人制造技术

本发明专利技术属于蛋白质工程技术领域，具体涉及一种人

【技术实现步骤摘要】
人IL
‑1β
突变体及其应用


[0001]本专利技术属于蛋白质工程
，具体涉及一种人
IL
‑1β
突变体及其应用
。

技术介绍

[0002]白细胞介素
1(IL
‑
1)
包括两个基因：
IL
‑1α
和
IL
‑1β
，
IL
‑1β
前体被胞质半胱天冬酶
1(
白介素1β
转化酶
)
裂解形成成熟的白细胞介素1β
(IL
‑1β
)
，
IL
‑1β
又称淋巴细胞激活因子，是一种在人体内由
IL1B
基因编码的细胞因子蛋白
。
[0003]IL
‑1β
是白细胞介素1细胞因子家族的成员，这种细胞因子由活化的巨噬细胞作为前蛋白产生，被半胱天冬酶
1(CASP1/ICE)
蛋白水解加工成其活性形式，是炎症反应的重要介质，参与多种细胞活动，包括细胞增殖
、
分化和凋亡
。
有研究发现该细胞因子在中枢神经系统
(CNS)
中诱导环氧合酶
‑
2(PTGS2/COX2)
导致炎症性疼痛过敏
。IL
‑1β
基因和其他8个白细胞介素1家族基因在2号染色体上形成细胞因子基因簇
。IL
‑1β
与
IL
‑
23
结合，可诱导
γδ
T
细胞表达
IL
‑
17、IL
‑
21
和
IL
‑
22。
这种表达诱导是在没有额外信号的情况下进行的，表明
IL
‑1β
参与调节自身免疫性炎症
。
具体来说，炎症小体识别危险信号并激活促炎过程和
IL
‑1β
和
IL
‑
18
的产生
。IL
‑1β
被认为是典型的多功能细胞因子，几乎影响所有类型的细胞，无论是单独作用还是与其他细胞因子联合使用
。IL
‑1β
对几乎所有组织的细胞防御和组织修复至关重要，与疼痛
、
炎症和自身免疫有关
。IL
‑1β
也参与神经保护
、
组织重塑和修复
。
[0004]人体中
IL
‑1β
的检测需要制备高亲和力和高纯度的单克隆抗体
。
目前国内外针对
IL
‑1β
单克隆抗体的纯化主要是偶联
IL
‑1β
抗原的亲和层析柱
、ProteinA
柱
、ProteinG
柱等，其中，
ProteinA
柱
、ProteinG
柱纯化收率和相对纯度较低
。
偶联
IL
‑1β
抗原的亲和层析柱纯化的单抗具有特异性好
、
纯度相对较高的优势，但是，由于
IL
‑1β
抗原亲和柱与抗体结合力强，对抗体的洗脱非常困难，收率较低
。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于解决现有技术中存在的
IL
‑1β
抗原亲和柱与抗体结合力强，导致对抗体的洗脱非常困难且收率较低的问题，提出一种人
IL
‑1β
突变体及其应用，通过改变蛋白结构，降低其与
IL
‑1β
单克隆抗体的亲和力，并利用这一特点制备
IL
‑1β
单克隆抗体纯化使用的亲和层析柱，该亲和层析柱以
sepharose 4b
为载体，偶联
IL
‑1β
突变体，可以快速
、
高效的得到高纯度
IL
‑1β
单克隆抗体
。
[0006]本专利技术的技术方案是：
[0007]本专利技术提供了一种人
IL
‑1β
突变体，其氨基酸序列如
SEQ ID No:8
所示
。
该突变蛋白的突变位点为
K16N
，
L26R
，
V41E。
[0008]进一步的，所述的人
IL
‑1β
突变体的编码基因的核苷酸序列如
SEQ ID No:1
所示
。
[0009]本专利技术还提供了用于构建所述人
IL
‑1β
突变体的突变引物对，包括
K16N
突变引物对
、L26R
突变引物对和
V41E
突变引物对；采用上述3对突变引物对对
IL
‑1β
蛋白进行定点突变，获得人
IL
‑1β
突变体的如
SEQ ID No:1
所示的编码基因
。
[0010]所述
K16N
突变引物对的上游引物序列如
SEQ ID NO:2
所示；其下游引物序列如
SEQ ID NO:3
所示；
[0011]所述
L26R
突变引物对的上游引物序列如
SEQ ID NO:4
所示；其下游引物序列如
SEQ ID NO:5
所示；
[0012]所述
V41E
突变引物对的上游引物序列如
SEQ ID NO:6
所示；其下游引物序列如
SEQ ID NO:7
所示；
[0013]上述突变引物对以
SEQ ID NO:10
所示序列的
IL
‑1β
基因为扩增模板
。
[0014]本专利技术还提供了上述人
IL
‑1β
突变体在制备偶联
IL
‑1β
抗原的亲和层析柱中的应用
。
[0015]进一步的，所述人
IL
‑1β
突变体作为抗原
。
[0016]本专利技术还提供了一种亲和层析柱，用于人
IL
‑1β
抗体纯化使用，所述亲和层析柱以琼脂糖凝胶颗粒为载体，偶联权利要求1所述的人
IL
‑1β
突变体蛋白
。
[0017]本专利技术的有益效果：
[0018](1)
本专利技术提供了一种人
IL
‑1β
突变体，通过蛋白构象的改变，降低了与
IL<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种人
IL
‑1β
突变体，其氨基酸序列如
SEQ ID No:8
所示
。2.
权利要求1所述的人
IL
‑1β
突变体的编码基因，其特征在于，所述编码基因的核苷酸序列如
SEQ ID No:1
所示
。3.
用于构建权利要求1所述人
IL
‑1β
突变体的突变引物对，其特征在于，所述突变引物对包括
K16N
突变引物对
、L26R
突变引物对和
V41E
突变引物对；所述
K16N
突变引物对的上游引物序列为
SEQ ID NO:2
；所述
K16N
突变引物对的下游引物序列为
SEQ ID NO:3
；所述
L26R
突变引物对的上游引物序列为
SEQ ID NO:4
；所述
L26R
突变引物对...

【专利技术属性】
技术研发人员：王硕硕，宁平，孙谧，
申请(专利权)人：青岛瑞斯凯尔生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：