人制造技术

本发明专利技术公开了一种人

【技术实现步骤摘要】
人IL
‑
18突变体及其应用


[0001]本专利技术涉及蛋白质工程
，具体涉及一种人
IL
‑
18
突变体及其应用
。

技术介绍

[0002]白细胞介素
18(IL
‑
18)
，又名干扰素
γ
诱导因子，是一种促炎性细胞因子，在人类中由
IL18
基因编码；
IL
‑
18
由巨噬细胞和其它细胞分泌产生，可以调节先天性和适应性免疫，其失调可引起自身免疫或炎症性疾病
。
[0003]人体中
IL
‑
18
的检测需要制备高亲和力和高纯度的单克隆抗体；其中，为了获取高纯度的单克隆抗体一般需要对单克隆抗体进行纯化，单克隆抗体纯化方式主要是采用偶联
IL
‑
18
抗原的亲和层析柱
、Protein A
柱和
Protein G
柱等进行处理
。
[0004]目前，亲和层析柱
、Protein A
柱和
Protein G
柱进行
IL
‑
18
单克隆抗体纯化各有优劣；其中，
Protein A
柱
、Protein G
柱纯化单克隆抗体虽然收率较高，但相对纯度较低；偶联
IL
‑
18
抗原的亲和层析柱纯化的单克隆抗体，虽然特异性好，纯度相对较高，但由于偶联
IL
‑
18
抗原的亲和层析柱与抗体结合力强，对抗体的洗脱非常困难，收率较低
。
[0005]基于上述分析，专利技术人认为，在亲和层析柱纯化技术上，如何找到一种与
IL
‑
18
单克隆抗体低亲和力的
IL
‑
18
突变体，以及如何提高亲和层析柱对
IL
‑
18
单克隆抗体的纯化收率，是本领域的技术人员急需解决的技术问题
。
[0006]公开于该
技术介绍
部分的信息仅仅旨在增加对本专利技术的总体背景的理解，而不应当被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已为本领域一般技术人员所公知的现有技术
。

技术实现思路

[0007]针对上述技术问题，本专利技术实施例提供了一种人
IL
‑
18
突变体及其应用，以解决上述
技术介绍
中提出的问题
。
[0008]本专利技术提供了以下技术方案：
[0009]一种人
IL
‑
18
突变体，突变位点为
L29R。
[0010]优选的，所述人
IL
‑
18
突变体为氨基酸序列如
SEQ ID No
：1所示，碱基序列如
SEQ ID NO:2
所示的
IL
‑
18
的突变体
。
[0011]一种人
IL
‑
18
突变体，所述人
IL
‑
18
突变体的氨基酸序列如
SEQ ID NO:3
所示
。
[0012]一种人
IL
‑
18
突变体，所述人
IL
‑
18
突变体的碱基序列如
SEQ ID NO:4
所示
。
[0013]一种构建如上述所述
IL
‑
18
突变体的引物对，其上游引物核苷酸序列如
SEQ ID No:5
所示，其下游引物核苷酸序列如
SEQ ID No:6
所示
。
[0014]一种如上述所述的
IL
‑
18
突变体在抗体制备中的应用
。
[0015]优选的，所述
IL
‑
18
突变体用于制备亲和层析柱
。
[0016]优选的，所述
IL
‑
18
突变体在亲和层析柱中作为抗原
。
[0017]优选的，所述
IL
‑
18
突变体偶联在亲和层析柱中的载体上
。
[0018]优选的，所述载体为琼脂糖凝胶颗粒
。
[0019]本专利技术实施例提供的一种人
IL
‑
18
突变体及其应用，具有以下有益效果：本专利技术提供了一种
IL
‑
18
突变体，蛋白结构发生改变，其降低了与
IL
‑
18
单克隆抗体的亲和力；本专利技术将
IL
‑
18
突变体偶联到亲和层析柱中的载体上，使得
IL
‑
18
单克隆抗体更容易洗脱分离，制备了一种具有较高回收率和较高回收纯度的亲和层析柱
。
附图说明
[0020]图1是
IL
‑
18
突变体蛋白纯度分析结果图
。
具体实施方式
[0021]下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚
、
完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例
。
基于本专利技术中的实施例，本领域技术人员在没有做出创造性劳动前提下，所获得的所有其它实施例，都属于本专利技术保护的范围
。
[0022]具体实施方式
[0023]下面结合具体实施例及附图对本专利技术做进一步详细说明
。
以下实施例中所述试剂和生物材料，如无特殊说明，均可以从商业途径获得
。
[0024]本专利技术方案的设计原理是：
[0025]根据已有
IL
‑
18
序列信息，对
IL
‑
18
氨基酸序列进行分析，筛选出对
IL
‑
18
构象有明显影响的氨基酸位点，并通过引物设计对相应位点通过定向突变技术进行氨基酸突变，使
IL
‑
18
蛋白构象发生变化，从而影响
IL
‑
18
与抗体的结合力；
[0026]实验通过对
IL
‑
18
蛋白突变，经过大量筛选，确定了
C
端的
L29R
突变位点能引起
IL
‑
18
抗原与抗体亲和力的减弱，从而促成本专利技术；同时，为了更好的验证
本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种人
IL
‑
18
突变体，其特征在于，其突变位点为
L29R。2.
根据权利要求1所述的人
IL
‑
18
突变体，其特征在于，所述人
IL
‑
18
突变体为氨基酸序列如
SEQ ID No
：1所示，碱基序列如
SEQ ID NO:2
所示的
IL
‑
18
的突变体
。3.
一种人
IL
‑
18
突变体，其特征在于，所述人
IL
‑
18
突变体的氨基酸序列如
SEQ ID NO:3
所示
。4.
一种人
IL
‑
18
突变体，其特征在于，所述人
IL
‑
18
突变体的碱基序列如
SEQ ID NO:4
所示
。5.
一种构建如权利要求1‑4任一项所述的
IL
‑
18
突变体的引物对，其特征在于，其上游引物核...

【专利技术属性】
技术研发人员：王硕硕，宁平，孙谧，
申请(专利权)人：青岛瑞斯凯尔生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：