【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物，具体涉及一种核酸提取工艺。
技术介绍
1、核酸提取是整个核酸检测技术流程的第一步，也是分子生物学中关键的方法之一。它是下游核酸检测和科学研究的基础，抽提的核酸的质量和其完整性会直接影响临床研究或诊断结果，核酸的提取一般包括两步：病毒的裂解和核酸的纯化。传统的核酸分离需要乙醇沉淀、氯仿萃取、离心分离、层膜析出、清晰、富集等操作，其步骤繁琐、耗时费力，而分离效果及效率并不理想。磁性微珠在核酸分离中的应用，加快了核酸富集分离的自动化程度，提高了分离效果和效率，大大降低了其他物质对核酸的分离干扰，对推进核酸快速富集分离提取技术的发展起到了积极的作用。目前磁珠纯化技术正在朝着全自动操作，提取和分离样本多样化、系统化方向发展。国产化磁珠的研制成功必将大幅度提高生物学科研工作效率、推动生物学科研究和产业化快速发展。
2、这些方法在实际运用时都面临着一系列问题：操作繁琐，对测试员要求高；多次重复开盖的操作，增加了形成病毒气溶胶的机率，加大了测试员被感染的风险。此类临床样本的核酸提取需要在特定防护级别的专用实验室中进行，并要求操作者佩戴全套符合标准的防护装备，从而大大增加了核酸提取和分析的复杂性、成本和时间，也意味着此类操作不适合在小医院、诊所、社区及家庭环境下进行，不能用于快速、大规模的疾病筛查。因此，目前提取核酸的工艺依旧存在核酸提取工艺复杂、提取纯度低、收率低、成本高等问题。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种核酸提取工艺，以解决核酸提取工艺中提取的
2、本专利技术的目的可以通过以下技术方案实现：
3、本专利技术提供一种核酸提取工艺，包括以下步骤：
4、步骤1、裂解与结合：将核酸样品加入离心管中，加入裂解液，混合混匀，65-80℃保温20-30min；加入磁珠，混合均匀，结合8-10min，通过磁力作用使离心管内磁珠紧贴于离心管壁，吸弃离心管内溶液；
5、步骤2、清洗：在离心管内加入洗涤液，充分混匀，清洗磁珠，通过磁力作用使离心管内磁珠紧贴于离心管壁，吸弃离心管内溶液；
6、步骤3、洗脱：在离心管内加入洗脱液，充分混匀，加热至55-60℃，洗脱3-5min，使核酸从磁珠表面解吸附并进入洗脱液中，通过磁力作用使离心管内磁珠紧贴于离心管壁，转移洗脱液至新的离心管内，即为提取好的核酸；
7、其中，所述磁珠通过如下步骤制备：
8、s1、将na2b4o7和na2co3加入去离子水中，n2鼓泡0.5h，加入2-甲基丙烯酸酐、盐酸多巴胺和四氢呋喃，调节ph为7-9，n2氛围下搅拌，洗涤，调节ph至2-2.5，萃取、干燥、旋蒸、重结晶，干燥得到多巴胺-甲基丙烯酰胺；
9、s2、密封体系下，将kh-570接枝fe3o4纳米粒子、多巴胺-甲基丙烯酰胺和引发剂加入去离子水中，超声分散，调节ph为8-9，通惰性气体0.5h，加热至60-80℃，n2氛围下反应，敞开体系终止反应，离心、过滤、洗涤，真空干燥至恒重，得到双亲性fe3o4纳米粒子，即为所述磁珠。
10、优选地，步骤2中清洗次数为2-4次。
11、优选地，所述引发剂为过硫酸钾、过硫酸铵和偶氮二异丁腈中的一种。
12、优选地，所述磁珠制备过程中，s1中na2b4o7、na2co3、去离子水、2-甲基丙烯酸酐、盐酸多巴胺和四氢呋喃的用量比为1g：0.4g：30ml：0.5ml：0.5g：10ml。
13、优选地，所述磁珠制备过程中，s2中kh-570接枝fe3o4纳米粒子、多巴胺-甲基丙烯酰胺、引发剂和去离子水的用量比为1g：0.8-1：0.6-1g：30ml。
14、优选地，所述磁珠制备过程中，s2中kh-570接枝fe3o4纳米粒子通过如下步骤制备：
15、将硅烷偶联剂kh-570加入无水乙醇/水混合溶液，调节ph为3.5-4，温度为30-40℃，超声水解，得到硅烷偶联剂kh-570水解液；将fe3o4纳米粒子加入无水乙醇/水混合溶液中，超声分散，加入硅烷偶联剂kh-570水解液，加热60-80℃搅拌，离心、过滤、洗涤、干燥，得到kh-570接枝fe3o4纳米粒子。
16、优选地，硅烷偶联剂kh-570和无水乙醇/水混合溶液的用量比为0.5-1g：50ml；fe3o4纳米粒子、无水乙醇/水混合溶液、硅烷偶联剂kh-570水解液的用量比为2g：160ml：20ml。
17、本专利技术的有益效果：
18、本专利技术采用具有超顺磁性和磁场定向移动特性fe3o4纳米粒子，在其表面接枝了硅烷偶联剂kh-570增强了其分散性能，再与亲水性多巴胺-甲基丙烯酰胺进行共聚反应，增强了fe3o4纳米粒子的亲水性能，提高抗蛋白吸附性能，具有良好的化学稳定性不易脱落、赋予了其抗污染性能，并且延长了使用寿命和减少核酸提取工艺的经济成本。
19、本专利技术采用核酸提取工艺，具有高质量、高通量的优点，大大地减少了非特异性吸附、加快核酸提取速度，过程自动化避免了复杂的人工提取，减少酚类、氯仿等有机试剂带来对危害，安全无毒，灵敏度高，提取的核酸纯度高，浓度大，符合环保理念。
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1.一种核酸提取工艺，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种核酸提取工艺，其特征在于，步骤2中清洗次数为2-4次。
3.根据权利要求1所述的一种核酸提取工艺，其特征在于，所述引发剂为过硫酸钾、过硫酸铵和偶氮二异丁腈中的一种。
4.根据权利要求1所述的一种核酸提取工艺，其特征在于，所述磁珠制备过程中，S1中Na2B4O7、Na2CO3、去离子水、2-甲基丙烯酸酐、盐酸多巴胺和四氢呋喃的用量比为1g：0.4g：30mL：0.5mL：0.5g：10mL。
5.根据权利要求1所述的一种核酸提取工艺，其特征在于，所述磁珠制备过程中，S2中KH-570接枝Fe3O4纳米粒子、多巴胺-甲基丙烯酰胺、引发剂和去离子水的用量比为1g：0.8-1：0.6-1g：30mL。
6.根据权利要求1所述的一种核酸提取工艺，其特征在于，所述磁珠制备过程中，S2中KH-570接枝Fe3O4纳米粒子通过如下步骤制备：
7.根据权利要求6所述的一种核酸提取工艺，其特征在于，硅烷偶联剂KH-570和无水乙醇/水混合溶液的用量比为
...【技术特征摘要】
1.一种核酸提取工艺，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种核酸提取工艺，其特征在于，步骤2中清洗次数为2-4次。
3.根据权利要求1所述的一种核酸提取工艺，其特征在于，所述引发剂为过硫酸钾、过硫酸铵和偶氮二异丁腈中的一种。
4.根据权利要求1所述的一种核酸提取工艺，其特征在于，所述磁珠制备过程中，s1中na2b4o7、na2co3、去离子水、2-甲基丙烯酸酐、盐酸多巴胺和四氢呋喃的用量比为1g：0.4g：30ml：0.5ml：0.5g：10ml。
5.根据权利要求1所述的一种核酸提取工艺，其...
【专利技术属性】
技术研发人员：雍金贵，刘宗文，刘奇，高恩，钱鑫，
申请(专利权)人：安徽瑞拜药业有限公司，
类型：发明
国别省市：
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