如权利要求1所述链壶菌或如权利要求3所述生防菌剂在林木松材线虫病防治中的应用
。5.
如权利要求3所述生防菌剂的制备方法，其特征在于，包括：活化后的如权利要求1所述的链壶菌转接至蛋黄牛奶琼脂培养基上，培养后将部分菌丝团转移至诱导卵原细胞的
Brey
液体培养基继续培养；然后将
Brey
液体培养基中培养
2.5

【专利技术属性】
技术研发人员：郭恺，向漷媛，郑炜，顾建锋，姜慧鹏，汤思琦，
申请(专利权)人：浙江农林大学，
类型：发明
国别省市：