一种药用核酸及其生产工艺制造技术

本发明专利技术公开了一种药用核酸及其生产工艺，属于药用核酸技术领域

【技术实现步骤摘要】
一种药用核酸及其生产工艺


[0001]本专利技术属于药用核酸
，具体涉及一种药用核酸及其生产工艺
。

技术介绍

[0002]目前已有多种方法用来生产抗传染性病原体的疫苗，如灭活疫苗，减毒活疫苗
、
重组疫苗
、
亚单位疫苗和核酸疫苗等
。
它们的基本作用原理是相同的，即借助与病原体结合的靶蛋白激发免疫反应，达到免疫个体不被传染性病原体感染的目的
。
当个体与传染性病原体接触时，其免疫系统能够识别病原体蛋白而产生有效的保护反应抵抗传染
。
目前所用的许多疫苗就是由从病原体中分离出来的非传染性和低传染性的蛋白或核酸物质所组成
。
核酸疫苗的优点在于可以激活体液免疫反应和细胞免疫反应，而更有效地激发保护性和清除性的免疫反应，达到防治病原体感染，抗肿瘤，同时核酸疫苗制备方便，成本低廉，安全性好
。
[0003]核酸疫苗要在生物机体中得到很好的表达，必须配合载体或佐剂
。
水凝胶的物理性质十分利于药物递送，能够实现包载药物的持续释放
。
通过合适的释放机制，水凝胶能在长时间内维持局部的高药物浓度，释放机制可以基于扩散
、
溶胀
、
化学或者其他环境刺激等
。
然而，目前以海藻酸钠盐或明胶等天然来源所合成的传统水凝胶聚合物，无法有效监控水凝胶载药系统在生物体内的核酸药物有效释放过程，不具备良好的生物相容性和生物降解能力，且对各种刺激的特异性响应能力较差
。
因此亟需一种药用核酸疫苗组合物解决上述问题
。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供一种药用核酸及其生产工艺，其药用核酸疫苗以水凝胶为载体，以解决现有技术中药用核酸疫苗生物相容性较差，无法有效监控水凝胶载药系统在生物体内的核酸药物有效释放过程
、
对刺激的响应能力较差的问题
。
[0005]本专利技术的目的可以通过以下技术方案实现：
[0006]一种药用核酸，包括银纳米簇复合水凝胶
、
核酸疫苗和注射用水
。
[0007]进一步的，所述银纳米簇复合水凝胶
、
核酸疫苗
、
注射用水用量比为6‑
8g
：1‑
2g
：
10
‑
15mL。
[0008]进一步的，所述银纳米簇复合水凝胶由以下步骤制成：
[0009]S1.
将
D
型
Fmoc
‑
Phe
凝胶因子溶解于的磷酸钠
‑
亚磷酸氢钠缓冲溶液中，在
70℃
水浴中超声，使得
D
型
Fmoc
‑
Phe
凝胶因子充分溶解，溶解后移除水浴
。
[0010]S2.
快速加入
AgNO3溶液，滴加
NaOH
调节
pH
至弱碱性
(pH
＝
7.4)
，再加入牛血清白蛋白
(BSA)
，室温搅拌
2.5
‑
3h
，加入冰水浴条件下制备
NaBH4溶液后，搅拌
(200
‑
300rpm)
均匀，室温孵育
1.5
‑
2h
后即得具有荧光效应的银纳米簇复合水凝胶
。
[0011]进一步的，所述
D
型
Fmoc
‑
Phe
凝胶因子与
BSA
的用量质量比为3：
20。
[0012]进一步的，所述
AgNO3溶液
、NaOH
溶液浓度分别为
0.3M、0.15M。
[0044][0045][0046]从表1中的数据可以看出，使用实施例2和3的核酸疫苗组合物后小鼠乳腺癌细胞增殖活性明显低于质粒对照组和空白对照组，说明本专利技术获得的核酸疫苗组合物对小鼠乳腺癌细胞增殖具有抑制作用
。
[0047]对比例1[0048]按照中国专利
CN109079153A
所述一种含银纳米颗粒的超分子水凝胶制备方法制备含银纳米颗粒的超分子水凝胶，将其与实施例1所合成的银纳米簇复合水凝胶一同用
MTT
法进行细胞毒性测试：
[0049]在
96
孔培养皿中以1×
106人乳腺癌
MDA
‑
MB
‑
231
细胞
/mL
的密度培养
100
μ
L
人乳腺癌
MDA
‑
MB
‑
231
细胞
。
铺展并合并过夜，在
37℃
下，在含有5％
CO2的潮湿气氛中，分别与实施例1及对比例1中合成的水凝胶共同孵育
48h
，然后向每个孔中加入
25
μ
L MTT(5mg/mL)
，然后放置于培养箱中再孵3小时，最后离心以除去上清液
。
向每个孔中加入
150
μ
L
二甲基亚砜，在摇床上低速振摇
10min
以溶解晶体并终止最终反应，使用酶联免疫法
OD
测定每个孔在
530nm
处的吸收并计算细胞存活率，其中水凝胶的浓度分别为1μ
g/mL、5
μ
g/mL、20
μ
g/mL、50
μ
g/mL、100
μ
g/mL
和
500
μ
g/mL。
细胞活力定义为水凝胶
(Atest)
存在下的吸光度与无水凝胶
(Acontrol)
时的吸光度之比
。
实验结果如表2所示：
[0050]表2[0051][0052][0053]由表可知，随着水凝胶的浓度从1到
500
μ
g/mL
的变化，实施例1的浓度均保持较好的生物活性，且存在上升趋势，说明其具有潜在的促进细胞增殖能力，
D
型
Fmoc
‑
Phe
凝胶因子与
BSA
具有协同增强复合载体生物相容性的能力；对比例1的细胞活性随着浓度的增大逐
渐降低，证明抗坏血酸还原法合成的银纳米粒子具有一定的生物毒性
。
[0054]需要说明的是，在本文中，诸如第一和第二等之类的关系术语仅仅用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来，而不一定要求或者暗示这些实体或操本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种药用核酸，其特征在于，包括银纳米簇复合水凝胶
、
核酸疫苗和注射用水，所述银纳米簇复合水凝胶
、
核酸疫苗
、
注射用水用量比为6‑
8g
：1‑
2g
：
10
‑
15mL。2.
根据权利要求1所述的一种药用核酸，其特征在于，所述银纳米簇复合水凝胶通过以下步骤制成：将
D
型
Fmoc
‑
Phe
凝胶因子溶解于的磷酸钠
‑
亚磷酸氢钠缓冲溶液中，在
70℃
水浴中超声，使得
D
型
Fmoc
‑
Phe
凝胶因子充分溶解，溶解后移除水浴；快速加入
AgNO3溶液，滴加
NaOH
，再加入
BSA
，室温搅拌
2.5
‑
3h
，加入
NaBH4溶液后，搅拌均匀，室温孵育
1.5
‑
2h
即制得
。3.
根据权利要求2所述的一种药用核酸，其特征在于，所述
D
型
Fmoc
‑
Phe...

【专利技术属性】
技术研发人员：雍金贵，刘宗文，刘奇，高恩，钱鑫，
申请(专利权)人：安徽瑞拜药业有限公司，
类型：发明
国别省市：