一种山羊精子生物膜保护剂及其应用方法技术

本发明专利技术公开了一种山羊精子生物膜保护剂及其应用方法，山羊精子生物膜保护剂包括以下组分：

【技术实现步骤摘要】
一种山羊精子生物膜保护剂及其应用方法


[0001]本专利技术涉及山羊精液保存液
，具体涉及一种山羊精子生物膜保护剂及其应用方法
。

技术介绍

[0002]现代养羊业向集约化
、
规模化发展，优秀种公畜的缺乏成为羊生产的重要限制
。
精液冷冻保存技术能够长期保存精子，是提高优秀种质资源利用率主要措施之一，为生产带来更高的经济价值
。
[0003]生物膜结构的完整性对精子十分重要，它关乎着精子的细胞间通讯
、
代谢
、
精卵融合和调节性死亡等
。
在精液冷冻恢复过程中，精子会受到活性氧诱导的氧化损伤，造成精子生物膜结构（包括质膜
、
顶体膜和线粒体膜）不可逆的损害
。
精子生物膜含有大量的多不饱和脂肪酸，极易受到活性氧的攻击，由于精子缺乏胞质抗氧化剂，并且精子高度致密的染色质无法产生基因组抗氧化反应，故研究一种保护精子生物膜结构完整性的保护剂成为必然
。
[0004]目前，关于精子的稀释液
、
保护剂的研究，大多是与精子的活力
、
营养物质需求
、
抗菌和渗透压等相关，而针对精子生物膜结构完整性的保护剂研究至今未见报道
。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是为了克服现有技术存在的不足，提供一种山羊精子生物膜保护剂，旨在抵抗羊精子质膜
、
顶体膜和线粒体膜在冷冻恢复过程中造成的氧化损伤
。
[0006]本专利技术是通过以下技术方案实现的：一种山羊精子生物膜保护剂，包括以下组分：
0.036g/ml Tris
（三羟甲基氨基甲烷）
、0.01g/ml
葡萄糖
、0.02g/ml
柠檬酸
、
体积分数
6%
甘油
、
体积分数
1%
青链霉素合剂
、20
μ
g/ml
过氧化物酶
‑
6、10
‑
30
μ
g/ml
谷胱甘肽过氧化物酶5及超纯水
。
[0007]所述谷胱甘肽过氧化物酶5含有
20
μ
g/ml。
[0008]本专利技术的另一目的在于提供一种山羊精子生物膜保护剂的应用方法，包括如下步骤：1）配制保护剂：
0.036g/ml Tris、0.01g/ml
葡萄糖
、0.02g/ml
柠檬酸
、
体积分数
6%
甘油
、
体积分数
1%
青链霉素合剂
、20
μ
g/ml
过氧化物酶
‑
6、10
‑
30
μ
g/ml
谷胱甘肽过氧化物酶5，依次加入超纯水中溶解，并定容，配制成山羊精子生物膜保护剂，通过针头式过滤器转移到试剂瓶中密封，
4℃
储存；2）精液采集：采用假阴道采集法，全程无菌操作，完成采精后，马上竖立假阴道，避免精液倒流，将采集的新鲜精液进行 37℃
保温，并送至实验室；3）精液稀释：取按无菌操作要求采集的精液，鲜精活力达到 75%
以上，快速直线运动在
50%
以上的精液供使用；取山羊精子生物膜保护剂，使山羊精子生物膜保护剂升温至
37℃
，将精液加入到山羊精子生物膜保护剂中，按照精液与山羊精子生物膜保护剂体积比1：
10
稀释，稀释后混匀；4）精液冷冻：在
4℃
恒温冰箱中降温
2h
，降温后，将精液装入
0.25ml
细管中，在平衡
1h
后，移到距离液氮面
4cm
处，熏蒸
7min
后，迅速投入到液氮中，进行冷冻保存；5）精液解冻：从液氮中取出冷冻细管后，投入到
37℃
水浴锅中，解冻
30s
，待使用
。
[0009]本专利技术的有益效果是：本专利技术可以抵抗精子生物膜在冷冻恢复过程中受到的氧化损伤，使精子发挥正常的生理功能
。
采用本专利技术保存精液较用常规稀释液，在同等条件下，精子质膜完整性提高
27.6%
，顶体膜完整性提高
15.3%
，线粒体膜电位提高
47.2%。
本专利技术的山羊精子生物膜保护剂能充分提高种公羊的利用率，有利于开展家畜改良育种工作
。
附图说明
[0010]图1为山羊精子生物膜保护剂对精子质膜完整性的影响；图2为山羊精子生物膜保护剂对精子顶体膜完整性的影响；图3为山羊精子生物膜保护剂对线粒体膜电位的影响
。
实施方式
[0011]下面结合具体实施例详细描述本专利技术，这些实施例用于理解而不是限制本专利技术
。
[0012]实施例 山羊精子生物膜保护剂在绒山羊精液冷冻恢复过程中对精子生物膜结构的影响试验动物本试验所用绒山羊精液来自内蒙古金莱牧业科技有限责任公司，选用2岁成年公羊4只，要求身体健康
、
无疾病
、
饲养管理统一
。
[0013]试验方法1）保护剂配制：对照组：取
Tris1.8g、
葡糖糖
0.5g、
柠檬酸
1g、
甘油
3ml、
青链霉素合剂
0.5ml
，用超纯水分别溶解，并定容至
50ml
，通过
0.22 μ
m
滤器转移到试剂瓶中密封，
4℃
冰箱中储存，一周内使用
。
[0014]实验组1：取
Tris1.8g、
葡糖糖
0.5g、
柠檬酸
1g、
甘油
3ml、
青链霉素合剂
0.5ml、
过氧化物酶
‑
6 0.5mg
和谷胱甘肽过氧化物酶
0.5mg
，用超纯水分别溶解，并定容至
50ml
，通过
0.22 μ
m
滤器转移到试剂瓶中密封，
4℃
冰箱中储存，一周内使用
。
[0015]实验组2：取
Tris1.8g、
葡糖糖
0.5g、
柠檬酸
1g、
甘油
3ml、
青链霉素合剂
0.5ml、
过氧化物酶
‑
6 1mg
和谷胱甘肽过氧化物酶
0.5mg
，用超纯水分别溶解，并定容至
50ml
，通过
0.22 μ
m
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种山羊精子生物膜保护剂，其特征在于包括以下组分：
0.036g/ml Tris、0.01g/ml
葡萄糖
、0.02g/ml
柠檬酸
、
体积分数
6%
甘油
、
体积分数
1%
青链霉素合剂
、20
μ
g/ml
过氧化物酶
‑
6、10
‑
30
μ
g/ml
谷胱甘肽过氧化物酶5及超纯水
。2.
根据权利要求1所述的一种山羊精子生物膜保护剂，其特征在于：所述谷胱甘肽过氧化物酶5含有
20
μ
g/ml。3.
根据权利要求2所述的一种山羊精子生物膜保护剂的应用方法，其特征在于包括如下步骤：1）配制保护剂：
0.036g/ml Tris、0.01g/ml
葡萄糖
、0.02g/ml
柠檬酸
、
体积分数
6%
甘油
、
体积分数
1%
青链霉素合剂
、20
μ
g/ml
过氧化物酶...

【专利技术属性】
技术研发人员：张家新，海尔汗，白雪，宋宇坤，张健，
申请(专利权)人：内蒙古农业大学，
类型：发明
国别省市：