一种造血干细胞体外扩增培养体系及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种造血干细胞体外扩增培养体系及其应用；所述培养体系中包括中药成分和细胞因子，所述中药成分包括人参皂苷

【技术实现步骤摘要】
一种造血干细胞体外扩增培养体系及其应用


[0001]本专利技术属于细胞培养
，具体涉及一种造血干细胞体外扩增培养体系及其应用
。

技术介绍

[0002]目前脐血来源的造血干细胞临床治疗因其免疫原性低，配型要求低，被越来越多的临床治疗青睐
。
但是，因为脐血来源的造血干细胞的数量有限，而使其治疗范围十分受限
。
目前脐血来源的造血干细胞治疗因造血干细胞数量有限，其受众局限于幼儿和青少年等体重较轻的患者
。
已有部分用小分子化合物刺激的体外扩增脐血来源的造血干细胞的研究，以期克服造血干细胞数量少的应用瓶颈，目前进入临床阶段的主要小分子化合物是
SR1、UM171
和
NAM(
烟酰胺
)
，但是小分子化合物对细胞刺激较强，体外扩增后的造血干细胞移植后其体内长期造血能力显著低于新鲜分离的脐血造血干细胞
。
[0003]现有的培养体系中存在以下问题：
(1)
造血干细胞体外扩增培养过程中干性急剧丢失的问题
(2)
含血清培养基培养造血干细胞会增加引入动物源性杂质和污染风险
(3)
小分子化合物促进造血干细胞扩增后对造血干细胞刺激较大，可能使得其变性，且体内长期造血能力降低
。
[0004]血液疾病往往涉及全身各组织或脏腑，呈现系统性病变，其症状与元气亏虚较为符合
。
再生障碍性贫血
(aplastic anemia
，
AA)
以骨髓有核细胞增殖低下而导致红骨髓容量减少
、
脂肪组织增多等为主要症状，是由多种病因和发病机制引起的骨髓造血功能衰竭
、
全血细胞减少的恶性肿瘤
。
白血病死亡率较高，截至目前造血干细胞移植
(HSCT)
是彻底治愈
AA
的唯一有效方法
。
中医将
AA
命名为“髓劳病”，指因先
、
后天不足，精血生化无源，或因外邪入侵导致骨髓瘀阻进而发生气血阴阳虚损，最终导致五脏功能失调以及血不循经的出血等症状
。《
素问
·
通评虚实论
》
指出髓劳的原因为“精气夺则虚”。《
医宗必读
》
则指出：“夫人之虚，不属于气，即属于血，五脏六腑莫能外焉”。
龚恒佩等系统分析白血病的中医药治疗规律，发现补虚药使用频率最高，表明白血病的本质即为“虚”，以气
、
血
、
津
、
液等的虚损为代表
。
[0005]因此本专利技术开发了一种不含小分子化合物的，以中药补中益气
、
养血生血的复方制剂为基础的无血清造血干细胞培养体系
。
经过检测，该培养体系既可以实现较好地维持造血干细胞干性，又可以实现造血干细胞体外高效扩增的细胞培养体系
。

技术实现思路

[0006]本专利技术第一方面的目的，在于提供一种培养体系
。
[0007]本专利技术第二方面的目的，在于提供上述培养体系的应用
。
[0008]本专利技术第三方面的目的，在于提供一种包含培养体系的试剂盒
。
[0009]本专利技术第四方面的目的，在于提供一种造血干细胞的体外扩增方法
。
[0010]本专利技术所采取的技术方案是：
[0011]本专利技术的第一方面，提供一种培养体系，所述培养体系包括细胞因子和中药成分，所述细胞因子包括
TPO
：
20
‑
100ng/mL、SCF
：
50
‑
100ng/mL、Flt3
‑
L
：
50
‑
100ng/mL、IL
‑3：5‑
30ng/mL、IL
‑6：
20
‑
60ng/mL、IL
‑
11
：0‑
20ng/mL
和
GM
‑
CSF
：0‑
30ng/mL
；所述中药成分包括人参皂苷
、
三七皂苷
、
熟地
、
当归
、
黄芪中的至少一种
。
[0012]优选地，所述中药成分包括人参皂苷
、
三七皂苷
、
熟地
、
当归
、
黄芪中的至少两种
、
三种
、
四种或五种
。
[0013]优选地，所述中药成分包括人参皂苷
、
三七皂苷
、
熟地和当归
。
[0014]优选地，所述人参皂苷的浓度为0‑
100ng/mL
；和
/
或，所述三七皂苷的浓度为0‑
80ng/mL
；和
/
或，所述熟地的浓度为0‑
60ng/mL
；和
/
或，所述当归的浓度为0‑
120ng/mL
；和
/
或，所述黄芪的浓度为0‑
100ng/mL。
[0015]优选地，所述
TPO
的浓度为
40
‑
80ng/mL
；和
/
或，所述
SCF
的浓度为
60
‑
80ng/mL
；和
/
或，所述
Flt3
‑
L
的浓度为
60
‑
80ng/mL
；和
/
或，所述
IL
‑3的浓度为
10
‑
20ng/mL
；和
/
或，所述
IL
‑6的浓度为
30
‑
50ng/mL
；和
/
或，所述
IL
‑
11
的浓度为5‑
15ng/mL
；和
/
或，所述
GM
‑
CSF
的浓度为
10
‑
20ng/mL。
[0016]优选地，所述人参皂苷的浓度为
50
‑
100ng/mL
；和
/
或，所述三七皂苷的浓度为
60
‑
80ng/mL
；和
/
或，所述熟地的浓度为
40
‑
60ng/mL
；和
/
或，所述当归的浓度为
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种培养体系，所述培养体系包括细胞因子和中药成分，所述细胞因子包括
TPO
：
20
‑
100ng/mL、SCF
：
50
‑
100ng/mL、Flt3
‑
L
：
50
‑
100ng/mL、IL
‑3：5‑
30ng/mL、IL
‑6：
20
‑
60ng/mL、IL
‑
11
：0‑
20ng/mL
和
GM
‑
CSF
：0‑
30ng/mL
；所述中药成分包括人参皂苷
、
三七皂苷
、
熟地
、
当归
、
黄芪中的至少一种
。2.
根据权利要求1所述的培养体系，其特征在于，所述人参皂苷的浓度为0‑
100ng/mL
；所述三七皂苷的浓度为0‑
80ng/mL
；所述熟地的浓度为0‑
60ng/mL
；所述当归的浓度为0‑
120ng/mL
；所述黄芪的浓度为0‑
100ng/mL。3.
根据权利要求2所述的培养体系，其特征在于，所述人参皂苷的浓度为
50
‑
100ng/mL
；所述三七皂苷的浓度为
60
‑
80ng/mL
；所述熟地的浓度为
40
‑

【专利技术属性】
技术研发人员：刘凤姣，赵雨哲，赵崇杰，张皓，曹毓琳，程世翔，
申请(专利权)人：唐颐控股深圳有限公司，
类型：发明
国别省市：