FIPV制造技术

本发明专利技术公开了一种

【技术实现步骤摘要】
FIPV蛋白酶抑制剂的筛选方法和抑制效果评价方法


[0001]本专利技术涉及生物医药
，特别涉及一种
FIPV
蛋白酶抑制剂的筛选方法和抑制效果评价方法
。

技术介绍

[0002]猫传染性腹膜炎（
FIP
）在猫的每个年龄段都有可能发生，其中3个月到3岁之间多发，主要原因是母源抗体的失效
。
而
10
岁以上的老年猫也多发
FIP
，这与免疫功能不佳有关
。FIP
潜伏期几周至几年不等，不易察觉
。
统计发现，一般在家庭中饲养的猫有
25%~40%
为冠状病毒阳性
。
而在大型猫舍或是繁殖猫舍中，阳性的几率达到
80%~100%。FIP
通常根据胸腹腔是否有渗出液可分为湿性和干性两种类型，其临床症状主要为持续性发烧
、
食欲减退
、
嗜睡
、
体重下降等
。
病程发展到2周甚至3个月后，患病猫多数死亡
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种
FIPV
蛋白酶抑制剂的筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）构建共表达改造的
GFP
和
FIPV 3CL
蛋白酶的质粒，所述改造的
GFP
为在野生型
GFP
上插入
FIPV 3CL
蛋白酶切割序列而成；（2）筛选：将待转染细胞铺于多孔板中，然后加入共表达改造的
GFP
和
FIPV 3CL
蛋白酶的质粒进行转染，对转染后的细胞进行培养，同时向多孔板中添加不同组的待筛选抑制剂，以不添加待筛选抑制剂的为对照，观察细胞状态及荧光拍照，并检测荧光强度；若与对照相比荧光强度增加，则表示待筛选抑制剂具有抑制效果，荧光强度增加越多则代表待筛选抑制剂的抑制效果越强
。2. 根据权利要求1所述的筛选方法，其特征在于，
FIPV 3CL
蛋白酶切割序列在野生型
GFP
氨基酸序列上的插入位点包括位点
A
和位点
C
；位点
A
为野生型
GFP
氨基酸序列第
158~159
位氨基酸，或与野生型
GFP
氨基酸序列相比具有
99%
以上序列一致性的氨基酸序列上对应的氨基酸区域；位点
C
为野生型
GFP
氨基酸序列第
159~160
位氨基酸，或与野生型
GFP
氨基酸序列相比具有
99%
以上序列一致性的氨基酸序列上对应的氨基酸区域；所述野生型
GFP
氨基酸序列见
SEQ ID No.1
所示
。3. 根据权利要求1或2所述的筛选方法，其特征在于，
FIPV 3CL
蛋白酶切割序列包括
cut1、cut2
，
cut1
氨基酸序列为
STLQSGLR
，
cut2
氨基酸序列为
VNLQSGKV。4. 根据权利要求3所述的筛选方法，其特征在于，位点
A
上插入的
FIPV 3CL
蛋白酶切割序列为
cut1
或
cut2
；位点
C
上插入的
FIPV 3CL
蛋白酶切割序列为 cut1。5. 一种共表达改造的
...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙慧敏，欧阳歆，方晨捷，张华丰，宋家升，
申请(专利权)人：杭州百裕生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：