人TNF-α突变体及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种人TNF

【技术实现步骤摘要】
人TNF
‑
α
突变体及其应用


[0001]本专利技术涉及蛋白质工程
，具体涉及一种人TNF
‑
α突变体及其应用。

技术介绍

[0002]TNF
‑
α(Tumor Necrosis Factor
‑
alpha)是一种细胞因子，也被称为肿瘤坏死因子
‑
α；其主要由巨噬细胞、T细胞、B细胞等免疫细胞产生。TNF
‑
α具有多种生物活性，包括促炎作用、免疫调节作用和细胞凋亡诱导作用等；因其具有重要的生物学功能和临床意义，TNF
‑
α成为一种重要的药物靶点。
[0003]人体中TNF
‑
α的检测需要制备高亲和力和高纯度的单克隆抗体；其中，为了获取高纯度的单克隆抗体一般需要对单克隆抗体进行纯化，单克隆抗体纯化方式主要是采用偶联TNF
‑
α抗原的亲和层析柱、Protein A柱和Protein G柱等进行处理。
[0004]目前，亲和层析柱、Protein A柱和Protein G柱进行TNF
‑
α单克隆抗体纯化各有优劣；其中，Protein A柱、Protein G柱纯化单克隆抗体虽然收率较高，但相对纯度较低；偶联TNF
‑
α抗原的亲和层析柱纯化的单克隆抗体，虽然特异性好，纯度相对较高，但由于偶联TNF
‑
α抗原的亲和层析柱与抗体结合力强，对抗体的洗脱非常困难，收率较低。
[0005]基于上述分析，专利技术人认为，在亲和层析柱纯化技术上，如何找到一种与TNF
‑
α单克隆抗体低亲和力的TNF
‑
α突变体，以及如何提高亲和层析柱对TNF
‑
α单克隆抗体的纯化收率，是本领域的技术人员急需解决的技术问题。
[0006]公开于该
技术介绍
部分的信息仅仅旨在增加对本专利技术的总体背景的理解，而不应当被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

技术实现思路

[0007]针对上述技术问题，本专利技术实施例提供了一种人TNF
‑
α突变体及其应用，以解决上述
技术介绍
中提出的问题。
[0008]本专利技术提供了以下技术方案：
[0009]一种人TNF
‑
α突变体，其突变位点为L26R。
[0010]优选的，所述人TNF
‑
α突变体为氨基酸序列如SEQ ID No：5所示，碱基序列如SEQ ID NO:6所示的TNF
‑
α的突变体。
[0011]一种人TNF
‑
α突变体，所述人TNF
‑
α突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示。
[0012]一种人TNF
‑
α突变体，所述人TNF
‑
α突变体的碱基序列如SEQ ID NO:1所示。
[0013]一种构建如上述所述的TNF
‑
α突变体的引物对，其上游引物核苷酸序列如SEQ ID No:2所示，其下游引物核苷酸序列如SEQ ID No:3所示。
[0014]一种如上述所述的TNF
‑
α突变体在抗体制备中的应用。
[0015]优选的，所述TNF
‑
α突变体用于制备亲和层析柱。
[0016]优选的，所述TNF
‑
α突变体在亲和层析柱中作为抗原。
[0017]优选的，所述TNF
‑
α突变体偶联在亲和层析柱中的载体上。
[0018]优选的，所述载体为琼脂糖凝胶颗粒。
[0019]本专利技术实施例提供的一种人TNF
‑
α突变体及其应用，具有以下有益效果：本专利技术提供了一种TNF
‑
α突变体，蛋白结构发生改变，其降低了与TNF
‑
α单克隆抗体的亲和力；本专利技术将TNF
‑
α突变体偶联到亲和层析柱中的载体上，使得TNF
‑
α单克隆抗体更容易洗脱分离，制备了一种具有较高回收率和较高回收纯度的亲和层析柱。
附图说明
[0020]图1是TNF
‑
α突变体蛋白纯度分析结果图。
具体实施方式
[0021]下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域技术人员在没有做出创造性劳动前提下，所获得的所有其它实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0022]具体实施方式
[0023]下面结合具体实施例及附图对本专利技术做进一步详细说明。以下实施例中所述试剂和生物材料，如无特殊说明，均可以从商业途径获得。
[0024]本专利技术方案的设计原理是：
[0025]根据已有TNF
‑
α序列信息，对TNF
‑
α氨基酸序列进行分析，筛选出对TNF
‑
α构象有明显影响的氨基酸位点，并通过引物设计对相应位点通过定向突变技术进行氨基酸突变，使TNF
‑
α蛋白构象发生变化，从而影响TNF
‑
α与抗体的结合力；
[0026]实验通过对TNF
‑
α蛋白突变，经过大量筛选，确定了C端的L26R突变位点能引起TNF
‑
α抗原与抗体亲和力的减弱，从而促成本专利技术；同时，为了更好的验证TNF
‑
α蛋白突变位点的可行性，具体做了以下相关实验。
[0027]实施例1TNF
‑
α基因突变库的构建
[0028]TNF
‑
α抗原(购自上海友科生物科技有限公司，人工合成)的氨基酸序列如表SEQ ID No:5所示，即：VRSSSRTPSDKPVAHVVANPQAEGQLQWLNRRANALLANGVELRDNQLVVPSEGLYLIYSQVLFKGQGCPSTHVLLTHTISRIAVSYQTKVNLLSAIKSPCQRETPEGAEAKPWYEPIYLGGVFQLEKGDRLSAEINRPDYLDFAESGQVYFGIIAL；
[0029]其碱基序列如表SEQ ID No:6所示，即：GTCAGATCATCTTCTCGAACCCCGAGTGACAAGCCTGTAGCCCATGTTGTAGCAAACCCTCAAGCTGAGGGGCAGCTCCAGTGGCTGAACCGCCGGGCCAATGCCCTCCTGGCCAATGGCGTGGAGCTGAGAGATAACCAGCTGGTGGTGCCATCAGAGGGCCTGTACCTCATCTACTCCCAGGTCCTCTTCAAGGGCCAAGGCTGCCCCTCCACCCATGTGCTCCTCACCCACACCATCAGC本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种人TNF
‑
α突变体，其特征在于，其突变位点为L26R。2.根据权利要求1所述的人TNF
‑
α突变体，其特征在于，所述人TNF
‑
α突变体为氨基酸序列如SEQ ID No：5所示，碱基序列如SEQ ID NO:6所示的TNF
‑
α的突变体。3.一种人TNF
‑
α突变体，其特征在于，所述人TNF
‑
α突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示。4.一种人TNF
‑
α突变体，其特征在于，所述人TNF
‑
α突变体的碱基序列如SEQ ID NO:1所示。5.一种构建如权利要求1
‑
4任一项所述的TNF
‑
α突变体的引物对，其特征在于，其上游引物核苷酸序列如SEQ ID No...

【专利技术属性】
技术研发人员：王硕硕，宁平，孙谧，
申请(专利权)人：青岛瑞斯凯尔生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：