一种细胞外泌体组合物制造技术

本发明专利技术公开了一种细胞外泌体组合物

【技术实现步骤摘要】
一种细胞外泌体组合物、细胞外泌体冻干粉和应用


[0001]本专利技术涉及生物细胞
，尤其是涉及一种细胞外泌体组合物
、
细胞外泌体冻干粉和应用
。

技术介绍

[0002]外泌体是细胞特异性分泌的囊泡，其直径在
40
‑
200nm
左右，所有培养的细胞类型均可分泌外泌体
。
由于其可参与细胞间通讯
、
机体免疫应答
、
抗原提呈
、
细胞迁移
、
细胞分化
、
肿瘤侵袭等方方面面，目前已成为细胞治疗研究的热门
。
[0003]外泌体具有双层膜结构，包含许多复杂的
RNA(6246
种
)
和蛋白质
(41860
种
)
，其中多种蛋白是外泌体发挥其生物学功能优势的重要原因，例如外泌体中含有
40
种
RAB
蛋白，其可以调节外泌体膜与受体细胞的融合，多种膜联蛋白具有外泌体膜交换以及融合作用，此外外泌体膜上富含参与外泌体运输的四跨膜蛋白家族
、
热休克蛋白家族等，其已成为外泌体定性检测的重要标志物
。
[0004]由于外泌体成分复杂且具有不同亚型，故对纯化收集
、
鉴定
、
储存等都带来了一定的挑战，有研究表明目前外泌体制品的最佳存储条件为
‑
80℃
，但能维持其活性不变的时间较短，对环境要求也较为苛刻，其存储保质期会受到细胞来源
、
纯化工艺
、
产品参数等多种不同因素的影响而变得极难控制
。
[0005]因此有必要提供一种新的细胞外泌体，使得其具有长的存储时间
。

技术实现思路

[0006]本专利技术旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一
。
为此，本专利技术第一方面提出一种细胞外泌体组合物，能够有效提高其制备成冻干粉的存储时间
。
[0007]本专利技术第二方面还提供一种细胞外泌体冻干粉
。
[0008]本专利技术第三方面还提供一种细胞外泌体组合物或细胞外泌体冻干粉的应用
。
[0009]根据本专利技术的第一方面实施例提供的细胞外泌体组合物，包括如下重量百分比的组分：
[0010]细胞外泌体原液
40
％～
80
％；
[0011]冻干保护剂
0.05
％～2％；
[0012]赋形剂
0.5
～8％；
[0013]水：余量；
[0014]其中，所述细胞外泌体组合物中的总蛋白质浓度为5～
45mg/mL
；所述细胞外泌体组合物中的颗粒浓度为
2.0
×
10
10
Particles/mL
～
1.0
×
10
13
Particles/mL。
[0015]根据本专利技术实施例的细胞外泌体组合物，至少具有如下有益效果：
[0016]本专利技术以细胞外泌体原液
、
冻干保护剂和赋形剂作为细胞外泌体组合物成分，通过控制细胞外泌体组合物中的总蛋白质浓度为5～
45mg/mL
；细胞外泌体组合物中的颗粒浓度为
2.0
×
10
10
Particles/mL
～
1.0
×
10
13
Particles/mL
在上述范围内时，通过冷冻干燥后
制备的细胞外泌体冻干粉具有长的存储时间，且在长期的存储时间内其质量不会降低
。
细胞外泌体原液具有很低的离子强度，以更好的防止蛋白活性的损失；避免引入杂质
(
蛋白
)
使得冻干后的外泌体纯度降低，水溶后外泌体质量变差
。
[0017]根据本专利技术的一些实施例，所述细胞外泌体组合物中的总蛋白质浓度为
10
～
30mg/mL。
[0018]根据本专利技术的一些实施例，所述细胞外泌体组合物中的颗粒浓度为
1.0
×
10
11
Particles/mL
～
5.0
×
10
12
Particles/mL。
[0019]根据本专利技术的一些实施例，所述颗粒是指粒径在
40
～
200nm
范围内的颗粒
。
[0020]根据本专利技术的一些实施例，本专利技术的蛋白质浓度的测试方法如下所示：
[0021]1.
配制工作液：根据标准品和样品数量，配制成
BCA
工作液，充分混匀
。
[0022]2.
稀释标准品：取
BSA
标准品用
PBS
稀释
。
将标准品按不同浓度加到
96
孔板的蛋白标准品孔中
。
[0023]3.
将样品作适当稀释，并做多个浓度梯度，加
20
微升到
96
孔板的样品孔中
。
[0024]4.
各孔加入
BCA
工作液，
37℃
放置；用酶标仪测定
A562nm
，根据标准曲线计算出蛋白浓度
。
[0025]根据本专利技术的一些实施例，本专利技术所述颗粒浓度通过如下方法测试：
[0026]采用激光光源照射纳米颗粒悬浮液，并对纳米颗粒的散射光进行检测，通过统计散射颗粒的数量来计算纳米颗粒浓度
。
即用粒子矩阵
ZetaView PMX 110
在
405nm
发射光下将分离得到的外泌体进行浓度测定，用
PBS
稀释外泌体至
1x10
7 Particles/mL
～
1x10
9 Particles/mL
，并对其大小及质量进行测定
。
[0027]根据本专利技术的一些实施例，所述冻干保护剂选自蔗糖
、
乳糖
、
海藻糖
、
吐温
80、
甘氨酸中的至少一种
。
[0028]根据本专利技术的一些实施例，所述赋形剂选自山梨醇
、
甘露醇
、
肌醇
、
乙二醇
、
右旋糖酐
、
脯氨酸或赖氨酸中的至少一种
。
[0029]根据本专利技术的一些实施例，所述外泌体原液通过如下方法制备：
[0030]S100、
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种细胞外泌体组合物，其特征在于，包括如下重量百分比的组分：细胞外泌体原液
40
％～
80
％；冻干保护剂
0.05
％～2％；赋形剂
0.5
～8％；水：余量；其中，所述细胞外泌体组合物中的总蛋白质浓度为5～
45mg/mL
；所述细胞外泌体组合物中的颗粒浓度为
2.0
×
10
10
Particles/mL
～
1.0
×
10
13
Particles/mL。2.
根据权利要求1所述的细胞外泌体组合物，其特征在于，所述细胞外泌体组合物中的总蛋白质浓度为
10
～
30mg/mL。3.
根据权利要求1所述的细胞外泌体组合物，其特征在于，所述细胞外泌体组合物中的颗粒浓度为
1.0
×
10
11
Particles/mL
～
5.0
×
10
12
Particles/mL。4.
根据权利要求1所述的细胞外泌体组合物，其特征在于，所述冻干保护剂选自蔗糖
、
乳糖
、
海藻糖
、
吐温
80、
甘氨酸中的至少一种
。5.
根据权利要求1所述的细胞外泌体组合物，其特征在于，所述赋形剂选自山梨醇
、
甘露醇
、
肌醇
、
乙二醇
、
右旋糖酐
、
脯...

【专利技术属性】
技术研发人员：袁润泽，柴茜，曹毓琳，李伟，刘凤姣，滕睿頔，
申请(专利权)人：唐颐控股深圳有限公司，
类型：发明
国别省市：