用于骨髓的提取和低温保藏的系统和方法技术方案

提供了用于从获自死亡供体的骨中提取骨髓细胞，用于制备骨髓以供低温保藏，以及用于从低温保藏的新鲜骨髓中获得所需细胞的方法、系统和组合物。系统和组合物。系统和组合物。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于骨髓的提取和低温保藏的系统和方法
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求2020年10月14日提交的美国临时申请号63/091,890；2020年11月6日提交的美国临时申请号63/110,571；2020年12月23日提交的美国临时申请号63/130,255；以及2021年3月30日提交的美国临时申请号63/168,178的权益。所述四件优先权申请各自的整体内容都通过引用而明确地并入本文中。
[0003]关于联邦政府资助的研究的声明
[0004]本专利技术是依照美国国立卫生研究院(National Institutes of Health)的合同号5R44AI129444在美国政府支持下完成的。

技术介绍

[0005]出于临床目的骨髓目前是从HLA匹配的兄弟姐妹或者最佳匹配的非亲属供体采集。其他移植来源现在也被利用，包括不匹配的单倍体相合的亲属或非亲属供体和脐带血(CB)。在移植到患有某些疾病的患者中时，供体骨髓中的造血干细胞(HSC)植入该患者中，并且重建免疫和造血系统。骨髓也是间充质基质/干细胞(MSC)的良好来源，后者是自我更新的多能祖细胞，具有分化为中胚层起源的细胞类型(诸如脂肪细胞、骨细胞和软骨细胞)的多谱系潜力。
[0006]目前，收集骨髓通常是通过用套管针在皮质骨中开孔，然后使用骨髓抽吸针和注射器将骨髓抽入注射器中。通常需要多个注射器从骨中提取足够的骨髓。然后将注射器从无菌区中取出，每个注射器与包含抗凝剂的收集袋相连，并将骨髓推入该袋中。将此步骤重复多次，通常是在两块盆骨中进行，并且可能导致抽吸物的污染。
[0007]认识到，可以从死亡供体中获得全骨髓(BM)。然而，多种障碍阻碍了尸体骨髓的主流使用。一个重要的障碍是找到一种精简的过程来受控地提取和保藏死亡供体的骨髓以及来自该骨髓的细胞产量。关于使用尸体骨的另一问题涉及骨的低温保藏和回收。具体地，该问题涉及可从低温保藏的供体骨中获得的存活的细胞诸如HSC的品质。

技术实现思路

[0008]本公开内容的方面包括一种用于加工包含细胞或其衍生物的生物样品的方法，所述方法包括：产生包含细胞或其衍生物的生物样品的第一体积，其中所述第一体积包含细胞或其衍生物的第一浓度；产生包含细胞或其衍生物的生物样品的第二体积，其中所述第二体积小于所述第一体积并且包含细胞的第二浓度，其中细胞的所述第二浓度与细胞的所述第一浓度相差不超过30％；以及以第一冷却速率冷却所述第一体积并且以第二冷却速率冷却所述第二体积，其中所述第一冷却速率与所述第二冷却速率大约相同；其中所述第一体积中细胞的解冻后细胞增殖速率与所述第二体积中细胞的解冻后增殖速率相差不超过30％。在一些实施方案中，第一体积被容纳在第一容器中，其中第二体积被容纳在第二容器中，并且其中所述第一容器和所述第二容器暴露于共同温度。在一些实施方案中，第二体积小于第一体积的50％。在一些实施方案中，第二体积小于第一体积的40％。在一些实施方案
中，第二体积小于第一体积的37.5％。在一些实施方案中，第二体积小于第一体积的35％。在一些实施方案中，第二体积小于第一体积的30％。在一些实施方案中，第二体积小于第一体积的20％。在一些实施方案中，第二体积小于第一体积的15％。在一些实施方案中，第二体积小于第一体积的10％。在一些实施方案中，第二体积小于第一体积的5％。在一些实施方案中，第二体积小于第一体积的1％。在一些实施方案中，第一体积中细胞的解冻后存活率与第二体积中细胞的解冻后存活率相差不超过30％。在一些实施方案中，第一体积中细胞的解冻后存活率与第二体积中细胞的解冻后存活率相差不超过25％。在一些实施方案中，第一体积中细胞的解冻后存活率与第二体积中细胞的解冻后存活率相差不超过20％。在一些实施方案中，第一体积中细胞的解冻后存活率与第二体积中细胞的解冻后存活率相差不超过15％。在一些实施方案中，第一体积中细胞的解冻后存活率与第二体积中细胞的解冻后存活率相差不超过13.6％。在一些实施方案中，第一体积中细胞的解冻后存活率与第二体积中细胞的解冻后存活率相差不超过10％。在一些实施方案中，第一体积中细胞的解冻后存活率与第二体积中细胞的解冻后存活率相差不超过5％。在一些实施方案中，第一体积中细胞的解冻后细胞增殖速率与第二体积中细胞的解冻后细胞增殖速率相差不超过25％。在一些实施方案中，第一体积中细胞的解冻后细胞增殖速率与第二体积中细胞的解冻后细胞增殖速率相差不超过20％。在一些实施方案中，第一体积中细胞的解冻后细胞增殖速率与第二体积中细胞的解冻后细胞增殖速率相差不超过15％。在一些实施方案中，第一体积中细胞的解冻后细胞增殖速率与第二体积中细胞的解冻后细胞增殖速率相差不超过13.6％。在一些实施方案中，第一体积中细胞的解冻后细胞增殖速率与第二体积中细胞的解冻后细胞增殖速率相差不超过10％。在一些实施方案中，第一体积中细胞的解冻后细胞增殖速率与第二体积中细胞的解冻后细胞增殖速率相差不超过5％。在一些实施方案中，细胞的解冻后存活率为至少50％。在一些实施方案中，细胞的解冻后增殖速率为至少1CFU
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GM/105个细胞。在一些实施方案中，第一冷却速率和第二冷却速率包括约
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0.1℃/min至约
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5℃/min的超冷冻(supra
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freeze)速率，直至至少冰已经在冷冻介质中成核。在一些实施方案中，第一冷却速率和第二冷却速率包括约
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2.5℃/min至约
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4℃/min的超冷冻速率，直至至少冰已经在冷冻介质中成核。在一些实施方案中，第一冷却速率和第二冷却速率包括约
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2.5℃/min至约
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3.5℃/min的超冷冻速率，直至至少冰已经在冷冻介质中成核。在一些实施方案中，第一冷却速率和第二冷却速率包括约
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1℃/min至约
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2℃/min的亚冷冻(sub
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freeze)速率。在一些实施方案中，细胞的解冻后存活率为至少60％。在一些实施方案中，细胞的解冻后存活率为至少70％。在一些实施方案中，细胞的解冻后存活率为至少80％。在一些实施方案中，细胞的解冻后存活率为至少90％。在一些实施方案中，(c)发生在一个或多个冷冻机中。在一些实施方案中，第一容器和第二容器设置在一个或多个冷冻机中的第一冷冻机中。在一些实施方案中，第一容器被容纳在一个或多个冷冻机中的第一冷冻机中，并且第二容器被容纳在一个或多个冷冻机中的第二冷冻机中。在一些实施方案中，一个或多个冷冻机包括静态冷冻机。在一些实施方案中，第一冷冻机、第二冷冻机或二者是静态冷冻机。前述权利要求中任一项所述的方法，其中一个或多个冷冻机包括控速冷冻机。在一些实施方案中，第一冷冻机、第二冷冻机或二者是控速冷冻机。在一些实施方案中，一个或多个冷冻机被设定在约
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70℃至
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90℃。在一些实施方案中，一个或多个冷冻机被设定在低于
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80℃。在一本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种用于加工包含细胞或其衍生物的生物样品的方法，所述方法包括：(a)产生所述包含细胞或其衍生物的生物样品的第一体积，其中所述第一体积包含细胞或其衍生物的第一浓度；(b)产生所述包含细胞或其衍生物的生物样品的第二体积，其中所述第二体积小于所述第一体积并且包含所述细胞的第二浓度，其中所述细胞的所述第二浓度与所述细胞的所述第一浓度相差不超过30％；以及(c)以第一冷却速率冷却所述第一体积并且以第二冷却速率冷却所述第二体积，其中所述第一冷却速率与第二冷却速率大约相同；其中所述第一体积中所述细胞的解冻后细胞增殖速率与所述第二体积中所述细胞的解冻后增殖速率相差不超过30％。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述第一体积被容纳在第一容器中，其中所述第二体积被容纳在第二容器中，并且其中所述第一容器和所述第二容器在所述第一冷却速率和所述第二冷却速率的时期期间位于相同的冷冻机中。3.根据权利要求1或权利要求2所述的方法，其中所述第二体积小于所述第一体积的50％、小于所述第一体积的40％、小于所述第一体积的37.5％、小于所述第一体积的35％、小于所述第一体积的30％、小于所述第一体积的20％、小于所述第一体积的15％、小于所述第一体积的10％、小于所述第一体积的5％，或者小于所述第一体积的1％。4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述第一体积中所述细胞的解冻后存活率与所述第二体积中所述细胞的解冻后存活率相差不超过30％、不超过25％、不超过20％、不超过15％、不超过13.6％、不超过10％，或者不超过5％。5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中所述第一体积中所述细胞的解冻后细胞增殖速率与所述第二体积中所述细胞的解冻后增殖速率相差不超过25％、不超过20％、不超过15％、不超过13.6％、不超过10％，或者不超过5％。6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中所述细胞的所述解冻后存活率为至少50％。7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中所述细胞的所述解冻后增殖速率为至少1CFU
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GM/105个细胞。8.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述第一冷却速率和所述第二冷却速率包括约
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0.1℃/min至约
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5℃/min的超冷冻速率，直至至少冰已经在冷冻介质中成核。9.根据权利要求1至8中任一项所述的方法，其中所述第一冷却速率和所述第二冷却速率包括约
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2.5℃/min至约
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4℃/min、约
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2.5℃/min至约
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3.5℃/min或者约
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1℃/min至约
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2℃/min的超冷冻速率，直至至少当冰已经在冷冻介质中成核时。10.根据权利要求1至9中任一项所述的方法，其中所述第一冷却速率和所述第二冷却速率包括约
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1℃/min的超冷冻速率。11.根据权利要求1至10中任一项所述的方法，其中所述细胞的所述解冻后存活率为至少60％、至少70％、至少80％或者至少90％。12.根据权利要求1至11中任一项所述的方法，其中步骤(c)发生在一个冷冻机中。13.根据权利要求1至12中任一项所述的方法，其中所述第一容器和所述第二容器设置在所述冷冻机的搁架中。
14.根据权利要求1至13中任一项所述的方法，其中所述冷冻机是静态冷冻机。15.根据权利要求1至14中任一项所述的方法，其中所述冷冻机包括控速冷冻机。16.根据权利要求1至15中任一项所述的方法，其中所述冷冻机被设定在约
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70℃至
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90℃。17.根据权利要求1至16中任一项所述的方法，其中所述冷冻机被设定在低于
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80℃。18.根据权利要求1至17中任一项所述的方法，其中所述冷冻机被设定在
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86℃。19.根据权利要求1至18中任一项所述的方法，其中所述第二体积被直接置于隔热容器中。20.根据权利要求1至19中任一项所述的方法，其中所述方法还包括将所述第一体积和/或所述第二体积布置在所述静态冷冻机内，使得所述第一体积和/或所述第二体积不接触所述冷冻机的壁。21.根据权利要求1至20中任一项所述的方法，其中在所述第一体积中的所述包含细胞或其衍生物的生物样品和在所述第二体积中的所述包含细胞或其衍生物的生物样品经历相同的冷却速率。22.根据权利要求1至21中任一项所述的方法，其中所述细胞是干细胞或免疫细胞。23.根据权利要求22所述的方法，其中所述干细胞包括造血干细胞(HSC)、间充质干细胞(MSC)或二者。24.根据权利要求1至23中任一项所述的方法，其中所述生物样品包含一种或多种器官、血液或二者。25.根据权利要求22所述的方法，其中所述免疫细胞包括T细胞。26.根据权利要求24所述的方法，其中所述血液是脐带血或外周血。27.根据权利要求24或权利要求26所述的方法，其中所述血液是脐带血或外周血。28.根据权利要求1至27中任一项所述的方法，其中所述生物样品包含血浆或血清。29.根据权利要求23所述的方法，其中所述HSC包括CD34+细胞。30.根据权利要求1至29中任一项所述的方法，还包括将所述第一体积和所述第二体积转移至长期贮藏容器的步骤。31.根据权利要求30所述的方法，其中所述长期贮藏容器低于
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86℃。32.一种用于加工包含细胞或其衍生物的生物样品的方法，所述方法包括：(a)产生所述包含细胞或其衍生物的生物样品的第一体积，其中所述第一体积包含细胞或其衍生物的第一浓度；(b)产生所述包含细胞或其衍生物的生物样品的第二体积，其中所述第二体积小于所述第一体积并且包含所述细胞的第二浓度，其中所述细胞的所述第二浓度与所述细胞的所述第一浓度相差不超过30％；(c)产生对所述细胞特定的冷冻曲线；(d)以第一冷却速率冷却所述第一体积，其中所述第一冷却速率根据所述冷冻曲线而产生；以及(e)以第二冷却速率冷却所述第二体积，其中所述第一冷却速率根据所述冷冻曲线而产生；其中所述第一冷却速率与所述第二冷却速率大约相同，并且其中所述第一体积中所述
细胞的解冻后细胞增殖速率与所述第二体积中所述细胞的解冻后增殖速率相差不超过30％。33.根据权利要求32所述的方法，其中所述第一体积被容纳在第一容器中，其中所述第二体积被容纳在第二容器中，并且其中所述第一容器和所述第二容器在所述第一冷却速率和所述第二冷却速率的时期期间位于相同的冷冻机中。34.根据权利要求32或权利要求33所述的方法，其中所述第二体积小于所述第一体积的50％、小于所述第一体积的40％、小于所述第一体积的37.5％、小于所述第一体积的35％、小于所述第一体积的30％、小于所述第一体积的20％、小于所述第一体积的15％、小于所述第一体积的10％、小于所述第一体积的5％，或者小于所述第一体积的1％。35.根据权利要求32至34中任一项所述的方法，其中所述第一体积中所述细胞的解冻后存活率与所述第二体积中所述细胞的解冻后存活率相差不超过30％、不超过25％、不超过20％、不超过15％、不超过13.6％、不超过10％，或者不超过5％。36.根据权利要求32至35中任一项所述的方法，其中所述第一体积中所述细胞的解冻后细胞增殖速率与所述第二体积中所述细胞的解冻后增殖速率相差不超过25％、不超过20％、不超过15％、不超过13.6％、不超过10％，或者不超过5％。37.根据权利要求32至36中任一项所述的方法，其中所述细胞的所述解冻后存活率为至少50％。38.根据权利要求32至37中任一项所述的方法，其中所述细胞的所述解冻后增殖速率为至少1CFU
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GM/105个细胞。39.根据权利要求32至38中任一项所述的方法，其中所述第一冷却速率和所述第二冷却速率包括约
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0.1℃/min至约
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5℃/min的超冷冻速率，直至至少冰已经在冷冻介质中成核。40.根据权利要求32至39中任一项所述的方法，其中所述第一冷却速率和所述第二冷却速率包括约
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2.5℃/min至约
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4℃/min、约
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2.5℃/min至约
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3.5℃/min或者约
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1℃/min至约
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2℃/min的超冷冻速率，直至至少当冰已经在冷冻介质中成核时。41.根据权利要求32至40中任一项所述的方法，其中所述第一冷却速率和所述第二冷却速率包括约
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1℃/min的超冷冻速率。42.根据权利要求32至41中任一项所述的方法，其中所述细胞的所述解冻后存活率为至少60％、至少70％、至少80％或者至少90％。43.根据权利要求32至42中任一项所述的方法，其中步骤(c)发生在一个冷冻机中。44.根据权利要求32至43中任一项所述的方法，其中所述第一容器和所述第二容器设置在所述冷冻机的搁架中。45.根据权利要求32至44中任一项所述的方法，其中所述冷冻机是静态冷冻机。46.根据权利要求32至45中任一项所述的方法，其中所述冷冻机包括控速冷冻机。47.根据权利要求32至46中任一项所述的方法，其中所述冷冻机被设定在约
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70℃至
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90℃。48.根据权利要求32至47中任一项所述的方法，其中所述冷冻机被设定在低于
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80℃。49.根据权利要求32至48中任一项所述的方法，其中所述冷冻机被设定在
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86℃。50.根据权利要求32至49中任一项所述的方法，其中所述第二体积被直接置于隔热容
器中。51.根据权利要求32至50中任一项所述的方法，其中所述方法还包括将所述第一体积和/或所述第二体积布置在所述静态冷冻机内，使得所述第一体积和/或所述第二体积不接触所述冷冻机的壁。52.根据权利要求32至51中任一项所述的方法，其中在所述第一体积中的所述包含细胞或其衍生物的生物样品和在所述第二体积中的所述包含细胞或其衍生物...

【专利技术属性】
技术研发人员：埃里克，
申请(专利权)人：奥瑟姆健康公司，
类型：发明
国别省市：