用于储存干细胞的方法技术

本文描述了用于制备用于直接输注的干细胞的样品的方法和系统

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于储存干细胞的方法
[0001]交叉引用
[0002]本申请要求
2020
年
12
月
21
日提交的美国临时申请第
63/128,780
号的权益，该申请通过引用以其整体并入本文中
。

技术介绍

[0003]用实体器官和血管化复合同种异体移植物
(vascular composite allograft)
诱导免疫耐受是移植医学的金标准
。
诱导对不匹配的移植物的免疫耐受将消除对终身免疫抑制的需求，这种终身免疫抑制与严重的不良后果
(
诸如肾衰竭
、
癌症和感染
)
相关联
。
目前，最有希望的耐受性诱导手段是通过经由移植供体造血干细胞而建立混合的嵌合状态；然而，除了耐受原性器官诸如肾脏之外，混合嵌合体方法尚未在使用大多数实体器官或血管化复合同种异体移植物
(vascular composite allotransplant)(VCA)
的临床前试验或临床试验中实现持久的免疫耐受
。
[0004]间充质干
(
基质
)
细胞
(MSC)
已经被鉴定为干细胞移植
(SCT)
的潜在有用的佐剂，用于促进混合嵌合体并促进互补性外周免疫调节功能，以及实体器官移植
(SOT)。
然而，在临床转化这些有希望的治疗性细胞之前，存在许多未解决的问题要解决
>。
主要障碍是
MSC
的来源，
MSC
在所有组织中均罕见并且需要侵入性程序以便获取
。
低丰度要求在培养中广泛扩增，以产生足够的数量用于人类给药
。
在临床环境中已经观察到，扩增的程度与结果负相关
。
已经进一步观察到，
MSC
的冷冻保存
(cryopreservation)
也与结果负相关
。
因此，存在对
MSC
群体的低温
(hypothermic)
储存方法的需求，所述方法保留了它们的存活力而能够实现它们的分布以用于临床有用的应用
。

技术实现思路

[0005]在一个方面，本文提供了一种用于制备用于输注的干细胞的方法，所述方法包括：
(a)
提供包含所述干细胞的冷冻保存的细胞群体；
(b)
将所述干细胞加温至第一温度，并将所述干细胞保持在所述第一温度下持续第一时间段；以及
(c)
将所述第一温度改变到第二温度，并将所述干细胞保持在所述第二温度下持续一时间段
。
[0006]本公开的一个方面是一种用于制备用于输注的干细胞的方法，所述方法包括：提供包含所述干细胞的冷冻保存的细胞群体；将所述干细胞加温至第一温度，并将所述干细胞保持在第一温度下持续第一时间段；以及将第一温度改变到第二温度，并将所述干细胞保持在第二温度下持续一时间段
。
在一些实施方案中，第一温度高于
0℃。
在一些实施方案中，第二温度低于
40℃。
在一些实施方案中，第二温度是低温的
。
在一些实施方案中，所述第一时间段或所述时间段少于一周
。
在一些实施方案中，所述第一时间段或所述时间段少于5天
。
在一些实施方案中，所述第一时间段或所述时间段少于2天
。
在一些实施方案中，所述第一时间段或所述时间段少于1天
。
在一些实施方案中，所述第一时间段或所述时间段少于
12
小时
。
在一些实施方案中，所述第一时间段或所述时间段少于6小时
。
在一些实施方案中，所述第一时间段或所述时间段少于2小时
。
在一些实施方案中，所述方法进一步包括，在提供
包含所述干细胞的冷冻保存的细胞群体之前，对所述干细胞进行传代
。
在一些实施方案中，所述方法进一步包括，在提供包含所述干细胞的冷冻保存的细胞群体之前，将所述干细胞传代至少一次
。
在一些实施方案中，所述方法进一步包括，在提供包含所述干细胞的冷冻保存的细胞群体之前，将所述干细胞传代至少2次
。
在一些实施方案中，所述方法进一步包括，在提供包含所述干细胞的冷冻保存的细胞群体之前，将所述干细胞传代至少4次
。
在一些实施方案中，所述方法进一步包括，在将第一温度改变到第二温度并将所述干细胞保持在第二温度下持续一时间段之前，在第一温度下以约
10,000
个细胞
/cm2
至约
50,000
个细胞
/cm2
培养所述干细胞
。
在一些实施方案中，所述方法进一步包括，在将第一温度改变到第二温度并将干细胞保持在第二温度下持续一时间段之前，在第一温度下以约
32,000
个细胞
/cm2
培养干细胞
。
在一些实施方案中，所述方法进一步包括，在将第一温度改变到第二温度并将干细胞保持在第二温度下持续一时间段之前，将干细胞以包含约
10
×
102
个活细胞
/mL
至约
10
×
1010
个活细胞
/mL
的体积包装，并将干细胞保持在第二温度
。
在一些实施方案中，所述方法进一步包括，在将第一温度改变到第二温度并将干细胞保持在第二温度下持续一时间段之前，将干细胞以包含约
10
×
106
个活细胞
/mL
的体积包装，并将干细胞保持在第二温度
。
在一些实施方案中，所述方法进一步包括，在将第一温度改变到第二温度并将干细胞保持在第二温度下持续一时间段之前，将干细胞以包含小于
10mL、9mL、8mL、7mL
或
6mL
的体积包装
。
在一些实施方案中，所述方法进一步包括，在将第一温度改变到第二温度并将干细胞保持在第二温度下持续一时间段之前，将干细胞以包含
5mL
的体积包装
。
在一些实施方案中，将干细胞保持在第一温度下在包含一种或多种氨基酸的培养基中
。
在一些实施方案中，包含一种或多种氨基酸的培养基进一步包含一种或多种维生素
。
在一些实施方案中，包含一种或多种氨基酸的培养基进一步包含表
1。
在一些实施方案中，第一时间段是其中干细胞未倍增的时间段
。
在一些实施方案中，第一时间段是其中干细胞经历一次或多次群体倍增的时间段
。
在一些实施方案中，在所述第一时间段或所述本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.
一种用于制备用于输注的干细胞的方法，所述方法包括：
a.
提供包含所述干细胞的冷冻保存的细胞群体；
b.
将所述干细胞加温至第一温度，并将所述干细胞保持在所述第一温度下持续第一时间段；以及
c.
将所述第一温度改变到第二温度，并将所述干细胞保持在所述第二温度下持续一时间段
。2.
根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述第一温度高于
0℃。3.
根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述第二温度低于
40℃。4.
根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述第二温度是低温的
。5.
根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述第一时间段或所述时间段少于一周
。6.
根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述第一时间段或所述时间段少于5天
。7.
根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述第一时间段或所述时间段少于2天
。8.
根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述第一时间段或所述时间段少于1天
。9.
根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述第一时间段或所述时间段少于
12
小时
。10.
根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述第一时间段或所述时间段少于6小时
。11.
根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述第一时间段或所述时间段少于2小时
。12.
根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中在
(a)
之前，对所述干细胞进行传代
。13.
根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中在
(a)
之前，将所述干细胞传代至少一次
。14.
根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中在
(a)
之前，将所述干细胞传代至少2次
。15.
根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中在
(a)
之前，将所述干细胞传代至少4次
。16.
根据前述权利要求中任一项所述的方法，进一步包括，在
(c)
之前，在所述第一温度下以约
10,000
个细胞
/cm2至约
50,000
个细胞
/cm2培养所述干细胞
。17.
根据前述权利要求中任一项所述的方法，进一步包括，在
(c)
之前，在所述第一温度下以约
32,000
个细胞
/cm2培养所述干细胞
。18.
根据前述权利要求中任一项所述的方法，进一步包括，在
(c)
之前，将所述干细胞以包含约
10
×
102个活细胞
/mL
至约
10
×
10
10
个活细胞
/mL
的体积包装，并将所述干细胞保持在所述第二温度
。19.
根据前述权利要求中任一项所述的方法，进一步包括，在
(c)
之前，将所述干细胞以包含约
10
×
106个活细胞
/mL
的体积包装，并将所述干细胞保持在所述第二温度
。
20.
根据前述权利要求中任一项所述的方法，进一步包括，在
(c)
之前，将所述干细胞以包含少于
10mL、9mL、8mL、7mL
或
6mL
的体积包装
。21.
根据前述权利要求中任一项所述的方法，进一步包括，在
(c)
之前，将所述干细胞以包含
5mL
的体积包装
。22.
根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中将所述干细胞保持在所述第一温度下在包含一种或多种氨基酸的培养基中
。23.
根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述包含一种或多种氨基酸的培养基进一步包含一种或多种维生素
。24.
根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述包含一种或多种氨基酸的培养基进一步包含表
1。25.
根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述第一时间段是其中所述干细胞未倍增的时间段
。26.
根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述第一时间段是其中所述干细胞经历一次或多次群体倍增的时间段
。27.
根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中在所述第一时间段或所述时间段期间，相对于细胞培养物储存培养基，将所述干细胞保持在小于
80
％的汇合度
。28.
根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中将所述干细胞保持在冲洗培养基中在所述第二温度，其中所述冲洗培养基包含电解质制剂
、
人血清白蛋白
(HSA)
或两者
。29.
根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述干细胞包括椎骨粘附性间充质干细胞
(vBA
‑
MSC)、
椎体骨髓间充质干细胞
(vBM
‑
MSC)
或两者
。30.
根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述干细胞来源于尸体
。31.
根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述干细胞包含至少约
10,000
至约
300,000CFU
‑
F/1
百万可存活细胞
。32.
根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述干细胞包含少于约1％至约
10
％的
CD45+
细胞
。33.
一种用于制备用于直接输注的干细胞的样品的方法，所述方法包括：
a.
提供包含所述干细胞的样品的细胞培养物，其中将所述细胞培养物冷冻保存并传代；
b.
对所述细胞培养物进行解冻；以及
c.
将所述细胞培养物保持在低于
40℃。34.
根据权利要求
33
所述的方法，其中将所述细胞培养物传代至少一次
。35.
根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中在
(b)
之后，所述细胞培养物未倍增
。36.
根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中在
(b)
之后，将所述细胞培养物保持以经历一次或多次群体倍增
。37.
根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中在
(b)
之后，相对于细胞培养物储存培养基，将所述细胞培养物保持在小于
80
％的汇合度
。38.
根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中将所述细胞培养物保持在包含一种或多种氨基酸的培养基中
。39.
根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述包含一种或多种氨基酸的培养
基进一步包含一种或多种维生素
。40.
根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述包含一种或多种氨基酸的培养基进一步包含表
1。41.
根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中将所述细胞培养物传代至少2次
、
至少3次
、
至少4次
、
至少5次
、
至少6次
、
至少7次
、
至少8次
、
至少9次或至少
10
次
。42.
根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中将所述细胞培养物冷冻保存在冷冻保存培养基中，其中所述冷冻保存培养基包含电解质制剂
、
人血清白蛋白
(HSA)、
二甲基亚砜
(DMSO)
或其任何组合
。43.
根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述冷冻保存培养基包含约1％至约5％的
HSA。44.
根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述冷冻保存培养基包含约
2.5
％的
HSA。45.
根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述冷冻保存培养基包含约1％至约
10
％的
DMSO。46.
根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述冷冻保存培养基包含约5％的
DMSO。47.
根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述电解质制剂是勃脉力
A。48.
根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述解冻发生在约
30℃
至约
40℃。49.
根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述解冻发生在约
37℃。50.
根据前述权利要求中任一项所述的方法，进一步包括将所述细胞培养物重新悬浮在冲洗培养基中，其中所述冲洗培养基包含电解质制剂
、
人血清白蛋白
(HSA)
或两者；以及将所述细胞培养物保持在低于室温
51.
根据前述权利要求中任一项所述的方法，进一步包括，在
(c)
之前，将所述细胞培养物重新悬浮在冲洗培养基中，其中所述冲洗培养基包含电解质制剂
、
人血清白蛋白
(HSA)
或两者
。52.
根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述冲洗培养基是新鲜的
。53.
根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述冲洗培养基包含约1％至约5％的
HSA。54.
根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述冲洗培养基包含约
2.5
％的
HSA。55.
根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述电解质制剂是勃脉力
A。56.
根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中将所述细胞培养物保持在低于室温下至少约
30
分钟
。57.
根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中将所述细胞培养物保持在低于室温下至少
12
小时
。58.
根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中将所述细胞培养物保持在低于室温下至少
24
小时
。59.
根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中将所述细胞培养物保持在低于室温下至少
48
小时
。60.
根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中将所述细胞培养物保持在低于
37℃。
61.
根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中将所述细胞培养物保持在低于
35℃。62.
根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中将所述细胞培养物保持在低于
30℃。63.
根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中在
(b)
之后，将所述细胞培养物保持在低温的条件下
。64.
根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中将所述细胞培养物保持在低于
25℃。65.
根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中将所述细胞培养物保持在低于
20℃。66.
根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中将所述细胞培养物保持在约
2℃
至约
8℃。67.
根据前述权利要求中任一项所述的方法，进一步包括以约
10,000
个细胞
/cm2至约
50,000
个细胞
/cm2培养所述细胞培养物
。68.
根据前述权利要求中任一项所述的方法，进一步包括以约
32,000
个细胞
/cm2培养所述细胞培养物
。69.
根据前述权利要求中任一项所述的方法，进一步包括将所述细胞培养物以包含约
10
×
102个活细胞
/mL
至约
10
×
10
10
个活细胞
/mL
的体积包装
。70.
根据前述权利要求中任一项所述的方法，进一步包括将所述细胞培养物以包含约
10
×
106个活细胞
/mL
的体积包装
。71.
根据前述权利要求中任一项所述的方法，进一步包括将所述细胞培养物以包含少于
10mL、9mL、8mL、7mL
或
6mL
的体积包装
。72.
根据前述权利要求中任一项所述的方法，进一步包括将所述细胞培养物以包含
5mL
的体积包装
。73.
根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述干细胞的样品包含至少约
70
％的可存活细胞
。74.
根据前述权利要求中任一项所述的方法...

【专利技术属性】
技术研发人员：埃里克，
申请(专利权)人：奥瑟姆健康公司，
类型：发明
国别省市：