一种提取植物组织线粒体的方法技术

本发明专利技术涉及一种提取植物组织线粒体的方法，包括步骤1：取植物材料进行预处理，而后进行液氮研磨，并加入预冷的研磨介质匀浆；步骤2：对匀浆进行抽滤2‑3次

【技术实现步骤摘要】
一种提取植物组织线粒体的方法


[0001]本专利技术涉及生物
，尤其是涉及一种提取植物组织线粒体的方法
。

技术介绍

[0002]线粒体是一种双膜结合的细胞器，存在于大多数真核细胞中，是真核生物进行氧化代谢的部位，是糖类
、
脂肪和氨基酸最终氧化释放能量的场所
。
线粒体负责的最终氧化的共同途径是三羧酸循环与氧化磷酸化，分别对应有氧呼吸的第二
、
三阶段
。
细胞质基质中完成的糖酵解和在线粒体基质中完成的三羧酸循环在会产还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸
(reduced nicotinamide adenine dinucleotide
，
NADH)
和还原型黄素腺嘌呤二核苷酸
(reduced flavin adenosine dinucleotide
，
FADH2)
等高能分子，而氧化磷酸化这一步骤的作用则是利用这些物质还原氧气释放能量合成
ATP。
[0003]目前，线粒体越来越多被作为研究植物的品种资源
、
细胞质雄性不育
、
植物抗胁迫及细胞凋亡的重要细胞器，提取有活性的线粒体是线粒体研究的基础
。
由于线粒体大量存在于代谢旺盛的细胞中，如植物种子或根系中，大量制备线粒体就是从这些组织细胞中提取
。
但是，现有的线粒体提取多采用试剂盒提取法
、
密度梯度离心法和差速离心法，其对于仪器设备要求高，成本高，且提取的效率低
、
活率不高
。
[0004]因此，有必要提供一种新的技术方案以克服上述缺陷
。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一种可有效解决上述技术问题的提取植物组织线粒体的方法
。
[0006]为达到本专利技术之目的，采用如下技术方案：
[0007]一种提取植物组织线粒体的方法，包括如下步骤：
[0008]步骤1：取植物材料进行预处理，而后进行液氮研磨，并加入预冷的研磨介质匀浆；
[0009]步骤2：对匀浆进行抽滤2‑3次
、
离心
、
去除上清液，并使用洗涤介质对沉淀进行清洗，2‑3次后将其转移至提取缓冲液中，制成悬液；
[0010]步骤3：向所述悬液中加入提取溶剂均匀混合，而后在搅拌条件下水浴加热，
45min
后取出冷却至室温，离心得到上清液；
[0011]及，步骤4：将上清液冷却降温至4～
5℃
，而后离心取得沉淀，即得到线粒体
。
[0012]优选的，所述步骤1中，植物材料为植物茎叶
、
根系
、
种子中的一种
。
[0013]优选的，所述步骤1中，对植物材料进行预处理包括对植物材料进行清洗
、
消毒及粉碎
。
[0014]优选的，所述步骤1中，所述研磨介质为
pH
为
7.5
的磷酸钾缓冲液，其中含有
0.3M
蔗糖
、1
％
(W/V)BSA、1
％
(W/V)PVP
‑
40
，
2.0mM EGTA
，
1.0Mm AOS
，
20mM
半胱氨酸
。
[0015]优选的，所述步骤2中，离心条件为：
4000
‑
4500g
，
10
‑
15min。
[0016]优选的，所述步骤2中，洗涤介质由
0.3M
蔗糖，1％
(W/V)BSA
，
20mM TES
‑
Na
组成，
pH
为
7.5。
[0017]优选的，所述步骤2中，提取缓冲液由
0.4
～
0.6mol/L
蔗糖
、0.9
～
[0018]1.1mmol/L MgCl2、0.9
～
1.1mmol/L EGTA、4.5
～
5.5g/L PVP、0.9
～
1.1g/L cys、1.3
～
1.5mL/L
巯基乙醇
、0.9
～
1.1g/L BSA
和
48
～
52mmol/L Tris
～
HCl
组成，
pH
为
7.4
～
7.8。
[0019]优选的，所述步骤3中，提取溶剂由
0.5
～
1.0mol/L
氯化胆碱和
1.5
～
2.5mol/L N
‑
异丙基丙烯酰胺
‑
壳聚糖组成
。
[0020]优选的，所述步骤3中，离心速率为
5000
～
7000g
，离心时间为
30
～
35min。
[0021]优选的，所述步骤4中，离心速率为
10000
～
11000g
，离心时间为
50
～
60min。
[0022]与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：
[0023]本专利技术采用的提取方法，相对于传统的提取方法来说，提取过程简单高效，对于设备条件要求低，从而有效的降低了提取成本，同时提取的线粒体完整度好，活性高
。
具体实施方式
[0024]为了使本专利技术实施例的目的
、
技术方案和优点更加清楚，下面将结合本专利技术实施例中的技术方案进行清楚
、
完整的描述，显然，所描述的实施例是本专利技术的部分实施例，而不是全部实施例
。
[0025]本专利技术提供了一种提取植物组织线粒体的方法，包括如下步骤：
[0026]步骤1：取植物材料进行预处理，而后进行液氮研磨，并加入预冷的研磨介质匀浆；该步骤中，植物材料可以选自植物茎叶
、
根系
、
种子等等，研磨温度为
4℃
；研磨介质为
pH
为
7.5
的磷酸钾缓冲液，其中含有
0.3M
蔗糖
、1
％
(W/V)BSA、1
％
(W/V)PVP
‑
40
，
2.0mM EGTA
，
1.0Mm AOS
，
20mM
半胱氨酸
。
[0027]步骤2：对匀浆进行抽滤2‑3次
、
...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种提取植物组织线粒体的方法，其特征在于：包括如下步骤：步骤1：取植物材料进行预处理，而后进行液氮研磨，并加入预冷的研磨介质匀浆；步骤2：对匀浆进行抽滤2‑3次
、
离心
、
去除上清液，并使用洗涤介质对沉淀进行清洗，2‑3次后将其转移至提取缓冲液中，制成悬液；步骤3：向所述悬液中加入提取溶剂均匀混合，而后在搅拌条件下水浴加热，
45min
后取出冷却至室温，离心得到上清液；及，步骤4：将上清液冷却降温至4～
5℃
，而后离心取得沉淀，即得到线粒体
。2.
根据权利要求1所述的一种提取植物组织线粒体的方法，其特征在于：所述步骤1中，植物材料为植物茎叶
、
根系
、
种子中的一种
。3.
根据权利要求1所述的一种提取植物组织线粒体的方法，其特征在于：所述步骤1中，对植物材料进行预处理包括对植物材料进行清洗
、
消毒及粉碎
。4.
根据权利要求1所述的一种提取植物组织线粒体的方法，其特征在于：所述步骤1中，所述研磨介质为
pH
为
7.5
的磷酸钾缓冲液，其中含有
0.3M
蔗糖
、1
％
(W/V)BSA、1
％
(W/V)PVP
‑
40
，
2.0mM EGTA
，
1.0Mm AOS
，
20mM
半胱氨酸
。5.
根据权利要求1所述的一种提取植物组织线粒体的方法，其特征在于：所述步骤2中，离心条件为：
4000
‑
4500g
，
10
‑
15min。6.
根据权利要求1所述的一种提取植物组织线粒体的方法，其特征在于：所述步骤2中，洗涤介质由
0.3M
...

【专利技术属性】
技术研发人员：马铎，马颖，
申请(专利权)人：广东龄值生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：