凋亡囊泡用于制备治疗哺乳动物视网膜新生血管药物的应用制造技术

本发明专利技术公开了凋亡囊泡用于制备治疗哺乳动物视网膜新生血管药物的应用，所述的凋亡囊泡由凋亡的脱落乳牙牙髓干细胞分泌得到；且所述的凋亡囊泡表达

【技术实现步骤摘要】
凋亡囊泡用于制备治疗哺乳动物视网膜新生血管药物的应用


[0001]本专利技术属于细胞治疗及再生医学领域，尤其涉及凋亡囊泡用于制备治疗哺乳动物视网膜新生血管药物的应用
。

技术介绍

[0002]视网膜新生血管
(retinal neovascularization,RNV)
是众多疾病如早产儿视网膜病变
(retinopathy of prematurity,ROP)、
糖尿病性视网膜病变
(diabetic retinopathy,DR)、
视网膜静脉阻塞
(retinal vein occlusions,RVO)
等发生的共同病理改变，其造成的渗出
、
出血和增生等一系列变化最终会导致视力丧失的严重后果
。
目前，
RNV
的常用临床疗法为抗血管内皮生长因子
(vascular endothelial growth factor,VEGF)
治疗
。
虽然此药物可在一定程度上缓解患者症状，但仍存在响应率不高
、
易发生耐药
、
伴随局部与全身并发症等缺点，注射频繁
、
成本高和治疗抵抗等问题仍未得到解决
。
因此，临床上迫切需要开发新的治疗方法
。
[0003]人脱落乳牙牙髓干细胞
(stem cells from human exfoliated deciduous teeth,SHED)
是一种从人脱落乳牙牙髓中分离培养出的间充质干细胞
(mesenchymal stem cells,MSCs)
，具有更强的增殖与多向分化能力
。
此外，
SHED
可分泌细胞因子和趋化因子，有利于调节血管生成
、
抵抗炎症
。
在发育生物学中，
SHED
与眼部细胞共同来源于神经嵴细胞，且能够在特定条件下分化为
CD31
+
内皮细胞
。
与主要从人骨髓中获得的
MSCs
相比，
SHED
具有来源丰富
、
取材安全方便
、
免疫原性低
、
尚无伦理限制等优点，成为一种潜在的生物制剂
。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的是提供
PD1
+
apoVs
用于制备治疗哺乳动物视网膜新生血管药物的应用，以期达到对视网膜新生血管的良好治疗效果
。
[0005]为达到上述目的，本专利技术实施例采用如下技术方案：
[0006]凋亡囊泡用于制备治疗哺乳动物视网膜新生血管药物的应用
。
[0007]可选的，所述的凋亡囊泡由凋亡的
SHED
分泌得到；且所述的凋亡囊泡表达
PD1
；所述的凋亡囊泡的直径为
150
～
200nm。
[0008]可选的，所述凋亡囊泡由以下方法制备而成：
[0009]S1
：将
SHED
进行传代培养后，加入星孢菌素溶液诱导细胞凋亡，
12
～
16h
后收集上清液；
[0010]S2
：将步骤
S1
中所述上清液经差速离心后获得凋亡囊泡沉淀
。
[0011]可选的，
S1
中：
[0012]所述
SHED
由第3‑5代的
SHED
培养而成；
[0013]传代培养的培养液组分为：
500
份体积的
α
‑
MEM
基础培养基
、55.5
份体积的胎牛血清
、
浓度为
100U/mL
的青霉素和浓度为
100U/mL
的链霉素
。
[0014]传代培养的培养环境为：
37℃、
体积比为5％的
CO2；培养密度为：按六孔板每孔2×
teeth,SHED)
起源于神经嵴，具有高度再生潜能，一方面可通过旁分泌的作用调控血管形成，另一方面也可通过自组装的方式形成血管结构
。
目前研究表明，移植外源性
SHED
可以治疗视网膜变性
。
此外，
SHED
在移植
48h
后出现大量凋亡，其在凋亡状态下分泌的凋亡囊泡
(apoptotic extracellular vesicles,apoVs)
被认为是发挥治疗作用的主要原因
。ApoVs
是对凋亡细胞产生囊泡的总称，包含多种核酸，蛋白质与脂质等，参与机体免疫调控，血管改建，细胞增殖与凋亡等多种重要生命活动
。
与
SHED
相比，
apoVs
性质更稳定，保存运输方便
、
没有移植细胞带来的免疫排斥反应和肿瘤形成风险
。
因此，本专利技术为视网膜新生血管患者提供了有效的生物治疗手段
。
[0036]多项研究证明，程序性死亡受体
1(programmed cell death protein 1,PD1)
与程序性死亡配体
1(programmed cell death protein 1ligand 1,PD
‑
L1)
结合可对血管内皮细胞的增殖
、
迁移与管腔形成能力产生重要影响
。
据文献报道，
SHED
表达
PD1
，并可能是唯一表达
PD1
的间充质干细胞
。
本专利技术证明，
SHED
‑
apoVs
同样存在
PD1
表达，并对血管形成与改建产生重要影响
。
[0037]本专利技术公开了
PD1
+
apoVs
用于制备治疗视网膜新生血管药物的应用，即
SHED
来源的
PD1
+
apoVs
，该
apoVs
由体外培养的
SHED
加星孢菌素诱导凋亡，收集上清，
800g
离心
10min
，
16000g
离心
30min
收集沉淀所得
。
同时本专利技术对该
PD1
+
apoVs
的使用方法进行了详细说明，为临床开展视网膜新生血管治疗提供扎实的前期临床基础
。
[0038]本专利技术第一方面，提供一种凋亡囊泡本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
凋亡囊泡用于制备治疗哺乳动物视网膜新生血管药物的应用
。2.
根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的凋亡囊泡由凋亡的脱落乳牙牙髓干细胞
(stem cells from human exfoliated deciduous teeth,SHED)
分泌得到；且所述的凋亡囊泡表达
PD1
；所述的凋亡囊泡的直径为
150
～
200nm。3.
根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述凋亡囊泡由以下方法制备而成：
S1
：将
SHED
进行传代培养后，加入星孢菌素溶液诱导细胞凋亡，
12
～
16h
后收集上清液；
S2
：将步骤
S1
中所述上清液经差速离心后获得凋亡囊泡沉淀
。4.
根据权利要求3所述的应用，其特征在于，
S1
中：所述
SHED
由第3‑5代的
SHED
培养而成；传代培养的培养液组分为：
500
份体积的
α
‑
MEM
基础培养基
、55.5
份体积的胎牛血清
、
浓度为
100U/mL
的青霉素和浓度为
100U/mL
的链霉素
。
传代培养的培养环境为：
37℃、
体积比为5％的
CO2；培养密度为：按六孔板每孔2×
105个细胞的密度接种培养；培养至细胞融合度为
80
％～
85
％；所述的星孢菌素溶液的溶...

【专利技术属性】
技术研发人员：李蓓，窦国睿，荆羽彤，王文哲，赵万民，
申请(专利权)人：中国人民解放军空军军医大学，
类型：发明
国别省市：