PRRSV制造技术

本发明专利技术公开了一种

【技术实现步骤摘要】
PRRSV蛋白酶抑制剂的筛选方法和抑制效果评价方法


[0001]本专利技术涉及生物医药
，特别涉及一种
PRRSV
蛋白酶抑制剂的筛选方法和抑制效果评价方法
。

技术介绍

[0002]猪繁殖与呼吸系统综合征
(Porcine reproductive and perspiratory syndrome
，
PRRS)
是由猪繁殖与呼吸系统综合征病毒
(Porcine reproductive and perspiratory syndrome virus
，
PRRSV)
感染引起的一种高度接触性传染病，俗称猪蓝耳病
。
猪蓝耳严重危害养殖业的发展
。
[0003]猪蓝耳病病毒
(PRRSV)
属于套病毒目动脉炎病毒科动脉炎病毒属，为不分节段
、
有囊膜的单股正链
RNA
病毒
。PRRSV
非结构蛋白
NSP4
具有r/>3C
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种
PRRSV
蛋白酶抑制剂的筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）构建共表达改造的
GFP
和
PRRSV NSP4
蛋白酶的质粒，所述改造的
GFP
为在野生型
GFP
上插入
PRRSV NSP4
蛋白酶切割序列而成；（2）筛选：将待转染细胞铺于多孔板中，然后加入共表达改造的
GFP
和
PRRSV NSP4
蛋白酶的质粒进行转染，对转染后的细胞进行培养，同时向多孔板中添加不同组的待筛选抑制剂，以不添加待筛选抑制剂的为对照，观察细胞状态及荧光拍照，并检测荧光强度；若与对照相比荧光强度增加，则表示待筛选抑制剂具有抑制效果，荧光强度增加越多则代表待筛选抑制剂的抑制效果越强
。2. 根据权利要求1所述的筛选方法，其特征在于，
PRRSV NSP4
蛋白酶切割序列在野生型
GFP
氨基酸序列上的插入位点包括位点
A、
位点
C
和位点
D
；位点
A
为野生型
GFP
氨基酸序列第
158~159
位氨基酸，或与野生型
GFP
氨基酸序列相比具有
99%
以上序列一致性的氨基酸序列上对应的氨基酸区域；位点
C
为野生型
GFP
氨基酸序列第
159~160
位氨基酸，或与野生型
GFP
氨基酸序列相比具有
99%
以上序列一致性的氨基酸序列上对应的氨基酸区域；位点
D
为野生型
GFP
氨基酸序列第
170~171
位氨基酸，或与野生型
GFP
氨基酸序列相比具有
99%
以上序列一致性的氨基酸序列上对应的氨基酸区域；所述野生型
GFP
氨基酸序列见
SEQ ID No.1
所示
。3. 根据权利要求1或2所述的筛选方法，其特征在于，
PRRSV NSP4
蛋白酶切割序列包括
cut1、cut2、cut3
，
cut1
氨基酸序列为
SLLEGAFR
，
cut2
氨基酸序列为
FQLEGRYF
，
cut3
氨基酸序列为
KDKTAYFQLEGRHFTW。4. 根据权利要求3所述的筛选方法，其特征在于，位点
A
上插入的
PRRSV NSP4
蛋白酶切割序列为
cut1
；位点
C
上插入的
PRRSV NSP4
蛋白酶切割序列为 cut1
；位点
D
上插入的
PRRSV NSP4
蛋白酶切割序列为 cut...

【专利技术属性】
技术研发人员：方晨捷，孙慧敏，陈瑞婷，李晓雨，宋家升，
申请(专利权)人：杭州百裕生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：