一种肿瘤恶性积液体外诊断试剂盒及其使用方法技术

本发明专利技术提供了一种肿瘤恶性积液体外诊断试剂盒及其使用方法，旨在解决现有技术中针对治疗肿瘤恶性积液，难以选择合适的

【技术实现步骤摘要】
一种肿瘤恶性积液体外诊断试剂盒及其使用方法


[0001]本专利技术属于肿瘤患者药物敏感性敏感性筛选
，具体涉及一种肿瘤恶性积液体外诊断试剂盒及其使用方法
。

技术介绍

[0002]癌症恶性积液是癌症患者晚期的恶性表现，免疫检查点抑制剂
(ICI)
，是免疫治疗的一种有效方式，一般作为晚期癌症患者的最后治疗手段，目前的指南中将
ICI
药物治疗拓展至肿瘤治疗的各个阶段
。ICI
通过改善肿瘤周围免疫微环境，从而激活体内免疫细胞活性，以达到抗肿瘤目的
。
[0003]免疫检查点抑制剂可逆转
T
细胞耗竭状态
。T
细胞耗竭的主要原因为免疫抑制性受体表达增加，如
PD
‑
1、CTLA
‑
4、Tim
‑3等，免疫检查点抑制剂可以阻断这些信号，逆转耗竭的
T
细胞活性，恢复肿瘤微环境肿瘤浸润
T
细胞
(TIL)
功能
。T
细胞耗竭显然在肿瘤免疫
、
感染免疫
、
自身免疫都发挥着重要作用
。Jean
‑
Christophe Beltra(PMID32396847)
工作发现处于耗竭中期的
T
细胞，对于免疫检查点抑制剂治疗的响应最好，且能够恢复
T
细胞的细胞毒性功能
。
因而，基于/>T
细胞耗竭分期
(
或者耗竭
T
细胞亚型
)
的伴随诊断，应该对于更好发挥免疫检查点抑制剂治疗效果，能够起到积极作用
。
[0004]肿瘤浸润淋巴细胞
(tumorinfiltrating lymphocyte,TIL)
，含有针对肿瘤特异性突变抗原的
T
细胞，
T
细胞是杀伤肿瘤最强的免疫细胞
。
肿瘤患者的
TIL
细胞由于各种原因受到了抑制，不能有效杀伤肿瘤
。
通过一些体外培养方法把这些
TIL
细胞扩增
、
处理，再回输给患者，发挥抗肿瘤的作用，这样的疗法就叫做
TIL
细胞疗法
。
由于
T
细胞在长期不断地处于与入侵病原体或肿瘤细胞的战斗中，持久的暴露于抗原
/
炎症下，一批一批
T
细胞逐渐失去效应功能，记忆
T
细胞特征也开始缺失，这一过程，就被称为
T
细胞耗竭
(T Cell Exhaustion)。
[0005]选择合适的患者人群进行治疗，从而获得更好的抗肿瘤效应及临床获益，是肿瘤临床研究的一大挑战，特别是对于接受
ICI
治疗的患者
。PD
‑
L1
表达
、
肿瘤突变负荷
(TMB)
与微卫星不稳定
(MSI)
是
ICI
治疗研究较为深入的生物学标志物，其他一些潜在的生物标志物也得到发掘和验证
。
[0006]其中，
PD
‑
L1
表达是现阶段官方和大家都认可度比较高的生物标志物了
。
由于历史发展的各种原因，
PD
‑
L1
表达在指南和药品说明书中出现了多种表达方式：
TPS(
任何强度
PD
‑
L1
膜染色肿瘤细胞占肿瘤细胞的百分比
)、CPS(
每
100
个肿瘤细胞中
PD
‑
L1
染色的肿瘤细胞和肿瘤相关的免疫数之和
)、IPS(
任何强度
PD
‑
L1
膜和胞浆染色肿瘤相关免疫细胞占所有肿瘤相关免疫细胞百分比
)
都是以染色
PD
‑
L1
表达并作为生物标志物的指标
。
[0007]然而，现有技术只发现
ICI
可逆转
T
细胞的耗竭状态，可使
T
细胞恢复活力杀伤肿瘤细胞，对于肿瘤的治疗具有极大的临床价值
。
但现有技术仍未公开对于不同肿瘤或者病人如何选择合适的
ICI
药物
。
因此，对于如何提供用于筛选合适的
ICI
药物治疗诸如肿瘤恶性积液疾病等肿瘤的试剂盒，仍然是本领域技术人员亟待解决的技术问题
。

技术实现思路

[0008]本专利技术提供了一种肿瘤恶性积液体外诊断试剂盒及其使用方法，旨在解决现有技术中针对治疗肿瘤恶性积液，难以选择合适的
ICI
药物及其组合的技术问题
。
[0009]一方面，本专利技术提供了一种肿瘤恶性积液体外诊断试剂盒，包括共培养扩增试剂
、
肿瘤恶性积液
TIL
共刺激激活试剂
、
肿瘤细胞扩增试剂和
T
细胞逆耗竭激活试剂；
[0010]共培养扩增试剂包括
DMEM
培养基和肿瘤恶性积液
TIL
扩增剂；
[0011]肿瘤细胞扩增试剂包括
DMEM
培养基；
[0012]所述
T
细胞逆耗竭激活试剂包括若干份不同的
ICI。
[0013]优选的方案，
DMEM
培养基添加有胎牛血清和广谱抗生素；所述胎牛血清体积占
DMEM
培养基体积的
10
‑
50
％，所述广谱抗生素体积占
DMEM
培养基体积的
0.5
‑3％；所述
DMEM
培养基的
pH
值为
6.7
‑
7.6。
[0014]优选的方案，所述肿瘤恶性积液
TIL
扩增剂为白介素
2。
[0015]基于上述方案，所选用的白介素2可提高人体对病毒
、
细菌
、
真菌
、
原虫等感染的免疫应答白细胞，能够刺激
TIL
生长和分化，并使其杀伤活性增强，进而清除肿瘤细胞和病毒感染细胞，是扩增
TIL
细胞的重要因子
。
[0016]优选的方案，所述肿瘤恶性积液
TIL
共刺激激活试剂为
CD3/CD28
抗体磁珠
。
[0017]基于上述方案，所选用的
CD3/CD28
抗体磁本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种肿瘤恶性积液体外诊断试剂盒，其特征在于：包括共培养扩增试剂
、
肿瘤恶性积液
TIL
共刺激激活试剂
、
肿瘤细胞扩增试剂和
T
细胞逆耗竭激活试剂；共培养扩增试剂包括
DMEM
培养基和肿瘤恶性积液
TIL
扩增剂；肿瘤细胞扩增试剂包括
DMEM
培养基；所述
T
细胞逆耗竭激活试剂包括若干份不同的
ICI。2.
根据权利要求1所述的一种肿瘤恶性积液体外诊断试剂盒，其特征在于，
DMEM
培养基添加有胎牛血清和广谱抗生素；所述胎牛血清体积占
DMEM
培养基体积的
10
‑
50
％，所述广谱抗生素体积占
DMEM
培养基体积的
0.5
‑3％；所述
DMEM
培养基的
pH
值为
6.7
‑
7.6。3.
根据权利要求2所述的一种肿瘤恶性积液体外诊断试剂盒，其特征在于，所述广谱抗生素包括青霉素和链霉素
。4.
根据权利要求1所述的一种肿瘤恶性积液体外诊断试剂盒，其特征在于，所述肿瘤恶性积液
TIL
扩增剂为白介素
2。5.
根据权利要求1所述的一种肿瘤恶性积液体外诊断试剂盒，其特征在于，所述肿瘤恶性积液
TIL
共刺激激活试剂为
CD3/CD28
抗体磁珠
。6.
根据权利要求1所述的一种肿瘤恶性积液体外诊断试剂盒，其特征在于，所述
ICI
为
PD
‑1抗体
、CTLA
‑4抗体
、Lag3
抗体和
Tim3
抗体中的至少一种
。7.
一种权利要求1‑6任一所述的一种用于肿瘤恶性积液体外诊断的试剂盒的使用方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、TIL
细胞的扩增：将肿瘤恶性积液
TIL
扩增剂加入
DMEM
培养基获得共培养扩增试剂；将肿瘤恶性积液离心并弃掉上清溶液后获得包含肿瘤细胞和
TIL
细胞的混合细胞，加入共培养扩增试剂稀释细胞获得混合细胞溶液，将混合细胞溶液移至细胞培养板中，放入
37℃
且含有浓度为5％
CO2的培养箱中，培养期间，每隔3‑4天替换一次培养板孔内的共培养扩增试剂直至
TIL
细胞扩增的数量达标后进行分孔培养；
S2、TIL
的共刺激激活：将步骤
S1
中细胞培养板孔内扩增后的混合细胞溶液混匀，将悬浮的
TIL
细胞溶液加入离心管中进行离心，细胞培养板孔内留下贴壁的肿瘤细胞...

【专利技术属性】
技术研发人员：王俭，刘翼宁，王一飞，
申请(专利权)人：杭州准星医学科技有限公司，
类型：发明
国别省市：